TÌNH HÌNH BỆNH CARRE’ TRÊN CHÓ TẠI THÀNH PHỐ LONG XUYÊN VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ HỖ TRỢ CỦA INTERFERON LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y

ỦY BAN NHÂN DÂN TỈNH TRÀ VINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH LÊ THỊ THÚY LOAN TÌNH HÌNH BỆNH CARRE’ TRÊN CHÓ TẠI THÀNH PHỐ LONG XUYÊN VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ HỖ TRỢ CỦA INTERFERON LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y TRÀ VINH, NĂM 2020 TÀI LIỆU SỐ HÓA PHỤC VỤ TRUY CẬP NỘI BỘ ISO 9001:2015 ỦY BAN NHÂN DÂN TỈNH TRÀ VINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH LÊ THỊ THÚY LOAN TÌNH HÌNH BỆNH CARRE’ TRÊN CHĨ TẠI THÀNH PHỐ LONG XUYÊN VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ HỖ TRỢ CỦA INTERFERON Ngành: THÚ Y Mã ngành: 8640101 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN NGỌC BÍCH TRÀ VINH, NĂM 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực chưa có cơng bố cơng trình luận văn trước Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Trà Vinh, ngày 02 tháng 12 năm 2020 Lê Thị Thúy Loan i TÀI LIỆU SỐ HÓA PHỤC VỤ TRUY CẬP NỘI BỘ Học viên thực LỜI CẢM ƠN Trước hết xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu Trường Đại học Trà Vinh, Ban Chủ nhiệm Khoa Nông nghiệp - Thủy sản, Bộ môn Chăn nuôi - Thú y, Q Thầy, Cơ tận tình giảng dạy, giúp đỡ truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm q báo cho tơi Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Trần Ngọc Bích trực tiếp hướng dẫn, người Thầy bảo, giúp đỡ nhiệt tình khơng việc làm luận văn mà cịn chia sẻ kiến thức chun mơn, đồng thời Thầy tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận văn Xin chân thành cám ơn Quý Thầy, Cô hội đồng chấm đề cương chi tiết góp ý cho ý kiến vô quý giá để hồn thiện luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn đến PGS TS Võ Văn Thắng, Hiệu trưởng trường Đại học An Giang; Thầy Phan Trung Dũng, Trưởng Phòng Quản Trị Thiết Bị; Thầy Trần Văn Răng TS Lý Ngọc Thanh Xuân, Trưởng - Phó Bộ phận Thí Nghiệm Thực hành hỗ trợ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành chương trình học Xin gởi lời cám ơn chân thành đến TS Nguyễn Thế Thao, Trưởng Bộ môn Chăn nuôi Thú y; bạn bè, đồng nghiệp công tác trường Đại học An Giang; đồng nghiệp Phòng mạch Thú y Cộng Đồng thành phố Long Xuyên, An Giang, động viên, khích lệ giúp đỡ tơi suốt q trình thực hồn thành luận văn Tôi xin dành tất yêu thương lời cám ơn đến gia đình, cha mẹ, anh chị em người thân ủng hộ, chia sẻ buồn vui sống để tơi an tâm hồn thành khố học Tơi khơng qn gởi lời cám ơn đến thành viên lớp Cao học Thú Y Khóa ln gần gủi, chia sẻ giúp đỡ tơi gặp khó khăn Xin chân thành cám ơn! ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh sách bảng vii Danh sách hình viii Tóm tắt ix PHẦN MỞ ĐẦU 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 2.1 Mục tiêu chung 2.2 Mục tiêu cụ thể CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ NGỒI NƯỚC VỀ BỆNH CARRÉ TRÊN CHÓ 1.1.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.1.2 Tình hình nghiên cứu nước 1.2 BỆNH CARRÉ TRÊN CHÓ 1.2.1 Virus học 1.2.1.1 Phân loại virus gây bệnh Carré 1.2.1.2 Hình thái, cấu trúc virus gây bệnh Carré 1.2.1.3 Sức đề kháng virus Carré 11 1.2.1.4 Đặc tính ni cấy 12 1.2.1.5 Cơ chế sinh bệnh 12 1.2.2 Đặc điểm dịch tễ bệnh Carré 12 1.2.2.1 Lịch sử phân bố địa lý 12 1.2.2.2 Loài vật mắc bệnh lứa tuổi mắc bệnh 13 1.2.2.3 Mùa cảm nhiễm 13 1.2.2.4 Chất chứa virus 13 1.2.2.5 Đường xâm nhập phương thức lây lan 14 iii TÀI LIỆU SỐ HÓA PHỤC VỤ TRUY CẬP NỘI BỘ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.2.2.6 Sinh bệnh học 14 1.2.2.7 Tỷ lệ ốm tỷ lệ chết 14 1.2.3 Triệu chứng bệnh Carré 14 1.2.4 Bệnh tích bệnh Carré 15 1.3 CHẨN ĐOÁN BỆNH 16 1.3.1 Chẩn đoán lâm sàng 16 1.3.2 Chẩn đoán phịng thí nghiệm 16 1.4 PHÒNG BỆNH 18 1.4.1 Phòng bệnh vệ sinh 18 1.4.2 Phòng bệnh tiêm phòng vaccine 19 1.5 ĐIỀU TRỊ BỆNH CARRÉ 20 1.5.1 Dùng kháng huyết 20 1.5.2 Liệu pháp truyền dịch 20 1.5.3 Phòng ngừa nhiễm khuẩn kế phát 21 1.5.4 Điều trị triệu chứng 21 1.5.5 Tăng cường sức đề kháng trợ lực 22 1.5.6 Interferon 23 1.6 KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ GEN 24 1.6.1 Giải trình tự gen theo phương pháp Maxam Gilbert 24 1.6.2 Giải trình tự gen theo phương pháp Dideoxy 25 1.6.3 Giải trình tự gen máy tự động 26 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 28 2.2 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 28 2.2.1 Thời gian thực 28 2.2.2 Địa điểm 28 2.2.3 Vật liệu 28 2.2.4 Đối tượng nghiên cứu 28 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.3.1 Nội dung 1: Khảo sát đặc điểm dịch tễ chó mắc bệnh Carré đem đến phòng khám thú y địa bàn thành phố Long Xuyên - An Giang 29 2.3.2 Nội dung 2: Giải trình tự gen phân tích đoạn gen H 32 iv 2.3.3 Nội dung 3: Đánh giá hiệu điều trị bệnh Carré phòng khám thú y Cộng Đồng địa bàn thành phố Long Xuyên 36 2.3.4 Các tiêu theo dõi 37 2.4 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 38 CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN 39 3.1 KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ CỦA CHÓ MẮC BỆNH CARRÉ ĐƯỢC ĐEM ĐẾN PHÒNG KHÁM THÚ Y TRÊN ĐỊA BÀN THÀNH PHỐ LONG XUYÊN - AN GIANG 39 3.1.1 Tỷ lệ mắc bệnh Carré chó 39 3.1.2 Tỷ lệ chó mắc bệnh Carré theo lứa tuổi 40 3.1.3 Tỷ lệ chó mắc bệnh Carré theo phương thức nuôi 41 3.1.5 Xác định tỷ lệ nhiễm chó tiêm phịng chó khơng tiêm phịng 43 3.1.6 Tần suất xuất triệu chứng lâm sàng điển hình chó bệnh Carré 44 3.2 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN H CỦA VIRUS GÂY BỆNH CARRÉ 45 3.2.1 So sánh mức độ tương đồng trình tự nucleotide virus Carré 46 3.2.2 So sánh mức độ tương đồng trình tự amino acid virus Carré 47 3.2.3 Phân tích, xây dựng sinh học phân tử 47 3.3 HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ BỆNH CARRÉ TRÊN CHÓ 50 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 KẾT LUẬN 52 ĐỀ NGHỊ 52 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHỤ LỤC v TÀI LIỆU SỐ HÓA PHỤC VỤ TRUY CẬP NỘI BỘ 3.1.4 Tỷ lệ mắc bệnh Carré chó theo nhóm giống 42 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Chữ viết đầy đủ Nghĩa tiếng việt Ab Antibody Kháng thể Ag Antigen Kháng nguyên CDV Canine distemper virus Virus Carre Cộng tác viên ctv ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch Assay liên kết với enzyme H Haemagglutinin mRNA Messenger Ribonucleic acid RT-PCR TCID50 Reverse Transcriptase Polymerase Phản ứng chuỗi Polymerase Chain Reaction phiên ngược Tissue Culture Infectious Dose 50 Liều gây nhiễm 50% tế bào nuôi cấy Tần số hô hấp TSHH vi DANH SÁCH BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang Bảng 2.1 Danh sách chủng virus Carré GenBank sử dụng phân tích so sánh nghiên cứu 35 Bảng 2.2 Phác đồ điều trị cho chó mắc bệnh Carré 36 Bảng 3.1 Tỷ lệ chó mắc bệnh Carré đem đến phòng khám địa bàn thành phố Long Xuyên 39 Bảng 3.2 Tỷ lệ chó mắc bệnh Carré theo nhóm tuổi 34 Bảng 3.3 Tỷ lệ chó mắc bệnh Carré theo phương thức nuôi 41 Bảng 3.4 Tỷ lệ chó mắc bệnh Carré theo giống 42 Bảng 3.6 Tần suất triệu chứng lâm sàng quan trọng xuất chó bệnh Carré (n=96) 44 Bảng 3.7 Sự tương đồng trình tự nucleotide (dưới đường chéo) amino acid (trên đường chéo) gen H chủng virus nghiên cứu số chủng khác GenBank 46 Bảng 3.8 Kết điều trị khả phục hồi bệnh trình điều trị 50 vii TÀI LIỆU SỐ HÓA PHỤC VỤ TRUY CẬP NỘI BỘ Bảng 3.5 Tỷ lệ nhiễm bệnh chó tiêm phịng chưa tiêm phịng 43 DANH SÁCH HÌNH Số hiệu hình Tên hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc virus Carré 10 Hình 2.1 Sơ đồ quy trình chẩn đốn bệnh Phòng khám thú y Cộng Đồng địa bàn thành phố Long Xuyên - An Giang 31 Hình 2.2 Bộ test Canine Distemper Virus Antigen 31 Hình 2.3 Thiết bị dùng xét nghiệm nhanh 31 Hình 3.1 Chó bị chảy ghèn khóe mắt 43 Hình 3.2 Bàn chân chó bị sừng hóa 45 Hình 3.3 Điện di sản phẩm PCR chủng CDV nghiên cứu 44 Hình 3.4 Cây sinh học phân tử dựa trình tự nucleotide gen H chủng virus Carré nghiên cứu 48 viii TÓM TẮT Đề tài tiến hành phòng khám Thú y Cộng Đồng, thành phố Long Xuyên, An Giang từ tháng 12 năm 2019 đến tháng năm 2020 Đề tài thực phương pháp điều tra cắt ngang 840 chó ni khu vực thành phố Long Xuyên mang đến phòng khám Thú y Cộng Đồng khám bệnh Mục tiêu đề tài xác định tỷ lệ chó mắc bệnh qua triệu chứng đặc trưng đánh giá hiệu phác đồ điều trị bệnh Carré sau xác định dương tính với CDV kit Asan easy test Distemper (Asan Pharmaceutical Co., Ltd; Hàn Quốc) Kết cho thấy, có 365/840 chó có triệu chứng lâm sàng nghi ngờ mắc bệnh Carré (43,45%), xét nghiệm cận lâm sàng kit xét nghiệm nhanh xác định có 96 nhiễm virus tháng tuổi với tỷ lệ 52,54%, tiếp đến chó lớn 60 tháng tuổi (chiếm 25,68%) chó giai đoạn 24 – 60 tháng tuổi có tỷ lệ mắc bệnh 10,84% thấp giai đến 24 tháng tuổi với tỷ lệ 6,67% Tỷ lệ mắc bệnh chó ni nhốt (13,95%) thấp chó ni với phương thức thả rong (30,11%) Chó tiêm vaccine đủ liều có tỷ lệ mắc bệnh 30,21%, thấp so với chó khơng tiêm phịng (69,79%) Kết phân tích đoạn gen khuếch đại cho thấy mức độ tương đồng trình tự nucleotide với từ 99,11 - 99,89%, mức độ tương đồng chủng virus thực địa so với đoạn gen H chủng CDV từ GenBank, mức độ tương đồng đạt 88,57 - 98,55% Mức độ tương đồng amino acid đoạn gen H chủng virus thực địa cao (99,17 - 100%) mức độ tương đồng amino acid chủng CDV thực địa so với amino acid chủng CDV từ GenBank 88,57 - 99,83% Phân tích phát sinh lồi cho thấy chủng CDV thành phố Long Xuyên, tỉnh An Giang thuộc kiểu gen Asia Chó xác định dương tính với CDV, tiến hành điều trị phác đồ, hiệu điều trị phác đồ (87,50%) cao hiệu điều trị phác đồ (54,16%) Từ khóa: Bệnh Carré, chó, Long Xuyên, phả hệ, phác đồ ix TÀI LIỆU SỐ HÓA PHỤC VỤ TRUY CẬP NỘI BỘ Carré chiếm tỷ lệ 26,30% 365 chó nghi nhiễm Tỷ nhiễm bệnh cao chó nhỏ PHẦN MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Chó vật ni thân thiết, gần gũi, gắn bó với người suốt chiều dài lịch sử phát triển xã hội lồi người, hóa cách khoảng 15.000 năm từ số lồi chó sói sống hoang dã hầu hết Châu lục Chó hóa với mục đích giúp người săn bắt thú giữ nhà Ngày nay, chó ni với mục đích khác như: Ni làm cảnh, kinh doanh, điều tra phá án bảo vệ an ninh biên giới, đồng thời chó cịn người bạn thân thiết với người (Phạm Sỹ Lăng ctv., 2006) Theo ước tính Cục Thú Y Việt Nam năm 2017, tổng đàn chó nước ổn định nhiều năm với số lượng khoảng triệu với nhiều giống khác Mặt khác, mở rộng hội nhập nước làm cho giống chó Việt Nam ngày trở nên phong phú đa dạng Bên cạnh với việc gia tăng số lượng chó vấn đề bệnh tật trở nên phức tạp hơn, bệnh virus gây gia tăng đáng kể như: Parvovirus chiếm 46,58% (Lê Minh Thành, 2009), Carré chiếm 68,48% (Nguyễn Thị Thúy An, 2009) Đặc biệt, vào thời điểm giao mùa từ mùa xuân sang mùa hạ bệnh Carré bệnh phổ biến Bệnh Carré chó bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm thường xảy chó con, lây lan nhanh, có tỷ lệ chết cao chi phí điều trị tốn (Trần Thanh Phong, 1996; Bùi Trần Anh Đào, 2013) Có hai thể bệnh Canine distemper virus (CDV) gây thể cấp tính bán cấp tính với diễn biến phức tạp, làm ảnh hưởng lớn đến sức khỏe chó bệnh (Moritz et al., 2000) Chẩn đốn sớm, nhanh xác cần thiết để cách ly điều trị sớm chó bị nhiễm bệnh, từ giảm tỷ lệ lây lan tỷ lệ tử vong (Kim et al., 2006) CDV có serotype nhất, nhiên dựa trình tự nucleotid đoạn gen H (Hemagglutinin), người ta chia thành type virus lớn phân lập từ vùng địa lý khác nhau: Asia 1, Asia 2, Bắc Cực, châu Âu, USA 2, cổ điển (Lan et al., 2006a,b) Đoạn gen H CDV đóng vai trị quan trọng việc biến đổi di truyền chủng virus (Hashimoto et al., 2001) Vì việc tìm hiểu gen H CDV nhằm giúp hiểu rõ tính đa dạng di truyền, dịch tễ học phân tử cung cấp thêm thông tin nguồn gốc virus thực địa Xuất phát từ thực tế trên, nghiên cứu tiến hành thực đề tài: “Tình hình bệnh carré chó thành phố Long Xuyên hiệu điều trị hỗ trợ Interferon” MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu chung Tình hình chó mắc bệnh thử nghiệm hiệu điều trị bệnh Carré phòng khám thú y địa bàn thành phố Long Xuyên, tỉnh An Giang 2.2 Mục tiêu cụ thể Mục tiêu nghiên cứu là: - Xác định tỷ lệ chó mắc bệnh Carré qua khám lâm sàng phương pháp chẩn đoán nhanh test kháng nguyên - Xác định tính đa dạng di truyền CDV qua phân tích đoạn gen H - Đánh giá hiệu điều trị bệnh Carré phòng khám thú y địa bàn thành phố Long Xuyên TÀI LIỆU SỐ HÓA PHỤC VỤ TRUY CẬP NỘI BỘ CDV  ...? ?Y BAN NHÂN DÂN TỈNH TRÀ VINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC TRÀ VINH LÊ THỊ TH? ?Y LOAN TÌNH HÌNH BỆNH CARRE’ TRÊN CHÓ TẠI THÀNH PHỐ LONG XUYÊN VÀ HIỆU QUẢ ĐIỀU TRỊ HỖ TRỢ CỦA INTERFERON Ngành: THÚ Y Mã ngành:... thực tế trên, nghiên cứu tiến hành thực đề tài: ? ?Tình hình bệnh carré chó thành phố Long Xuyên hiệu điều trị hỗ trợ Interferon? ?? MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu chung Tình hình chó mắc bệnh thử... lồi cho th? ?y chủng CDV thành phố Long Xuyên, tỉnh An Giang thuộc kiểu gen Asia Chó xác định dương tính với CDV, tiến hành điều trị phác đồ, hiệu điều trị phác đồ (87,50%) cao hiệu điều trị phác