TẠP CHÍ CÓNG THMG NGHIÊN CỨU QUÃ TRÌNH TRÍCH LY LECTIN TỪ RONG CERẢTôPĩỉVỉlữi DEMEISUÌ • NGUYỀN NGỌC ĐỨC PHẠM THỊ CAM HOA HOÀNG THỊ NGỌC NHƠN TÓM TẮT Nghiên cứu được thực hiện để khảo sát quá trình tr[.]
TẠP CHÍ CĨNG THMG NGHIÊN CỨU Q TRÌNH TRÍCH LY LECTIN TỪ RONG CERẢTơPĩỉVỉlữi DEMEIS • NGUYỀN NGỌC ĐỨC - PHẠM THỊ CAM HOA - HỒNG THỊ NGỌC NHƠN TĨM TẮT: Nghiên cứu thực để khảo sát trình trích ly lectin từ rong Ceratophyỉlum demersum Các tính chất điều kiện dung môi, tỷ lệ nguyên liệu/dung mơi (NL/DM) thời gian trích ly yếu tố ảnh hưởng trực tiếp đến q trình trích ly khảo sát để lựa chọn phân tích Nghiên cứu tiến hành khảo sát điều kiện bao gồm loại dung môi (dung dịch đệm PBS, ethanol, dung dịch NaCl, dung dịch NaOH), tỷ lệ NL/DM (1/5, 1/10, 1/15, 1/20, 1/25, w/v), thời gian trích ly (2,4,6, 8,10 giờ) Hiệu q trình trích ly đánh giá hàm lượng protein tổng số, xác định thông qua đường chuẩn BSA phương pháp quang phổ UV-Vis, hoạt độ ngưng kết hồng cầu Nhìn chung, yếu tố ảnh hưởng đáng kể đến hiệu trích ly, kết nghiên cứu thu tốt cho q trình trích ly dung mơi NaOH, tỷ lệ NL/DM 1/10 (w/v) thời gian Từ khóa: lectin, Ceratophyllum demersum, trích ly Đặt vấn đề Ceratophyllaceae họ thực vật phổ biến khắp nơi giới, tìm thây nhiều ao, hồ, đầm lầy dịng si khu vực nhiệt đới ôn đới Nghiên cứu cho thấy dịch chiết c demersum, tồn nhiều chất mang hoạt tính sinh học như: flavanoids, coumarin glycosides, steroids, terpenoids, đường, tannin, acid amin số protein khác [1], Ớ nước ta, trữ lượng loại rong lớn mọc hoang dại ao hồ nước lợ vùng Đồng sông Cửu Long, lại khai 188 SỐ 15 - Tháng 6/2022 thác hoạt chất sinh học phục vụ cho nhu cầu người Lectin protein chứa trung tâm hoạt động, có khả tương tác đặc hiệu với mono, oligo-saccharide nằm bề mặt tế bào mà không làm thay đổi cấu trúc carbohydrate liên kết [2] ứng dụng lectin, chúng báo cáo tích cực cơng cụ tiện lợi lĩnh vực y tế phân biệt khác biệt cấu trúc carbohydrate cho thấy hoạt động sinh học khác thông qua liên kết với carbohydrate phát đặc hiệu nhóm máu HĨA HỌC-CƠNG NGHỆ THựC PHẨM người [3-5], Bên cạnh đó, chúng sử Lấy xác 0,5 mL dịch gốc BSA (20, 40, dụng tác nhân kháng lại số" loài vi 60, 80, 100, 120 pg/mL) cho vào ống nghiệm, khuẩn [6], Ngồi ra, lectin cịn biết đến với thêm vào 2,5 mL dung dịch c (dung dịch có khả làm chết tế bào ung thư [7] Tại Việt từ dung dịch A có NaOH Na2CG3, hịa Nam, lectin gần nghiên cứu nhiều loại rong biển nhằm tìm nguồn lợi vào dung dịch B có CuSO4 với tỷ lệ A:B 49:1), lắc để yên 20 phút Sau đó, thêm vào khai thác tốt cho hoạt chất sinh học [8], Do đó, hỗn hợp ống nghiệm 0,25 mL thuốc thử nghiên cứu thực nhằm mục đích nghiên cứu điều kiện thu nhận lectin từ rong Folin pha loãng lần, lắc để yên c demersum bước sóng 750 nm Thực thí nghiệm lần, lấy giá trị trung bình, xây dựng phương trình hồi quy Mầu thí nghiệm chuẩn bị tương tự Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu 2.1.1 Nguyên liệu Rong c demersum thu nhận ao nuôi 60 phút Đem xác định độ hấp thu mẫu nêu Sau đó, đo độ hấp thu bước sóng 750 nm, đối chiếu với đồ thị chuẩn BSA để tính tơm quảng canh xã Gia Thuận, huyện Gị Cơng Đơng, tỉnh Tiền Giang Rong vận chuyển hàm lượng protein tổng mẫu ngày đến phịng thí nghiệm Sau rong xử lý để loại bỏ tạp chất sấy đến độ ẩm dựa phương pháp Hung Le Dinh cộng có hiệu chỉnh cho phù hợp, cụ thể [8]: Hoạt độ ngưng kết hồng cầu thực 10%, xay mịn để thực khảo sát trích ly 2.2.2.1 Chuẩn bị cho vào túi PE cấp đông bảo quản -20°C Huyền phù hồng cầu máu 2%: Mầu hồng cầu 2.1.2 Hóa chất Chất chuẩn BSA 96%, Folin 99% (Merck) sau tách huyết tương (hồng cầu lắng) Các hóa chát khác đạt yêu cầu kỹ dùng có NaCl 0,15M Sau đó, xử lý enzyme trypsin 0,5% (w/v) với tỷ lệ so với mẫu 1/10 phân tích mang rửa lần đệm PBS lOmM, pH = 7,2 2.2 Phương pháp nghiên cứu (v/v), trộn ủ 37°c 60 phút 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng yếu tố đến Sau ủ, hồng cầu mẫu máu rửa lần trình trích ly Cân xác Ig ngun liệu xử lý (tính theo % khơi lượng chất khơ), thực ngâm tĩnh dung môi (đệm PBS, ethanol, dung dịch NaCl, dung dịch NaOH) tỷ lê nguyên liệu/dung môi (NL/DM) (1/5, 1/10, 1/15 1/20, 1/25 (w/v)) thời gian (2,4, 6, 8, 10) nhiệt độ tháp Hỗn hợp thí nghiệm lọc sau tiến hành xác định hàm lượng protein tổng phương pháp quang phổ uv - Vis hoạt độ ngưng kết hồng cầu Từ lựa chọn điều kiện thích hợp cho q trình trích ly lectin 2.2.2 Phương pháp phân tích Xác định hàm lượng lectin phương pháp quang phổ Đường chuẩn BSA thiết lập dựa theo phương pháp Lowry cộng với số điều chỉnh phù hợp, cụ thể [9J: với dung dịch đệm PBS lOmM, pH = 7,2 có NaCl 0,15M hịa lại đệm PBS lOmM có chứa NaCl 0,15M, pH = 7,2, thu huyền phù hồng cầu 2% xử lý enzyme 2.2.2.2 Phân tích hoạt tính lectin phương pháp ngưng kết hồng cầu Đầu tiên, cho 25 pL dung dịch đệm PBS 10 mM có chứa NaCl 0,15M, pH = 7,2 vào giếng đĩa 96 giếng đáy chữ V Tiếp đến cho 25 pL mẫu dịch chiết lectin cần phân tích hoạt tính ngưng kết hồng cầu vào giếng đầu tiên, trộn đều, pha loãng sang giếng với tỷ lệ pha loãng l/2n (n: số lần pha lỗng) giữ nhiệt độ phịng Sau đó, tiếp tục thêm 25 pL hồng cầu 2% xử lý vào tất giếng, lắc nhẹ nhàng hỗn hợp giữ nhiệt độ phòng Kết thử nghiệm âm tính tất SƠ' 15-Tháng Ĩ/2022 189 TẠP CHÍ CƠNG ỈHUŨNG hồng cầu lắng xuống đáy giếng thành chấm nhỏ sát loại dung mơi dựa tính tan protein, Kết dương tính khơng có chấm đỏ nhỏ tan loại dung môi: dung dịch đệm, dung dịch muối loãng, dung dịch kiềm loãng dung đáy Hoạt tính lectin (HU/mL) thể tiêu chuẩn giá trị nghịch đảo độ pha loãng lớn mà dịch chiết lectin cịn có khả làm ngưng kết hồng cầu cho vào phản ứng Thí nghiệm lặp lại lần Hoạt tính lectin xác định theo số; Hoạt tính tổng (Utơ’ng); tổng số đơn vị hoạt dịch cồn loãng (ethanol 20%) Kết khảo sát (Hình 1) cho thấy, có khác biệt có nghĩa hàm lượng protein tổng số loại dung mơi trích ly Dung mơi NaOH cho hàm lượng protein tổng (20,420 ± 0,396 mg/gCK) hoạt tính riêng cao nhâ't (62,699 HU/mg protein) hàm lượng thâ'p tính có thể tích nhát định (HU) ethanol (15,443 ± 0,308 mg/g) Tuy nhiên, kết kiểm định ANOVA cho thấy, có khác FL?-’-'tong = V v• biệt khơng có nghĩa hàm lượng hoạt tính 2n Trong đó: V: tổng thể tích (mL); riêng loại dung mơi cịn lại, lại có n: số' lần pha lỗng NaOH (p