Các phương pháp phân tích ADN pdf

   2      !"#$%&'()  *(*+$,*,!$-$!!.!/  01((*+$,*2#34*  56789  $(:/*+/8*$!;*<:=>(?@+;- >A  BC=>D1(7(,<E&$!;*F(7:*+   !="#7 !<*?   !#"#7 !<,G/-@D  BH@!;H(:,&1(<I*$JK&$!;*BC<C(:,  1($6BCF3#<BH  1(<*:!7!7(!$&,-(!$&L  >M"#>  I!;*(!+(&$*7*+<BN  2*BC<:>%@778 3   *$"/&$"/7"3!;  (+*,$*8O>$*81(,:*/$!*+,P:$Q  (+*,:((!:,  >%  >%*$=:R+87(S$ T-,7(!:,(!$*!+- ,$$$!:,39*/BH  >%$),$39$,!*+=+!:(>*;!/U+V 3+@  >%(!3W**!*X&7+8392*Y$6 BC@F  >%$F*Z[(!+\39*!$*!$,*+ W67P3X7"*]*$ ^$,!*+Q&7$(:/*+&7" 3!;BC  *#+*  B(!:,  BEP!$B$(/*+,,$E$,!7!,:*:Q 4  !" #  _(7W>`C abc/  dceO/$++fBCP!gBHQ:6*3*  hceO/$++fBHP!gBCQ:6*3i  ceO/$!$*!$,!*+P*jc(:,Q  0*9/(3#*>*<k$#`C abcOac ![# `C abcOaJc & `C ac/  *#+*,$7"(*+$,*<+V 3*#!,$  fA,!>A  f$6<:!:*D 5  6 $%&"'  EG/;O/,$(:,  BC;*fAl3f  ;!(3+A!g3\  I%AiA>*4*  !$/,(:,  BC7!$/,(:,78XBC  !$/,(:,78XBHP!gBCQ  BC!$/,(:,>78X>/U  BH7!$/,(:,78XBC  I*(:,  4*(*3!;BC 4*36 4*36 036 7 ()  I :=[#7W:3[#*#1((*7"R (*+$,*/;3i G-T-A-G-T-C-C T-C-A-G-G-T G-T-A-G-T-C-C T-C-A-G-G-T m  4]n  23XBC 5**(7]o  *Z3X  X+ *1(p=  I=*! 8 ()  !,N$!$(*BC  !,N$!$(*BH  I(*;*qP*:*Q  KU+VP7!,Q  r#47*#  'l;  EG/  rst( 9 !$/,(:, ()*+  $%:(!u7BC**!  !3*?>*Z':v$,!*+  EG/7!$/,(:,:w>u!+ */;BC,! W:3x-`r4  0MyH2/  *A+:BC :6*3i5*#3#&  13!;/2*Pq*!$*!$,!*+W673g *ZQ*::BC&  ,G/>u!+ *3!;/2*,!W: *>/U x-`rdx- x-`r dx- $,!*+ 10 *+ [...]... giải trình tự Maxam và Gilbert   Phương pháp hóa học: dựa vào sự thủy giải đặc trưng của ADN (Allan Maxam và Walter Gilbert) Qui trình: – – – Tạo ADN sợi đơn từ đoạn ADN cần giải trình tự Đánh dấu các phân tử ADN ở một đầu Thực hiêận 4 (hoăậc 5) ống phản ứng riêng biêật: 1 2 3 4 – Xử lý 4 ống trên với piperidine 1M/90 oC để cắt ADN ở liên kết phosphat kế nucleotid... Cytosin A>C: NaOH 1,2N/90oC cắt ADN ở Adenin > Cytosin Mỗi ống được nạp vào môật giếng điêận di Kết quả điêận di được đọc và biêận luâận  trình tự Phương pháp giải trình tự Maxam và Gilbert ADN cần giải trình tự Tạo sợi ADN đơn Đánh dấu bằng P32 Cắt tại các base đăậc hiêậu Phản ứng tại G 18 Phản ứng tại A/T Phản ứng tại T/C Phản ứng tại C Phương pháp giải trình tự... song với phát hiêận sản phẩm …… Ứng dụng PCR       13 Tạo đoạn ADN mong muốn Giải trình tự Gây đôật biến Chẩn đoán, Phát hiêận và định danh sinh vâật Xác định quan hêậ di truyền Nhâận dạng tôậi phạm,… Phương pháp giải trình tự Sanger   Phương pháp enzym/dideoxy: dựa vào sự ngừng tổng hợp ADN khi găập phải dideoxy nucleotid (Frederick Sanger) Qui trình: – Thực... tự Đọc kết quả Phương pháp Sanger 5’-GGCCGCGTCTTCGCCGTAG-3’ ddG ddA ddT ddC 3’ 5’ 15 Kỹ thuâật tự đôậng mới nhất (Harold Swerdlow)     16 Các ddNTP được đánh dấu huỳnh quang với các màu khác nhau Thực hiêận môật phản ứng PCR duy nhất với sự hiêận diêận của các dNTP và ddNTP Sử dụng điêận di mao quản để tách sản phẩm Đọc kết quả bằng đầu dò laser Phương pháp giải... Institute of Technology, Thụy Điển, năm 1996 Dựa vào phát hiện sự phóng thích pyrophosphate khi nucleotide được gắn vào Thành phần phản ứng: – – – – 21 ADN sợi đơn Mồi Các enzym: DNA polymerase, ATP sulfurylase, luciferase và apyrase, Các cơ chất adenosine 5´ phosphosulfate (APS) và luciferin