Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.

Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm của rễ củ Tam thất (Panax Notoginseng (Burk.) F.H. Chen, Araliaceae) trồng ở Việt Nam.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU BÙI THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG U THỰC NGHIỆM CỦA RỄ CỦ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F.H CHEN, ARALIACEAE) TRỒNG Ở VIỆT NAM TRƯỚC VÀ SAU CHẾ BIẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU BÙI THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KHÁNG U THỰC NGHIỆM CỦA RỄ CỦ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F.H CHEN, ARALIACEAE) TRỒNG Ở VIỆT NAM TRƯỚC VÀ SAU CHẾ BIẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 972.02.05 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Vũ Mạnh Hùng GS TS Nguyễn Thanh Hải HÀ NỘI, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận án “Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm rễ củ Tam thất (Panax notoginseng (Burk.) F.H Chen, Araliaceae) trồng Việt Nam trước sau chế biến” cơng trình nghiên cứu tơi với hướng dẫn khoa học tập thể thầy hướng dẫn Các số liệu, kết nêu luận án trung thực công bố báo khoa học nhóm nghiên cứu Luận án chưa công bố, không trùng lặp với luận văn, luận án cơng trình nghiên cứu khoa học tác giả khác Nếu có điều sai tơi hồn tồn chịu trách nhiệm Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2022 Tác giả Bùi Thị Thu Hà LỜI CẢM ƠN Trong trình thực Luận án này, nhận nhiều giúp đỡ, động viên từ thầy cô giáo, đồng nghiệp, gia đình bạn bè Lời đầu tiên, tơi xin trân trọng gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy hướng dẫn PGS TS Vũ Mạnh Hùng - nguyên Chủ nhiệm Bộ môn Dược lý, Học viện Quân y GS TS Nguyễn Thanh Hải - Phó Hiệu trưởng trường Đại học Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, hết lòng hướng dẫn, bảo, định hướng, giúp đỡ từ ngày trình học tập, nghiên cứu thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn cán bộ, nhân viên Khoa phân tích-tiêu chuẩn, Viện Dược liệu; cán bộ, kỹ thuật viên B ộ môn D ược lý - H ọc vi ện Quân y, hết lòng giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập, cơng tác Tơi xin trân trọng cảm ơn Lãnh đạo Viện Dược liệu, Thủ trưởng Bệnh viện 19-8 Bệnh viện Y học Cổ truyền - Bộ Công an tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập thực luận án Từ đáy lịng mình, xin cảm ơn gia đình, cảm ơn chồng, con, bố mẹ hai bên tồn thể gia đình ln tin tưởng, động viên, chia sẻ, ủng hộ giúp đỡ lúc, nơi Xin cảm ơn tất người thân, bạn bè, đồng nghiệp ủng hộ, giúp đỡ tơi q trình thực luận án Xin trân trọng cảm ơn! Bùi Thị Thu Hà MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, Đ Ồ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH UNG THƯ 1.1.1 Tình hình ung thư giới Việt Nam 1.1.2 Ung thư với đáp ứng miễn dịch 1.2 TỔNG QUAN VỀ TAM THẤT 11 1.2.1 Tổng quan thực vật 11 1.2.2 Hóa thực vật rễ củ Tam thất .14 1.2.3 Các tác dụng dược lý Tam thất 16 1.2.3.1 Tác dụng chống ung thư 16 1.2.3.2.Tác dụng tăng cường miễn dịch 18 1.2.3.3 Tác dụng chống oxy hóa bảo vệ tế bào gan .19 1.2.3.4 Các tác dụng khác 21 1.3 TỔNG QUAN VỀ CÁC MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG U .22 1.3.1 Các mơ hình nghiên cứu in vitro 22 1.3.2 Các mơ hình nghiên cứu in vivo .26 CHƯƠNG 31 CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 CHẤT LIỆU VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .31 2.1.1 Chất liệu nghiên cứu 31 2.1.2.Đối tượng nghiên cứu 35 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất sử dụngtrong nghiên cứu 35 2.1.3.1 Thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên cứu 35 2.1.3.2 Hóa chất sử dụng nghiên cứu 37 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .39 2.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp chế biến hấp nhiệt đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất .39 2.2.1.1 Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc saponin có trongcác mẫu Tam thất hấp không hấp 39 2.2.1.2 Nghiên cứu biến đổi hàm lượng hoạt chất Tam thất trước sau hấp điều kiện khác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 40 2.2.1.3 Định lượng hàm lượng saponin mẫu cao NP(O) NP(H) HPLC 42 2.2.2 Nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm dạng cao định lượng số saponin phân lập từ rễ củ Tam thất 42 2.2.2.1 Đánh giá tác dụng kháng u saponin phân lập cao định lượng NP(O), NP(H) số dòng tế bào ung thư người 42 2.2.2.2 Đánh giá khả gây độc tế bào khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dịng tế bào ung thư mơ liên kết chuột sarcoma TG180 44 2.2.2.3 Nghiên cứu tác dụng ức chế phát triển u cao định lượng NP(H) NP(O) chuột nhắt trắng mang khối u rắn sarcoma TG 180 48 2.2.2.4 Đánh giá tác dụng cao định lượng NP(H) NP(O) lên hệ miễn dịch chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 .50 2.2.2.5 Đánh giá tác dụng chống oxy hoá cao định lượng NP(H) NP(O) chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 52 2.2.2.6 Xác định thời gian sống thêm chuột mang khối u rắn sarcoma TG180.53 2.2.3 Đánh giá độc tính cấp, độc tính bán trường diễn cao định lượng NP(H) 54 2.2.3.1 Đánh giá độc tính cấp cao định lượng NP(H) chuột nhắt trắng 54 2.2.3.2 Đánh giá độc tính bán trường diễn cao định lượng NP(H) chuột cống trắng 55 2.3 XỬ LÝ SỐ LIỆU 56 2.4 ĐỊA ĐIỂM, THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 56 CHƯƠNG 59 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 59 3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp chế biến đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất 59 3.1.1 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc saponin có mẫu Tam thất hấp không hấp 59 3.1.1.1 Phân lập saponin từ rễ củ Tam thất (dược liệu không xử lý hấp) .59 3.1.1.2 Phân lập saponin rễ Tam thất sau hấp nhiệt độ cao .61 3.1.1.3 Đặc trưng vật lý liệu phổ hợp chất phân lập 64 3.1.1.4 Biện giải cấu trúc hợp chất phân lập từ rễ củ Tam thất 72 3.1.2 Kết nghiên cứu biến đổi hàm lượng hoạt chất Tam thất hấp điều kiện khác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) …………………………………………………………………………… 78 3.1.2.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký .78 3.1.2.2 Xây dựng đường chuẩn 79 3.1.2.3 Kết định lượng saponin từ Tam thất hấp điều kiện khác 82 3.1 Hiệu suất chiết cao kết định lượnghàm lượng saponin mẫu cao định lượng NP(O) NP(H) HPLC 86 3.1.3.1 Hiệu suất chiết cao từ mẫu dược liệu 86 3.1.3.2 Định lượng mẫu cao chiết 87 3.2 Kết nghiên cứu tác dụng kháng u thực nghiệm dạng cao định lượng số saponin phân lập từ rễ củ Tam thất 88 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng kháng u saponin phân lập cao định lượng NP(O), NP(H) số dòng tế bào ung thư người 88 3.2.2 Kết đánh giá khả gây độc tế bào khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dòng tế bào ung thư mô liên kết chuột sarcoma TG180 .91 3.2.2.1 Kết đánh giá khả gây độc tế bào cao định lượng NP(H) 91 3.2.2.2 Kết đánh giá khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dịng tế bào ung thư mơ liên kết chuột sarcoma TG180 94 3.2.3 Kết nghiên cứu tác dụng kháng u cao định lượng NP(H) NP(O) chuột nhắt trắng mang khối u rắn sarcoma TG 180 97 3.2.3.1 Kết tạo mơ hình khối u sarcoma TG 180 chuột 97 3.2.3.2 Ảnh hưởng cao định lượng NP(H) NP(O) đến trọng lượng thể chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 98 3.2.3.3 Ảnh hưởng cao định lượng NP(H) NP(O) đến phát triển khối u rắn sarcoma TG 180 99 3.2.4 Kết đánh giá tác dụng cao định lượng NP(H) NP(O) lên miễn dịch chuột mang khối u rắn Sarcoma TG180 103 3.2.4.1 Kết đánh giá số lượng công thức bạch cầu máu chuột 103 3.2.4.2 Kết đánh giá nồng độ IL-2 TNF-α máu 104 3.2.4.3 Kết đánh giá số tiêu huyết học 105 3.2.4.4 Kết đánh giá cân nặng lách tuyến ức 107 3.2.5 Kết đánh giá tác dụng chống oxy hóa củacao định lượngNP(H) NP(O)trên chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 108 3.2.5.1 Hàm lượng MDA, GSH, SOD CAT gan chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 108 3.2.5.2 Hoạt độ enzym ALT, AST máu chuột mang khối u rắn sarcoma TG180 110 3.2.5.3 Ảnh hưởng cao định lượng NP(H) NP(O) hình thái đại thể vi thể gan chuột chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 111 3.3.6 Kết đánh giá tác dụng kéo dài thời gian sống thêm cao định lượng NP(H) NP(O) chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 113 3.4 Kết đánh giá độc tính cao định lượng NP(H) 116 3.4.1 Kết xác định độc tính cấp (LD50) NP(H) 116 3.4.2 Kết đánh giá độc tính bán trường diễn NP(H) .117 CHƯƠNG 126 BÀN LUẬN 126 4.1 Về ảnh hưởng phương pháp chế biến hấp nhiệt đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất .128 4.1.1 Hàm lượng saponin Tam thất chưa hấp 128 4.1.2 Hàm lượng saponin Tam thất sau hấp 129 4.1.3 Ảnh hưởng điều kiện hấp nhiệt đến hàm lượng saponin rễ củ Tam thất 130 4.2 Về tác dụng kháng u thực nghiệm dạng cao định lượng số saponin phân lập từ rễ củ Tam thất 132 4.2.1 Về tác dụng kháng u saponin phân lập cao định lượng NP(O), NP(H) số dòng tế bào ung thư người 132 4.2.2 Về kết đánh giá khả kích thích chết tế bào theo chương trình (apoptosis) cao định lượng NP(H) dịng tế bào ung thư mơ liên kết chuột sarcoma TG180 .134 4.2.3 Về kết nghiên cứu tác dụng kháng u cao định lượng NP(H) NP(O) chuột nhắt trắng mang khối u rắn sarcoma TG 180 .136 4.2.3.1 Về mơ hình nghiên cứu 136 4.2.3.2 Về liều dùng cao định lượng NP(H) NP(O) .138 4.2.4 Về tác dụng cao định lượng NP(H) NP(O) lên miễn dịch chuột mang khối u rắn Sarcoma TG180 141 4.2.5 Về kết đánh giá tác dụng chống oxy hóa chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 145 4.2.6 Về tác dụng kéo dài thời gian sống thêm chuột mang khối u rắn sarcoma TG 180 147 4.3 Về kết đánh giá độc tính cao định lượng NP(H) .153 4.3.1 Về độc tính cấp cao định lượng NP(H) 153 4.3.2 Về độc tính bán trường diễn cao định lượng NP(H) .154 KẾT LUẬN 159 KIẾN NGHỊ 161 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Viết tắt Viết đầy đủ tiếng nước Viết đầy đủ tiếng Việt ALT Alanine aminotransferase AST Aspartate aminotransferase AKP Alkaline Phosphatase CAT Catalase CC Column chromatography CHO Cholesterol ĐCSH ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Phổ khối lượng phun mù Spectrometry điện tử GC Gas Chromatography GSH Glutathione reductase 10 HLD High-density lipoprotein cholesterol 11 HE Haematoxylin and eosin 12 HPLC High Performance Chromatography 13 IL-2 Interleukin-2 14 IR Infra red Phổ hồng ngoại 15 LD50 Lethal dose, 50% Liều gây chết trung bình 16 LDL Low-density lipoprotein cholesterol Cholesterol trọng lượng phân tử thấp 17 LTN 18 MDA Malondialdehyde 19 MHC Major Complex Sắc kí cột Đối chứng sinh học Sắc kí khí Cholesterol trọng lượng phân tử cao Liquid Sắc kí lỏng hiệu cao Lô uống thuốc tham chiếu Histocompatibility Phức hợp kháng nguyên phù hợp tổ chức người 20 MP Melting point Điểm nóng chảy 21 MS Mass spectrometry Khối phổ 22 NK Natural killer cell Tế bào tiêu diệt tự nhiên 23 NMR Nuclear magnetic resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 24 OA Oleanolic acid 25 OD Optical Density 26 OT Otillol 27 PPD Protopanaxadiol 28 ROS Reactive oxygen species 29 SL 30 SOD Superoxide dismutase 31 SRB Sulforhodamine B 32 TC Triglycerid 33 TCL Cytotoxic T lymphocyte 34 TLCT 35 TG Total Cholesterol Cholesterol toàn phần 36 TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký lớp mỏng 37 TNF α Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử khối u 38 UT Lô gây u không điều trị 39 UV-VIS Ultraviolet-Visible Tử ngoại – Khả kiến Mật độ quang học Lô chứng sinh lý Tế bào T gây độc Trọng lượng thể DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Trang Bảng 1.1 Bảng 2.1 Thống kê tóm tắt năm 2020 tình hình ung thư Việt Nam Dải nồng độ thử nghiệm chế phẩm NP(H) 45 Bảng 2.2 Sơ đồ thí nghiệm đánh giá khả kích thích apoptosis NP(H) dịng tế bào ung thư mơ liên kết chuột sarcoma TG 180 46 Bảng 2.3 Thang đánh giá hiệu lực kháng u H Itokawa 50 Bảng 3.1 Kết thu sau tiến hành sắc kí cột thô cắn n- BuOH 60 Bảng 3.2 Một số tính chất vật lý, kiện phổ khối hợp ch ất PN1-PN6 64 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Bảng 3.13 Dữ kiện phổ 1H 13C-NMR hợp chất PN1, PN2, PN6 Dữ kiện phổ 1H 13C-NMR hợp chất PN3, PN4, PN5 Kết xây dựng đường chuẩn Kết định lượng saponin mẫu Tam thất khô, hấp mức nhiệt 1000C thời điểm hấp khác Kết định lượng saponin mẫu Tam thất tươi, hấp mức nhiệt 100°C thời điểm hấp khác Kết định lượng saponin mẫu Tam thất khô, hấp mức nhiệt 120°C thời điểm hấp khác Kết định lượng saponin mẫu Tam thất tươi, hấp 120°C thời điểm hấp khác Hiệu suất chiết cao từ mẫu dược liệu Hàm lượng saponin mẫu cao định lượng NP(O) NP(H) (Mean ± SD) IC50 mẫu saponin cao định lượng NP(O), NP(H) dòng tế bào ung thư người thử nghiệm Tỷ số tăng sinh (A%) giá trị IC50 mẫu nghiên cứu dòng Sarcoma TG 180 64 68 80 82 83 84 85 87 88 89 94 Bảng 3.14 Bảng 3.15 Tỷ lệ % tế bào Apoptosis Tỷ lệ tế bào Appotosis sớm 95 96 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 3.16 Bảng 3.17 Bảng 3.18 Bảng 3.19 Bảng 3.20 Bảng 3.21 Bảng 3.22 Bảng 3.23 Bảng 3.24 Bảng 3.25 Bảng 3.26 Bảng 3.27 Bảng 3.28 Bảng 3.29 Bảng 3.30 Bảng 3.31 Bảng 3.32 Bảng 3.33 Bảng 3.34 Bảng 3.35 Bảng 3.36 Tỷ lệ tế bào Appotosis muộn Trọng lượng thể chuột thể tích khối u giai đoạn gây u (5 ngày đầu) (Mean ± SD, n =10) Trọng lượng thể chuột giai đoạn uống thuốc (Mean ± SD, n =10) Trang 97 Thể tích trung bình khối u chuột giai đoạn uống thuốc (từ ngày đến ngày 21) (Mean ± SD, n =10) Hiệu lực kháng u ngày 21 sau tiêm gây u lô điều trị (n =10) Số lượng công thức bạch cầu chuột (Mean ± SD, n =10) Kết đánh giá nồng độ IL-2 TNF-α máu (n = 10, Mean ± SD) Kết đánh giá số tiêu huyết học (n = 10, x ± SD) Cân nặng tương đối lách tuyến ức chuột lô chuột nghiên cứu (n = 10, Mean ± SD) Hàm lượng MDA, GSH, SOD CAT mô gan chuột (n = 10, Mean ± SD) Hoạt độ enzym ALT, AST máu chuột (n = 10) Số chuột sống sót lơ nghiên cứu Thời gian sống trung bình (n = 20, Mean ± SD) thời gian sống kéo dài thêm chuột (%) Độc tính cấp theo đường uống NP(H) Trọng lượng thể chuột lô nghiên cứu Ảnh hưởng cao định lượng NP (H) số hồng cầu Ảnh hưởng cao định lượng NP (H) số lượng bạch cầu số lượng tiểu cầu Ảnh hưởng NP (H) hoạt độ enzym AST ALT Ảnh hưởng NP (H) nồng độ albumin máu Ảnh hưởng NP (H) nồng độ cholesterol máu Ảnh hưởng NP(H) nồng độ creatinin máu 98 99 100 102 104 105 106 107 109 110 113 115 116 117 118 119 120 121 121 122 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ Trang 13 Hình 1.1 Một số hình ảnh Tam thất Lào Cai (tự chụp) Hình 1.2 Sơ đồ biến đổi saponin Tam thất hấp nhiệt 15 Hình 1.3 24 Hình 2.1 Các đặc điểm phân tích chết tế bào theo chương trình (Apoptosis) Mẫu Tam thất khơ, hấp 100ºC (A) Hình 2.2 Mẫu Tam thất khơ, hấp 120ºC (B) 32 Hình 2.3 Mẫu Tam thất tươi, hấp 100ºC (C) 32 Hình 2.4 Mẫu Tam thất tươi, hấp 120ºC (D) 32 Hình 2.5 Cao định lượng NP(O) cao định lượng NP (H) 33 Hình 2.6 Các saponin phân lập từ Tam thất 34 Hình 2.7 Khối u đùi chuột tạo sau cấy ghép dòng tế bào ung thư sarcoma TG 180 31 49 Hình 3.1 Sơ đồ phân lập hợp chất 1,2,3,4 từ Tam thất khơng h ấp 61 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất 5,6 từ Tam thất hấp nóng 63 Hình 3.3 Hình 3.4 Các hợp chất phân lập từ thân rễ Tam thất (PN1, PN2, PN6) phổ HMBC chọn lọc hợp chất PN1 Các hợp chất phân lập từ thân rễ Tam thất (P notoginseng) (PN3, 74 78 PN4, PN5) phổ HMBC chọn lọc hợp chất PN4 Hình 3.5 Sắc ký đồ số mẫu dịch chiết Tam thất 79 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn đường chuẩn saponin đối chiếu 81 Hình 3.8 Đồ thị biểu diễn biến đổi hàm lượng Rh1 Rg3 theo thời gian điều kiện khảo sát Sắc ký đồ cao Tam thất Hình 3.9 Hình thái tế bào Sarcoma TG 180 Hình 3.7 Hình 3.10 Hình 3.11 86 87 91 Hình thái tế bào Sarcoma TG 180 tác dụng cao định 92 lượng NP(H) thuốc chứng dương Taxol thời điểm 48 Hình ảnh mơ bệnh học khối u sarcoma TG 180 đùi chuột 103 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐỒ THỊ Trang Hình 3.12 Hình ảnh đại thể gan chuột lơ nghiên cứu 111 Hình 3.13 Hình ảnh vi thể gan chuột lô nghiên cứu (HE x 400) 112 Hình 3.14 Biểu đồ tỷ lệ chuột sống sót theo thời gian 114 Hình 3.15 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột lô nghiên cứu 123 Hình 3.16 Hình ảnh vi thể gan chuột lơ nghiên cứu 123 Hình 3.17 Hình ảnh vi thể lách chuột lô nghiên cứu 124 Hình 3.18 Hình ảnh vi thể thận chuột lơ nghiên cứu 124 Hình 4.1 Sơ đồ biến đổi số saponin Tam thất 130 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư bệnh tim mạch nguyên nhân gây tử vong hàng đầu giới, ung thư dần có xu hướng vượt bệnh tim mạch trở thành nguyên nhân hàng đầu gây tử vong sớm hầu hết quốc gia [1] Theo thống kê Cơ quan nghiên cứu ung thư quốc tế, năm 2020 ước tính giới có 19,3 triệu ca ung thư gần 10 triệu ca tử vong ung thư [2] Tại Việt Nam, năm 2020 ước tính số ca ung thư 182563 (0,19 % dân số) số người chết ước tính 122690 (0,13% dân số) [3] Gánh nặng ung thư Việt Nam tăng gấp ba lần 30 năm qua [4] Do tính chất ác tính bệnh, tác dụng phụ hóa trị liệu xạ trị, giá thành cao thuốc điều trị ung thư, việc điều trị ung thư gánh nặng lớn cho bệnh nhân, gia đình xã hội Tam thất (Panax notoginseng) từ lâu biết đến dược liệu quý với công chủ yếu tán ứ, hoạt huyết, huyết [5] Tam thất cịn có tên kim bất hoán, nhân sâm tam thất, sâm tam thất Tên kim bất hốn (vàng khơng đổi), ý nói vị thuốc Tam thất quý, vàng đổi [6] Các nghiên cứu dược lý đại chứng minh Tam thất có nhiều tác dụng quý điều trị ung thư, rối loạn tim mạch, huyết ứ, giảm viêm, phù nề giảm đau [7] Tác dụng chống ung thư hoạt chất Tam thất gần quan tâm nghiên cứu, cho thấy tiềm tốt điều trị ung thư [8], [9] Đặc biệt, số tác giả báo cáo việc hấp rễ Tam thất làm tăng hoạt tính chống ung thư [10], [11], [12] Ở Việt Nam, Tam thất di thực từ năm 1964 từ Trung Quốc Cây nhập trồng tỉnh Hà Giang, Cao Bằng, Lào Cai chưa quan tâm phát triển nên dược liệu Tam thất nước ta chủ yếu nhập từ Trung Quốc Là thuốc quan trọng vùng Tây Bắc, Tam thất gần quan tâm khôi phục lại việc trồng trọt phát triển số vùng dược liệu nước, đặc biệt huyện Si Ma Cai, tỉnh Lào Cai Việc nghiên cứu tác dụng định hướng điều trị ung thư dược liệu quý góp phần nâng cao giá ... VIỆN DƯỢC LI? ?U BÙI THỊ THU HÀ NGHIÊN C? ?U TÁC DỤNG KHÁNG U THỰC NGHIỆM CỦA RỄ CỦ TAM THẤT (PANAX NOTOGINSENG (BURK.) F.H CHEN, ARALIACEAE) TRỒNG Ở VIỆT NAM TRƯỚC VÀ SAU CHẾ BIẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ... Luận án ? ?Nghiên c? ?u tác dụng kháng u thực nghiệm rễ củ Tam thất (Panax notoginseng (Burk.) F.H Chen, Araliaceae) trồng Việt Nam trước sau chế biến” cơng trình nghiên c? ?u với hướng dẫn khoa học... sử dụngtrong nghiên c? ?u 35 2.1.3.1 Thiết bị, dụng cụ sử dụng nghiên c? ?u 35 2.1.3.2 Hóa chất sử dụng nghiên c? ?u 37 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C? ?U .39 2.2.1 Nghiên c? ?u ảnh hưởng