Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.

Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.Nghiên cứu phát sinh loài, phân loại và đặc điểm các chủng vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởng thực vật phân lập tại các tỉnh phía nam Việt Nam.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - VŨ THỊ LAN HƯƠNG NGHIÊN CỨU PHÁT SINH LOÀI, PHÂN LOẠI VÀ ĐẶC ĐIỂM CÁC CHỦNG VI KHUẨN ACETIC KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG THỰC VẬT PHÂN LẬP TẠI CÁC TỈNH PHÍA NAM VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Tp Hồ Chí Minh – 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - VŨ THỊ LAN HƯƠNG NGHIÊN CỨU PHÁT SINH LOÀI, PHÂN LOẠI VÀ ĐẶC ĐIỂM CÁC CHỦNG VI KHUẨN ACETIC KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG THỰC VẬT PHÂN LẬP TẠI CÁC TỈNH PHÍA NAM VIỆT NAM Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 42 01 07 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Lê ThanhBình GS TS NaotoTanaka Tp Hồ Chí Minh – 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin camđoan: Đây cơng trình nghiên cứu tơi thực số kết cùngcộngtácvới cáccộngsựkhác; Các số liệu, kết nêu luận án trungthực,một phần công bố tạp chí khoa học chuyên ngành với đồng ý cho phép đồng tác giả Phần cịn lại chưa cơng bố bất kỳ cơng trình khác Tp HCM, ngày 24 tháng năm 2022 Tác giả luận án Vũ Thị Lan Hương LỜI CẢM ƠN TơixinđượcbàytỏlòngbiếtơnsâusắctớiPGS.TS.LêThanhBìnhViệnCơngnghệsinhhọc,HọcviệnKhoahọcvàCơngnghệthuộcViệnHànlâmKhoahọcvàCơng nghệ Việt Nam GS TS Naoto Tanaka - Bộ Sưu tập chủng giốngVisinh NODAI,Đại học NơngnghiệpTokyo,Nhật Bản đã tận tình hướng dẫn, tạo mọi điều kiện thuận lợi, giúp đỡ thực hiện luận ánnày Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến GS TS Yuzo Yamada, KhoaNôngnghiệp,ĐạihọcShizuoka,NhậtBảnvàTS.PattarapornRattanawaree,Trungtâm nghiên cứu Tài nguyên Sinh học Thái Lan (TBRC), Cơ quan Quốc gia về Khoa học PháttriểnCôngnghệ,TháiLanđãdẫndắttôiđếnvớinghiêncứuhệthốnghọcvikhuẩn, dõi theo hỗ trợ cầnthiết Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Nhà trường, Khoa, Thầy Cô, Đồngnghiệp Khoa Sinh học – Công nghệ Sinh học Đồng nghiệp Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh ln giúp đỡ tận tình, động viên, ủng hộ tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tậpvàthựchiệnluậnán Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Lãnh đạo Viện, Chuyên viên phụ trách đào tạo,Viện Sinh học Nhiệt đới Học viện Khoa học Công nghệ thuộc Viện Hàn lâmKhoa họcvàCơngnghệViệtNamđãtạođiềukiện,giúpđỡtơitrongqtrìnhhọctậpvàhồn thành luận ánnày Tơixinchânthànhcámơnsựgiúpđỡtậntình,độngviên,ủnghộtừThS.BùiThịThuVân,ThS BùiThịTúUn,ThS.Nguyễn KhánhLinh,TS.KiềuPhươngNam,Thầy Côđồngnghiệp,cácbạnHọcviên,SinhviêntạiBộmônVisinh,KhoaSinhhọc–Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc gia Thành phố Hồ ChíMinh Tôi xin chân thành cám ơn sự giúp đỡ quý báu hỗ trợ GS.TS SomboonTanasupawat, Khoa Khoa học Dược, Đại học Chulalongkorn, Thái Lan, TS Yuki Muramatsu,TrungtâmQuốcgiavềTàinguyênSinhhọc(NBRC),KhoaCôngnghệsinh học,NITE,NhậtBản,nhànghiêncứuTaweesakMalimasvàcácNhàkhoahọcởcácBộ Sưu tập chủng giống VTCC, Việt Nam; BCC TBRC, Thái Lan; NRIC NBRC, NhậtBản Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Bạn bè đã bên động viên, chia sẻ giúp đỡtơitrong q trình học tập nghiên cứu luậnán Trên hết cả, đã học tập thực hiện luận án nếu tình uvơ bờ bến, sự động viên hỗ trợ tốt từ Bố Mẹ, Chồng, hai Con tất Người thân yêu Tôi vô biết ơn hạnh phúc thành viên Gia đình hai Gia đình lớn Tp HCM, ngày 24 tháng năm 2022Tác giả luận án Vũ Thị Lan Hương MỤC LỤC Lờicamđoan iLờicảmơn iiDanh mục ký hiệu chữviếttắt viiiDanhmụchình xiDanhmụcbảng xivMỞĐẦU Mục tiêunghiêncứu 2Nội dungnghiêncứu 2Ý 2Những nghĩa khoa học đóng góp thực tiễn củađềtài củaluậnán 3CHƯƠNG 1.TỔNGQUAN 1.1 Đặc điểm chung vikhuẩnacetic 1.2 Sơ lược lịch sử hình thành nhóm vikhuẩnacetic 1.3 Các chi loài vikhuẩnacetic 1.3.1 Các chi vi khuẩn aceticítgặp 1.3.2 Các chi vi khuẩn acetic cónhiềulồi 11 1.4 Vai trị ứng dụng vikhuẩnacetic 15 1.4.1 Vi khuẩn acetic lênmengiấm 15 1.4.2 Vi khuẩn acetic lên men sản xuất số thực phẩm vàthức uống 16 1.4.3 Vi khuẩn acetic lên men tạo màng cellulose sốpolysaccharidekhác 17 1.4.4 Vi khuẩn acetic sản xuất vitamin C số hợpchấtkhác 17 1.4.5 Vi khuẩn acetic ứng dụng trongtrồngtrọt 18 1.5 Các chi lồi vi khuẩn acetic kích thích sinh trưởngthực vật 20 1.5.1 ChiGluconacetobacter 20 1.5.2 ChiSwaminathania 27 1.5.3 ChiAcetobacter 28 1.5.4 ChiAsaia 30 1.5.5 ChiKomagataeibacter 31 1.6 Các phương pháp phân loại vikhuẩnacetic 33 1.4.1 Phân loại dựa vào đặc điểmkiểuhình 34 1.4.2 Phân loại dựa vào đặc điểmhóahọc 38 1.4.3 Phân loại dựa vào đặc điểmkiểugen 39 1.7 Những nghiên cứu liên quan đến đa dạng vi khuẩn acetic ởViệt Nam 44CHƯƠNG VẬT LIỆU –PHƯƠNGPHÁP 49 2.1 Vậtliệu 49 2.1.1 Nguồn mẫu, chủng giống vi sinh vật thực vậtkhảonghiệm 49 2.1.2 Các trình tựDNAmồi 50 2.1.3 Hóa chất, enzyme sinhphẩmkhác 50 2.1.4 Máy móc thiết bịchính 51 2.2 Phương pháp bố tríthínghiệm 51 2.2.1 Tuyển chọn vi khuẩn acetic theo định hướng kích thích sinh trưởngthựcvật 51 2.2.2 Khảo sát đặc điểm hình thái, sinh lý vàsinhhóa 52 2.2.3 Khảo sát đặc điểmhóahọc 56 2.2.4 Khảo sát đặc điểmditruyền 58 2.2.5 Khảo sát đặc điểm kích thích sinh trưởngthựcvật 61 2.2.6 Gửi lưu trữ chủng gửi trình tự chủng vi khuẩn lên ngân hàngdữliệu 62 2.2.7 Bố tríthínghiệm 63CHƯƠNG KẾT QUẢ –THẢO LUẬN 65 3.1 Thu thập phân loại vi khuẩn acetic theo định hướng kích thích sinh trưởng thực vật 65 3.1.1 Thuthập,phânlậpvàchọnlọcvikhuẩnaceticcókhảnăngthuộcnhómkíchthích sinh trưởngthựcvật 65 3.1.2 Phân tích phát sinh lồi phân loại chủng vi khuẩnphânlập 69 3.1.3 Mã tra cứu trình tự chủng phân lậptrênGenBank/EMBL/DDBJ 85 3.1.4 Phânloạivikhuẩnacetictheođịnhhướngkíchthíchsinhtrưởngthựcvậtthuthập phía namViệtNam 86 3.2 Xác định đặc tính kích thích sinh trưởngNguyenibactervanlangensis 91 3.2.1 Cốđịnhđạm 91 3.2.2 Chuyển hóa khống lân kẽm dạnghịatan 93 3.2.3 Tạo hormone thựcvậtauxin 96 3.2.4 Tăng cường biểu genpr-1, gen kháng bệnh ởthựcvật 97 3.3 Định danh đặc tính kích thích sinh trưởng thực vật chủng phân lậpNeoasaia sp.VTH-Ai107 100 3.3.1 Phân loại theo đặc điểm vật chấtditruyền 100 3.3.2 Một số ghi nhận đặc điểm N chiangmaiensis AC28TvàVTH-Ai107 103 3.3.3 Một số đặc tính kích thích sinh trưởng thực vật củaN chiangmaiensisTBRC 1TvàVTH-Ai107 106 3.4 ĐặcđiểmphânloạihaichủngAcetobactersp.VTH-Ai14vàVTH-Ai15;loàimới Acebacter saccharisp nov., chủngchuẩn VTH-Ai14T 107 3.4.1 Mối quan hệ phát sinh lồi trình tự gen 16S rRNA tổ hợp gendnaK,groEL vàrpoB 108 3.4.2 Độ tương đồng DNA-DNA gen phần trăm thànhphầnnucleotide 112 3.4.3 Đặc điểm hình thái hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14vàVTH-Ai15 113 3.4.4 Đặc điểm sinh lý hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14vàVTH-Ai15 115 3.4.5 Đặc điểm sinh hóa hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14vàVTH-Ai15 120 3.4.6 Đặc điểm hóa học hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14vàVTH-Ai15 130 3.4.7 ĐặcđiểmkíchthíchsinhtrưởngthựcvậthaichủngAcetobactersp.VTH-Ai14và VTHAi15 134 3.4.8 Mã lưu trữ hai chủng VTH-Ai14 VTH-Ai15 sưu tập vi sinh137 3.4.9 Loài mớiAcetobacter saccharisp nov., Vu etal.2019 138KẾT LUẬN –KIẾNNGHỊ 142Kếtluận 142Kiếnnghị 143DANH MỤC CƠNG TRÌNHCƠNGBỐ 144TÀI LIỆUTHAM KHẢO 145PHỤLỤC PL1Phụlụchình PL1Phụlụcbảng PL6 Phụ lục thơng tin trình tự 16S rDNA nộp vào sở liệu GenBank/EMBL/ DDBJ PL7 Phụ lục trình tự gen giữ nhàdnaK,groEL,rpoB thể dạng FASTA sở dữliệuGenBank/EMBL/DDBJ PL34 Phụ lục chứng nhận cấp mã lưu trữ chủng VTH-Ai14 VTH-Ai15 VTCC, BCC/TBRCvà NRIC PL37 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu ARA Chữ viết tắt phân tích phản ứng khử acetylene ma trận thử thay ngẫu nhiên đánh giá độ xác củan h n h boostrap phát sinh loài DHA dihydroxyacetone DNA acid dideoxyribonucleotide dnaK, groEL, rpoB gen thuộc nhóm gen giữ nhà EDTA ethylenediaminetetra acetic acid et al cộng G+C guanine + cytosine GECA môi trường thạch glucose/ethanol/calcium carbonate gen chi GPS hệ thống định vị toàn cầu GUS β-glucuronidase GYC môi trường glucose/cao nấm men/calcium carbonate HPLC sắc ký lỏng cao áp IAA hormone kích thích sinh trưởng thực vật auxin ITS vùng gen L latin LGI môi trường vô đạm Cavalcante Döbereiner đề xuất MALDI-Tof MS phương pháp sắc ký khối phổ MALDI-TOF MEGA phân tích di truyền tiến hóa phân tử ML maximum likelihood MP maximum parsimony MUSCLE phương pháp so sánh đa trình tự dựa vào thuật tốn kỳ vọng - Log NBRIP loại môi trường nuôi vi sinh vật làm tan phosphate NCS nghiên cứu sinh nif, fix hệ gen liên quan hoạt tích cố định đạm vi khuẩn NJ neighbor-joining nov PBS đệm muối phosphate PCR phản ứng khuếch đại chuỗi trình tự PR-1 protein liên quan đến tính kháng bệnh thực vật Rf hệ số lưu giữ RNA acid ribonucleic RNase ribonuclease SDS sodium dodecyl sulphate sp loài SSC dung dịch sodium chloride + sodium citrate T chủng chuẩn TE tris-EDTA UQ ubiquinone WGS trình tự tồn bộ gen Tên viết tắt đơn vị lưu trữ giống vi sinh vật sở liệu ATCC Bộ Sưu tập chủng giống Hoa Kỳ BCC Bộ Sưu tập chủng giống BIOTEC, Thái Lan DDBJ CSDL Trình tự DNA, Viện Di truyền Quốc gia, Nhật Bản EMBL Viện Sinh Tin học châu Âu, Vương quốc Anh GenBank Cơ sở liệu trình tự DNA, Hoa Kỳ IFO Bộ Sưu tập chủng giống vi sinh vật thuộc Viện Lên men, Nhật Bản LMG Bộ Sưu tập chủng giống vi sinh vật Vương quốc Bỉ NBRC Trung tâm Quốc gia Tài nguyên Sinh học, Nhật Bản NCBI Trung tâm Quốc gia Thông tin Công nghệ Sinh học, Hoa Kỳ NITE Viện Quốc gia Công nghệ Đánh giá, Nhật Bản NSTDA Cơ quan Quốc gia Khoa học Phát triển Công nghệ, Thái Lan TBRC Trung tâm nghiên cứu Tài nguyên Sinh học Thái Lan Ký hiệu viết tắt tên chi A Acetobacter Ac Acidomonas Ar Arabidopsis As Asaia G Gluconobacter Ga Gluconacetobacter K Kozakia Ko Komagataeibacter N Neoasaia Ne Neokomagataea Ng Nguyenibacter S Swaminathania Sa Saccharibacter Sw Swingsia T Tanticharoenia DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1.Các 12Bảng 13Bảng 1.2.Các 1.3.Các 14Bảng 14Bảng loài loài loài 1.4.Các 1.5.Các trong loài loài chiAcetobacterBeijerinck1898 chiGluconacetobacterYamada trong chiGluconobacterAsai1935 chiAsaiaYamada chiKomagataeibacterYamada etal.1998 etal.1998 etal.2013 15Bảng 1.6.Nguồn phân lập đặc điểm vi khuẩn mang đặc tính cố định đạm họAcetobacteraceae 19Bảng 21Bảng 1.7.Đặc 1.8.Đặc điểm điểm phân phân biệt biệtAs chi vikhuẩnacetic spathodeaesp nov trongchiAsaia 37Bảng 1.9.Đặc điểm phân biệtA oryzifementanssp nov.,A ascendenssp nov., comb nov với chủngAcetobactercó quan hệ họhànggần 37Bảng 1.10.Thành phần base giá trị tương đồng DNA gen chủng chuẩnAs.astilbesvà chủngchuẩnAsaia 43Bảng 1.11.Đặc điểm chung gen đặc điểm kiểu hình từ kết phân tích gen chủngA ozyzoeniB6Tvà chủng chuẩnAcetobactercó họhànggần 43Bảng1.12.Khácbiệtđặcđiểmkiểuhìnhtừkếtquảthínghiệmkhảosátcổđiểnchủng A ozyzoeniB6Tvà chủng chuẩn lồiAcetobactercó họhànggần 44Bảng 1.13.Nguồn phân lập phân loại 100 chủng vi khuẩn acetic thu thập từ cácmẫu thutạikhuvựccanhtácvàcácmẫuhoa,quả 46Bảng 2.1.Trình tự mồi sử dụng trongnghiêncứu 50Bảng 2.2.Thành phần phản ứng khuếch đại vùng trình tự gen 16S rRNA,dnaK,groELvàrpoB 59Bảng 3.1.Hình thái khuẩn lạc, tế bào đặc điểm đặc trưng vi khuẩn acetic 141 chủngphânlập 66Bảng3.2.Mứcđộtươngđồngtrìnhtựgen16SrRNAgiữacácchủngphânlậpvàchủng chuẩnGluconacetobactercó mối quan hệgầngũi 77Bảng 3.3.Mức độ tương đồng trình tự gen mã hóa 16S rRNA chủng phân lập cácchủngNguyenibacter 81 Bảng 3.4.Mã tra cứu phần hay tồn trình tự gen mã hóa 16S rRNA cơsởdữ liệu GenBank/EMBL/DDBJ 141 chủngphânlập 85Bảng 3.5.Nguồn mẫu phân lập kết định danh 141 chủng phân lập dựa vào phân tích phát sinh lồi tương đồng trình tự gen 16SrRNA 87Bảng 3.6.Hoạt tính sinh tổng hợp IAA hai chủngNg vanlangensisTN01LGITvà VTH-AC01 97 Bảng3.7.Sosánhkhoảngcáchnhánhphátsinhlồitínhtừđiểmphânnhánhgiữachủng VTH- Ai107vàAC28TvớiS60-1TvàGB23-2Ttrêncáccâyphátsinhlồitheophương pháp NJ, MPvàML 102Bảng3.8.MứcđộtươngđồngDNA-DNAbộgengiữachủngNeoasaiasp.VTH-Ai107 chiangmaiensisAC28T(=TBRC T) vớiN baliensisNBRC16664T vàK 102Bảng 3.9.Hàm lượng IAA chủngN chiangmaiensisVTH-Ai107 TBRC 1Tsinh sau ngày ni cấy mơitrườngLGI 107Bảng3.10.Độtươngđồngtrìnhtựgenmãhóa16SrRNAgiữahaichủngVTH-Ai14và VTH-Ai15 với chủng chuẩn nhánh phát sinh loài gần nhất phát sinh loài xây dựng theo phươngpháp ML 109Bảng 3.11.Mã trình tự gendnaK,groEL vàrpoB hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14 VTH-Ai15 ngân hàng liệuGenbankcấp 112Bảng 3.12.Thành phần G+C mức độ tương đồng DNA-DNA gen hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14 VTH-Ai15 vớiA nitrogenifigenRG1T(=TBRC 15T)và acetiNBRC14818T A 113Bảng3.13.ĐặctínhsinhtrưởngcủaVTH-Ai14,VTH-Ai15,NBRC14818T,TBRC15Tvà TN01LGITở mơi trường chứa 0,0%, 1,0% hoặc30,0%D-glucose 117Bảng 3.14.Đặc tính sinh trưởng VTH-Ai14, VTH-Ai15, NBRC 14818 Tvà TBRC 15Ttrong môi trường chứa 0,0%, 0,5%, 1,0%, 3,0% và10,0%ethanol 118Bảng 3.15.Đặc điểm sinh trưởng điều kiện pH môi trường khác chủng VTH-Ai14, VTH-Ai15, TBRC 15TvàNBRC14818T 118Bảng 3.16.Đặc tính sinh trưởng VTH-Ai14, VTH-Ai15, NBRC 14818 Tvà TBRC 15Ttrong môi trường chứa hàm lượng NaClkhácnhau 119 Bảng3.17.Đặcđiểmsinhtrưởngtrongđiềukiệnnhiệtđộmôitrườngkhácnhaucủacác chủng VTHAi14, VTH-Ai15, TBRC 15TvàNBRC14818T 120 Bảng 3.18.Đặc tính sinh polysaccharide dạng levan từ nguồn carbonhydrate khác VTH-Ai14, VTH-Ai15, TBRC 15TvàNBRC14818T 121 Bảng3.19.ĐặctínhsinhtrưởngcủaVTH-Ai14,VTH-Ai15,NBRC14818T,TBRC15Tvà TN01LGITtrong mơi trường chứa D-mannitolhayglutamate 122Bảng 3.20.Sinh trưởng VTH-Ai14, VTH-Ai15, NBRC 14818Tvà TBRC 15Ttrongmơi trường chứa (NH4)2SO4, ethanol khơngcóvitamin 124Bảng 3.21.Đặc điểm sinh acid từ nguồn carbonhydrate khác hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14 VTH-Ai15 so với hai chủng nitrogenifigensTBRC 15TvàA acetiNBRC14818T chuẩnA 127 Bảng 3.22.Đặc điểm sử dụng nguồn carbonhydrate khác cho sinh trưởng hai chủngAcetobactersp VTH-Ai14 VTH-Ai15 so với hai chủng chuẩn TBRC 15 Tvà NBRC14818T 129 Bảng 3.23.Đặc điểm thủy giải cấu trúc đại phân tử tinh bột tan casein VTH- Ai14, VTH-Ai15, TBRC 15TvàNBRC 14818T 130 Bảng 3.24.Chỉ số tương đồng định danh so sánh liệu MALDI-TOF MS giữahai chủng VTH-Ai14, VTH-Ai15 nitrogenifigensTBRC15T vàA 133Bảng3.25.Thànhphầnacidbéo(%)củahaichủngVTH-Ai14,VTH-Ai15vàcácchủng có mối quan hệ phát sinh lồigần nhất 133Bảng3.26.HàmlượngIAAdochủngVTH-Ai14,VTH-Ai15,TBRC15TvàPAl5Tsinh sau ngày ni cấy môitrườngLGI 137Bảng3.27.MãlưutrữtạihaichủngVTH-Ai14vàVTH-Ai15ởcácbộsưutậpchủngvi sinh VTCC, BCC, TBRCvàNRIC 137 Bảng 3.28.Đặc điểm phân biệt giữaAcetobacter saccharisp nov., chủng VTH-Ai14Tvà VTH-Ai15, với lồiAcetobactercó quan hệ phát sinh lồi gần gũi nhất1 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1.Cây phát sinh lồi thể mối quan hệ chi vi khuẩn họAcetobacteraceae 7Hình1.2.MốiquanhệgiữacáclồitrongchiGluconacetobactervàKomagagateibacterdựa vùng trình 22Hình 1.3.Các gen tự16SrDNA hệ gennifvàfixởGa.diazotrophicus 25Hình 1.4.Khuẩn lạc chủngGa diazotrophicusphân lập từ cà rốt, củ cải đỏ, củ dền đỏ 25Hình cà 1.5.Vịng phê tan sau 74h lân diazotrophicusPAl5Ttrênmơi ni chung trường cấy quanh chứa 5g/l môitrườngLGI khuẩn lạc chủngGa muối lân Ca3(PO4)2, Ca5(PO4)3OHvàFePO4 26Hình 1.6.Vịng tan kẽm chủngGa diazotrophicusR10, PA15Tvà L3 môitrường LGI chứa 10 g/1 glucose bổ sung 0,1% ZnO, ZnCO 3hayZn3(PO4)2 26Hình 1.7.Mối quan hệ phát sinh lồi chiAcetobacterdựa theo trình tự vùng 16S rDNA 28 Hình1.8.HìnhảnhhiểnvichùmtiênmaoởcácchủngGluconobacterdoAsaietal.ghi nhận 36Hình 1.9.Thành phần acid béo tế bào chủngG oxydansNCIB 9013 vàA.acetiIFO3283 38Hình 1.10.Cây phát sinh lồi trình tự gen 16S rDNA cơng bố chi mớiAsaia40Hình 1.11.Cây phát sinh lồi vùng trình tự gendnaK,groEL vàrpoB cơng bố đề x́t lồi mớiA.sicerae 41Hình 1.12.Các chủngAcetobacterVTH-AE75, VTH-AH37, VTH-Ai14 VTHAi15 hình thành nhánh riêng biệt có khả lồimới 47Hình 2.1.Bố trí thí nghiệm thu thập phân loại vi khuẩn acetic có tiềm thuộc nhóm kích thích sinh trưởngthựcvật 63Hình2.2.BốtríthínghiệmnghiêncứuxácđịnhlồiNg.vanglangensiscũnglàvikhuẩn acetic kích thích sinh trưởngthựcvật 64Hình 2.3 Bố trí thí nghiệm phân loạiNeosaiasp VTH-Ai107 đặc tính kích thích sinh trưởng thực vậtN chiangmaiensis 64 ... vi khuẩn acetic theo định hướng kích thích sinh trưởng thực vật 65 3.1.1 Thuthập,phânlậpvàchọnlọcvikhuẩnaceticcókhảnăngthuộcnhómkíchthích sinh trưởngthựcvật 65 3.1.2 Phân tích phát sinh lồi phân. .. phân loại chủng vi khuẩnphânlập 69 3.1.3 Mã tra cứu trình tự chủng phân lậptrênGenBank/EMBL/DDBJ 85 3.1.4 Phânloạivikhuẩnacetictheođịnhhướngkíchthíchsinhtrưởngthựcvậtthuthập phía namViệtNam 86... DỤC VÀ ĐÀO TẠO VI? ??N HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VI? ??T NAM HỌC VI? ??N KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - VŨ THỊ LAN HƯƠNG NGHIÊN CỨU PHÁT SINH LOÀI, PHÂN LOẠI VÀ ĐẶC ĐIỂM CÁC CHỦNG VI KHUẨN ACETIC