ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS, TOMATO SPOTTED WILT VIRUS TRÊN cây THUỐC lá (nic

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ….  … KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS, TOMATO SPOTTED WILT VIRUS TRÊN CÂY THUỐC LÁ (Nicotiana tabacum L.) VÀ CÂY ĐẬU PHỘNG (Arachis hypogaea L.) TẠI TỈNH TÂY NINH BẰNG KỸ THUẬT ELISA VÀ CHẨN ĐOÁN TOBACCO MOSAIC VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT - PCR Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa : 2002-2006 Sinh viên thực hiện: VĂN NGỌC DUNG Thành phố Hồ Chí Minh LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Tháng 09/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ….  … KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS, TOMATO SPOTTED WILT VIRUS TRÊN CÂY THUỐC LÁ (Nicotiana tabacum L.) VÀ CÂY ĐẬU PHỘNG (Arachis hypogaea L.) TẠI TỈNH TÂY NINH BẰNG KỸ THUẬT ELISA VÀ CHẨN ĐOÁN TOBACCO MOSAIC VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT - PCR Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực PGS TS BÙI CÁCH TUYẾN VĂN NGỌC DUNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM TẠ Con xin kính dâng lên cha mẹ lịng biết ơn sâu sắc, người sinh thành, dưỡng dục để có ngày hôm Các em đã, chị chia sẻ vui buồn sống Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban giám hiệu Trường Đại học Nơng lâm TP Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học tạo nhiều thuận lợi học tập cho em suốt bốn năm đại học Em xin cám ơn Ban giám đốc Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hóa Sinh Trường Đại học Nơng lâm TP Hồ Chí Minh anh chị Trung tâm tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em thời gian thực tập tốt nghiệp Vô biết ơn PGS TS Bùi Cách Tuyến tận tình hướng dẫn truyền đạt kinh nghiệm q báu cho em để em hồn tất khóa luận tốt nghiệp Trân trọng cám ơn TS Bùi Minh Trí Q Thầy - Cơ ngồi trường hết lòng truyền đạt kiến thức bổ ích cho em suốt thời gian học tập Xin chân thành cảm ơn chị Hưng, chị Hà, anh Vũ, anh Trường, chị Hạnh, chị Dương sẵn lòng giúp đỡ để em hồn thành tốt khóa luận Cảm ơn bạn lớp Công Nghệ Sinh Học K28, niên khóa 2002 – 2006, ln đồng hành, động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập thực khóa luận TP Hồ Chí Minh, tháng 09 năm 2006 Văn Ngọc Dung iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÓM TẮT VĂN NGỌC DUNG Đại học Nơng lâm TP Hồ Chí Minh Tháng 09/ 2006 “ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS, TOMATO SPOTTED WILT VIRUS TRÊN CÂY THUỐC LÁ (NICOTIANA TABACUM L.) VÀ CÂY ĐẬU PHỘNG (ARACHIS HYPOGAEA L.) TẠI TỈNH TÂY NINH BẰNG KỸ THUẬT ELISA VÀ CHẨN ĐOÁN TOBACCO MOSAIC VIRUS BẰNG KỸ THUẬT RT – PCR” Hội đồng hướng dẫn PGS TS BÙI CÁCH TUYẾN Đề tài thực huyện Tân Biên, huyện Bến Cầu, huyện Dương Minh Châu tỉnh Tây Ninh Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hóa Sinh trường Đại học Nơng lâm TP Hồ Chí Minh, từ tháng 03/ 2006 đến tháng 08/ 2006 Nội dung tiến hành: Tìm hiểu mức độ nhiễm TMV, CMV TSWV thuốc đậu phộng tỉnh Tây Ninh Thu thập mẫu có triệu chứng nhiễm bệnh địa bàn điều tra Tiến hành chẩn đoán kỹ thuật ELISA nhằm xác định mẫu dương tính với TMV, CMV TSWV Chọn mẫu dương tính với TMV thực RT – PCR, với mục đích xây dựng quy trình RT – PCR chẩn đốn TMV, nhằm khẳng định lại kết ELISA Kết thu được: Chưa phát TSWV thuốc đậu phộng huyện thu thập mẫu tỉnh Tây Ninh Thuốc Tây Ninh nhiễm TMV với tỷ lệ cao (69,1%) Trong đó, huyện Tân Biên nhiễm TMV chủ yếu (69,2%) Bến Cầu CMV (60,6%) Kỹ thuật RT – PCR bước đầu khuếch đại đoạn gen đặc trưng TMV với kích thước 1000 bp Điều cho thấy dòng TMV gây bệnh thuốc Việt Nam biến đổi so với dòng virus khác iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC PHẦN TRANG Trang tựa Lời cảm tạ .iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh sách chữ viết tắt x Danh sách hình xi Danh sách bảng xii Danh sách biểu đồ xiii MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích – Yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu thuốc 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Nguồn gốc phân bố 2.1.3 Đặc điểm di truyền 2.1.4 Đặc điểm hình thái 2.1.5 Đặc điểm trồng trọt 2.1.5.1 Yếu tố khí hậu 2.1.5.2 Yếu tố đất đai 2.1.5.3 Yếu tố sinh vật 2.1.6 Giá trị kinh tế sử dụng 2.2 Giới thiệu đậu phộng 2.2.1 Vị trí phân loại 2.2.2 Nguồn gốc phân bố v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.2.3 Đặc điểm di truyền 2.2.4 Đặc điểm hình thái 2.2.5 Đặc điểm trồng trọt 2.2.5.1 Yếu tố khí hậu 2.2.5.2 Yếu tố đất đai 2.2.5.3 Yếu tố sinh vật 2.2.6 Giá trị kinh tế sử dụng 2.3 Một số bệnh thực vật virus gây 11 2.3.1 Sơ lược chung virus gây hại thực vật 11 2.3.1.1 Đặc điểm chung 11 2.3.1.2 Sự lan truyền bệnh virus thực vật 11 2.3.2 Một số bệnh virus khác gây hại thuốc 12 2.3.3 Một số bệnh virus khác gây hại đậu phộng 13 2.4 Giới thiệu Tomato Spotted Wilt Virus 14 2.4.1 Nguồn gốc lan truyền TSWV 15 2.4.2 Cấu trúc virus TSWV 15 2.4.3 Phân loại TSWV 15 2.4.4 Dãy ký chủ TSWV 16 2.4.5 Con đường truyền bệnh 16 2.4.6 Điều kiện phát triển bệnh 17 2.4.7 Triệu chứng bệnh nhiễm TSWV 17 2.4.8 Khống chế bệnh TSWV 20 2.5 Giới thiệu Tobacco Mosaic Virus 20 2.5.1 Nguồn gốc TMV 20 2.5.2 Cấu trúc virus TMV 21 2.5.3 Phân loại TMV 21 2.5.4 Dãy ký chủ TMV 21 2.5.5 Con đường truyền bệnh 21 2.5.6 Điều kiện phát triển bệnh 22 2.5.7 Triệu chứng bệnh nhiễm TMV 22 2.5.8 Khống chế bệnh TMV 24 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.6 Giới thiệu Cucumber Mosaic Virus 24 2.6.1 Nguồn gốc CMV 24 2.6.2 Cấu trúc virus CMV 24 2.6.3 Phân loại CMV 24 2.6.4 Dãy ký chủ CMV 25 2.6.5 Con đường truyền bệnh 25 2.6.6 Điều kiện phát triển bệnh 26 2.6.7 Triệu chứng bệnh nhiễm CMV 27 2.6.8 Khống chế bệnh CMV 27 2.7 Phương pháp chẩn đoán bệnh virus gây 29 2.7.1 Phương pháp chẩn đốn kính hiển vi điện tử 29 2.7.2 Phương pháp chẩn đoán thị 29 2.7.3 Phương pháp chẩn đoán dựa vào triệu chứng 29 2.8 ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 30 2.8.1 Nguyên lý ELISA 30 2.8.2 Phân loại ELISA 30 2.8.2.1 ELISA trực tiếp 30 2.8.2.2 ELISA gián tiếp 30 2.8.2.3 Sandwich ELISA 31 2.8.3 Các yếu tố ảnh hưởng phản ứng ELISA 31 2.8.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết phản ứng ELISA 31 2.9 PCR (Polymerase Chain Reaction) 31 2.9.1 Nguyên tắc 31 2.9.2 Ưu nhược điểm phản ứng PCR 33 2.10 RT – PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction) 34 2.10.1 Nguyên tắc 34 2.10.2 Phương pháp thực phản ứng tổng hợp cDNA 34 2.11 Một số kỹ thuật PCR khác 35 2.11.1 Kỹ thuật PCR đảo 35 2.11.2 Kỹ thuật NESTED – PCR 35 2.11.3 Kỹ thuật RACE (Rapia Amplification of cDNA Ends) 35 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.12 Những nghiên cứu nước bệnh TMV, CMV, TSWV gây 36 2.13.1 Những nghiên cứu giới 36 2.13.2 Những nghiên cứu Việt Nam 36 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 37 3.2 Phương pháp lấy mẫu 37 3.3 Dụng cụ 37 3.4 Phương pháp chẩn đoán TMV, CMV TSWV dDAS – ELISA 38 3.4.1 Hóa chất 38 3.4.2 Phương pháp thực 38 3.4.2.1 Ly trích mẫu 38 3.4.2.2 Thực phản ứng ELISA 38 3.5 Phương pháp chẩn đoán TMV RT – PCR 40 3.5.1 Hóa chất 40 3.5.2 Phương pháp thực 41 3.5.2.1 Ly trích RNA 41 3.5.2.2 Khuếch đại RT – PCR 42 3.5.2.3 Đổ gel điện di 43 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 4.1 Chẩn đoán kỹ thuật ELISA 45 4.1.1 Tỷ lệ nhiễm TSWV đậu phộng huyện Dương Minh Châu Bến Cầu 45 4.1.2 Tỷ lệ nhiễm CMV, TMV TSWV thuốc thu thập huyện Tân Biên Bến Cầu 46 4.1.3 Tỷ lệ nhiễm CMV thuốc huyện Tân Biên Bến Cầu 47 4.1.4 Tỷ lệ nhiễm TMV thuốc huyện Tân Biên Bến Cầu 48 4.1.5 Tỷ lệ nhiễm CMV hay nhiễm TMV hay nhiễm hỗn hợp CMV TMV số mẫu thu thập 50 4.1.6 Tỷ lệ bệnh theo triệu chứng quan sát thuốc 51 4.2 Kết RT – PCR 55 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 PHỤ LỤC 63 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 4.1 Kết ELISA TSWV đậu phộng 45 Bảng 4.2 Kết ELISA TMV, CMV TSWV số mẫu thuốc 46 Bảng 4.3 Kết ELISA CMV thuốc 47 Bảng 4.4 Kết ELISA TMV thuốc 48 Bảng 4.5 Kết ELISA mẫu thuốc nhiễm hỗn hợp CMV TMV mẫu nhiễm CMV hay TMV 50 Bảng 4.6 Tỷ lệ thuốc nhiễm bệnh theo triệu chứng quan sát 51 xii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ BIỂU ĐỒ TRANG Biểu đồ 4.1 Tỷ lệ số mẫu thuốc dương tính, âm tính với CMV, TMV, TSWV 46 Biểu đồ 4.2 Tỷ lệ thuốc nhiễm CMV Tân Biên Bến Cầu 47 Biểu đồ 4.3 Tỷ lệ thuốc nhiễm TMV Tân Biên Bến Cầu 48 Biểu đồ 4.4 Tỷ lệ mẫu thuốc nhiễm hỗn hợp TMV CMV mẫu nhiễm CMV hay TMV 50 Biểu đồ 4.5 Tỷ lệ thuốc nhiễm bệnh theo triệu chứng 51 xiii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Thuốc (Nicotiana tabacum L.) đậu phộng (Arachis hypogaea L.) hai số loại trồng công nghiệp quan trọng Chúng mặt hàng tiêu dùng phục vụ cho đời sống người mà nguồn thu ngân sách đáng kể nhiều quốc gia giới Do lợi ích kinh tế đó, nên chúng trồng nhiều nơi giới không ngừng mở rộng diện tích Tại Việt Nam, việc trồng thuốc đậu phộng đem lại giá trị định, phương diện sử dụng lẫn phương diện thương mại, đóng góp phần khơng nhỏ vào tổng thu nhập quốc gia Tuy nhiên, loại bệnh theo mà khơng ngừng phát triển, cơng trồng, gây khơng tổn hại cho việc trồng trọt sử dụng, bệnh virus gây nên Hiện nay, với khoa học tiên tiến, sinh học đại phát 650 loài virus gây bệnh cho thực vật Tỉnh Tây Ninh có diện tích trồng thuốc đậu phộng lớn, sản lượng thu hoạch hàng năm cao mang lại nhiều lợi nhuận Nhưng năm gần đây, việc trồng trọt hai loại gặp nhiều tổn thất bệnh virus gây Trong đó, Cucumber Mosaic Virus (CMV), Tobacco Mosaic Virus (TMV) Tomato Spotted Wilt Virus (TSWV) ba loại virus mà tác hại vơ nghiêm trọng, dẫn tới giảm suất chất lượng nguyên liệu trồng Một bệnh phát triển thành dịch khó khống chế có phải tiêu hủy tất diện tích trồng trọt Việc làm gây nhiều khó khăn đem lại tổn thất lớn cho người trực tiếp canh tác cho kinh tế đất nước Chính lý mà chúng tơi thực đề tài: “Đánh giá tình trạng nhiễm Cucumber Mosaic Virus, Tobacco Mosaic Virus, Tomato Spotted Wilt Virus thuốc (Nicotiana tabacum L.) đậu phộng (Arachis hypogaea L.) tỉnh Tây Ninh kỹ thuật ELISA chẩn đoán Tobacco Mosaic Virus kỹ thuật RT - PCR”, nhằm đưa phương pháp phát bệnh sớm nhất, từ có biện pháp ngăn chặn kịp thời, với mong muốn giảm bớt thiệt hại virus gây LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ra, góp phần ổn định nguồn thu nhập từ thuốc đậu phộng cho tỉnh Tây Ninh nói riêng nước nói chung 1.2 Mục đích u cầu 1.2.1 Mục đích Chẩn đốn bệnh Cucumber Mosaic Virus (CMV), Tobacco Mosaic Virus (TMV) Tomato Spotted Wilt Virus (TSWV) thuốc (Nicotiana tabacum L.) đậu phộng (Arachis hypogaea L.) kỹ thuật DAS – ELISA (Double Antibody Sandwich – Enzyme Linked Immunosorbent Assay) Phát Tobacco Mosaic Virus kỹ thuật RT – PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction) 1.2.2 Yêu cầu Lấy mẫu thuốc có triệu chứng nhiễm CMV, TMV, TSWV đậu phộng có triệu chứng nhiễm TSWV ngồi đồng ruộng, huyện địa bàn tỉnh Tây Ninh Nắm vững nguyên tắc bước tiến hành kỹ thuật DAS – ELISA RT – PCR, sau tiến hành chẩn đoán LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu thuốc 2.1.1 Vị trí phân loại Ngành : Angiospermae Lớp : Dicotyledones Họ : Solanaceae Tên khoa học : Nicotiana tabacum L Tên tiếng Anh : Tobacco Tên tiếng Việt : Thuốc 2.1.2 Nguồn gốc phân bố Hình 2.1 Nicotiana tabacum L Cây thuốc hoang dại có cách khoảng bốn ngàn năm, trùng với văn minh người da đỏ vùng Trung Nam Mỹ Hàng ngàn năm trước Công nguyên, người da đỏ trồng thuốc vùng đất mênh mông Nam Mỹ, Trung Mỹ, Mexico Bắc Mỹ, quần đảo Antille số nơi khác Họ dùng thuốc với mục đích nghi lễ chữa bệnh Năm 1492, chuyến thám hiểm tìm châu Mỹ, Christophe Columbus phát thấy người xứ quần đảo Antille hút loại trịn gọi Tabaccos Khơng lâu sau đó, thuốc phổ biến gieo trồng khắp giới Vào năm 1530 – 1600, thuốc giáo sĩ người Pháp đưa vào Việt Nam 2.1.3 Đặc điểm di truyền Bộ nhiễm sắc thể 2n = 48 Hàm lượng DNA nhân tế bào: 3,9 × 10-12 gram/ nhiễm sắc thể Số cặp base nhiễm sắc thể: 3,73 × 109 bp 2.1.4 Đặc điểm hình thái Rễ thuốc hệ thống gồm: Rễ cái, rễ nhánh, rễ hấp thụ rễ bất định Rễ thường ăn sâu xuống đất từ 1,5 – m Thuốc cỏ niên, trưởng thành thường cao – m, phân nhánh Trên thân có nhiều lóng, phân cách đốt LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Lá thuốc to, đơn nguyên, hình bầu dục, đầu nhọn, mọc cách, mềm, có lơng dính hai mặt Số thân trung bình từ 20 – 35 Hoa đơn, lưỡng tính, có năm cánh, màu trắng hồng, hồng tươi, dài – cm Quả nang, hai ngăn Mỗi có 100 – 150 chùm hoa, có (tùy giống) có tới 400 – 500 chùm hoa Hạt thuốc nhỏ, cứng, bề mặt vỏ hạt sù sì, nhiều nếp nhăn 2.1.5 Đặc điểm trồng trọt 2.1.5.1 Yếu tố khí hậu Thuốc ưa sáng trực tiếp Cây thích nghi với phổ khí hậu rộng Nhiệt độ lý tưởng cho thuốc lá: 25oC – 28oC Độ ẩm khơng khí thích hợp cho thuốc lá: 70% 80% Độ ẩm đất thích hợp: Giai đoạn đầu sinh trưởng: 60% 65% Giai đoạn sinh trưởng mạnh: 80% Giai đoạn già chín lá: 60% 2.1.5.2 Yếu tố đất đai Cây thích hợp với đất nhẹ (đất pha cát đất cát), tơi xốp, thông thoáng tốt, thoát nước dễ Độ pH tốt cho đất trồng thuốc thời kỳ đầu pH = 6, kiềm thời kỳ sau pH từ 7,5 đến 7,9 Lượng phân bón là: N: 40 – 80kg/ ha, P: 30 – 90kg/ K: 50 – 110kg/ 2.1.5.3 Yếu tố sinh vật Cây dại, ký chủ, thành phần gây hại đến sinh trưởng thuốc Động vật gây hại (trực tiếp, gián tiếp) cho thuốc nước ta có nhiều Tại miền Bắc Việt Nam, theo kết điều tra cho thấy có 40 lồi sâu bệnh xuất gây hại vùng trồng thuốc Trong có loại bệnh virus, vi khuẩn, 12 loại bệnh nấm 16 loại sâu 2.1.6 Giá trị kinh tế sử dụng LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Lợi nhuận người trồng thuốc cao Sản phẩm thuốc sản xuất loại thuốc hút, nhai, ngửi Các phận thuốc có tỷ lệ: Lá: 30%, thân: 40%, hạt: 20% rễ: 10% Như thế, nước có cơng nghiệp chưa phát triển, việc sử dụng suất sinh học thấp ngồi khơng tận dụng phận lại để sản xuất sản phẩm khác Thành phần độc hại thuốc có nhiều, trình nhiệt phân, ngưng tụ đốt, cháy (hút) tạo số chất, ảnh hưởng sâu sắc đến hóa tính thuốc Vì thế, để hạn chế độc hại thuốc đòi hỏi nhà sản xuất thuốc phải nỗ lực tìm biện pháp để giảm bớt thành phần Người ta tận dụng loại phế thải thân, thuốc để sản xuất sunfat nicotin, có tác dụng tốt phòng trừ sâu bệnh đồng ruộng Từ thân thuốc lá, giáo sư R L Wain (Anh) chiết xuất sclareol 13 epi sclareol có tác dụng phòng trừ bệnh rỉ sắt họ đậu Sản xuất nước hoa từ hoa thuốc lá, acid nicotinic, acid citric lấy từ thuốc nhiều từ – lần cam chanh để sử dụng vào công nghiệp thực phẩm Chiết xuất hạt thuốc 35% 40% dầu sử dụng cơng nghiệp Thân thuốc cịn chế biến thành thức ăn gia súc có giá trị dinh dưỡng cao, thu – 3,5 tấn/ thu 12% 15% protein cao cấp thuốc để làm thực phẩm Ngoài ra, phế thải thuốc trình chế biến vụn, bụi tận dụng chế biến làm phân hữu tốt Về mặt nghiên cứu, thuốc coi đối tượng thử nghiệm nghiên cứu sinh học Nicotiana spp dùng làm mơ hình nghiên cứu in vitro tái sinh thực vật từ năm 1957 Trong nghiên cứu cổ điển Skoog Miller Nicotiana tabacum đối tượng ý sớm Các nghiên cứu nuôi cấy mô, sinh học phân tử đạt nhiều thành công thuốc Hy vọng tương lai, thuốc cịn có nhiều cơng dụng khác để phục vụ cho nhu cầu xã hội LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com (A) (B) (D) (C) (E) (F) Hình 2.2 Một số hình ảnh thuốc Nicotiana tabacum L (A): Vườn thuốc (B): Đặc điểm hình thái (C), (D), (E), (F): Sự đa dạng chủng loại màu sắc (http://www.search.com/reference/tobacco/) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.2 Giới thiệu đậu phộng 2.2.1 Vị trí phân loại Ngành : Magnoliophyta Lớp : Magnoliopsida Bộ : Fabales Họ : Fabaceae Phân họ : Faboideae Giống : Aeshynoenaeae Tên khoa học : Arachis hypogaea L Tên tiếng Anh : Peanut, groundnut Tên tiếng Việt : Đậu phộng, lạc 2.2.2 Nguồn gốc phân bố Hình 2.3 Arachis hypogaea L Cây đậu phộng có từ khoảng 1500 – 1200 năm trước Công nguyên Người Inca trồng đậu phộng loại rau tên “ynchis” dọc theo vùng duyên hải Peru Đến 1609, người Tây Ban Nha phát thấy vùng trồng đậu phộng Nam Mỹ, đặc biệt vùng đảo Tây Ấn, Mexico, vùng biển Đông – Đông Bắc Braxin, dãi đất ấm áp vịnh Ria Plata (Argentina, Paragoay, cực Tây Nam Braxin, Peru), gọi tên “mani” Có nhiều quan điểm nhiều tác giả tranh luận trung tâm khởi thủy xác lồi Arachis hypogaea Nhìn chung quan điểm cho Braxin trung tâm khởi nguyên loài Arachis hypogaea, số tác giả lại cho nơi xuất xứ Bolivia (Krapovickas, 1968, Cardenas, 1969), vùng thượng lưu sông Plata Hiện nay, đậu phộng trồng rộng rãi 100 nước từ 40o Bắc đến 40o Nam thuộc vùng nhiệt đới vùng ấm áp giới Châu Á đứng hàng đầu giới diện tích trồng đậu sản lượng, châu Phi, Bắc Mỹ đến Nam Mỹ Trong số 25 nước trồng đậu phộng Châu Á, Việt Nam đứng hàng thứ 5, đậu phộng trồng phổ biến từ xưa đến nhiều nơi 2.2.3 Đặc điểm di truyền Bộ nhiễm sắc thể: 2n = 40 Hàm lượng DNA nhân tế bào: 4,31 × 10-12 gram/ nhiễm sắc thể Số cặp base nhiễm sắc thể: 4,2 × 109 bp LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.2.4 Đặc điểm hình thái Đậu phộng có rễ cọc phát triển tốt Rễ dạng bò khoẻ dạng mọc đứng Đây cỏ nhỏ, niên, nhánh sà, có lơng, chiều cao từ 20 – 40 cm Thân mọc từ đốt cuối trụ mầm, hai mầm đối xứng Có chét ( có Erectoides), hình dạng thay đổi từ thn, lưỡi mác đến elip, elip thn dài, có lơng bao phủ Hoa đậu phộng dạng cánh bướm, màu vàng, cánh rời, phát hoa nách lá, hoa gần mặt đất Quả hình thành đất, thắt từ – đốt, đốt chứa hạt với mầm phơi thẳng Bế có bì chạm trổ Hạt có vỏ lụa mỏng, đỏ, chiều dài – 21 mm, đường kính – 13 mm 2.2.5 Đặc điểm trồng trọt 2.2.5.1 Yếu tố khí hậu Cây sinh trưởng cần nhiều ánh sáng mặt trời thời tiết ấm nóng Khơng mẫn cảm với chiều dài ngày Ở vùng có lượng mưa từ 500 – 1250 mm phân phối đều, cho sản lượng cao Đậu phộng không chịu đông giá úng nước 2.2.5.2 Yếu tố đất đai Đất đai lý tưởng cho đậu phộng thoát nước nhanh, màu sáng, lỏng, dễ vỡ, phù sa pha cát có đầy đủ canxi lượng chất hữu vừa phải (York Codwell, 1951) Có thể đạt sản lượng cao đất chua pH = – 6,4 (Woodrof, 1966) Cây mẫn cảm với đất mặn Đậu phộng có nhu cầu chất dinh dưỡng loại cao 2.2.5.3 Yếu tố sinh vật Có 90 lồi sâu, giống tuyến trùng gây hại cho đậu phộng đồng ruộng Ngồi cịn chịu ảnh hưởng loại bệnh nấm Bên cạnh cỏ dại tranh với độ ẩm đất, chất dinh dưỡng, ánh sáng ký chủ chuyển giao số bệnh Ngồi ra, đậu phộng cịn chịu thiệt hại loài sâu hại kho mọt LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.2.6 Giá trị kinh tế sử dụng Đậu phộng thực phẩm, có dầu quan trọng dùng chế biến thành dầu thực vật Trong số loại hạt có dầu trồng hàng năm giới, đậu phộng đứng thứ hai sau đậu tương diện tích trồng sản lượng Giá trị dinh dưỡng 100g đậu phộng gồm có: 22g cacbonhydrat, 50g chất béo hàm lượng protein 24g 100g đậu phộng cung cấp 590 KCalo Các nhà khoa học thuộc Đại học Y Harvard (Mỹ) rút kết luận: Người thường xuyên ăn đậu phộng hay bơ lạc có nguy mắc bệnh tiểu đường type so với người khác Ăn 140g đậu phộng hay bơ lạc tuần giảm 27% nguy mắc bệnh Điều giải thích đậu phộng có chứa chất béo chưa bão hịa giúp cải thiện độ ổn định insulin đường máu Ngoài chất chống oxy hóa đậu phộng có chứa nhiều thành phần dinh dưỡng khác nên cịn giúp ngăn ngừa bệnh tim nhờ làm giảm lượng cholesterol máu Đậu phộng xuất thu ngoại tệ nước ta Hiện nay, vùng chun canh, trồng phổ biến nhiều vùng nước Mặc dù có vai trị quan trọng vậy, nghiên cứu nghiên cứu ứng dụng đậu phộng nước ta nhìn chung cịn nhiều hạn chế LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 10 (A) (C) (B) (D) Hình 2.4 Một số hình ảnh đậu phộng Arachis hypogaea L (A): Đặc điểm hình thái (B): Hoa đậu phộng (C): Cây đậu phộng trưởng thành (D): Hạt đậu phộng (http://en.wikipedia.org/wiki/Peanut) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 11 2.3 Một số bệnh thực vật virus gây 2.3.1 Sơ lƣợc chung virus gây hại thực vật 2.3.1.1 Đặc điểm chung Virus thực vật thuộc loại ký sinh chuyên tính cao độ Chúng thiếu hệ thống men, hồn tồn phụ thuộc vào tế bào sống trồng để phát triển tích lũy số lượng Virus nhiễm bệnh cho hay nhiều loài lồi nhiễm hay nhiều virus Chúng không giết chết tế bào mà dùng vật chất tế bào chủ tạo thành nhiều virus Cơ thể thực vật kiệt quệ dần dẫn đến thối hóa, suy tàn chết Virus thực vật khơng có cấu tạo tế bào, nucleoprotein kích thước nhỏ bé, cấu tạo đơn giản: Là protein acid nucleic mà chủ yếu RNA Tuy nhiên, có khoảng 25 lồi virus chứa DNA Protein gồm nhiều loại acid amin tạo thành: Alanin, glycin, lizin, aginin, acid asparaginic, acid glutamic, lesin, sistein, prolin, triptophan Các acid nucleic (RNA hay DNA) định chất protein chúng Trọng lượng thể virus khác từ 4,6 triệu Da đến 39 triệu Da Chúng có nhiều hình dạng khác nhau: Hình gậy, hình cầu, hình sợi, hình tinh trùng Một số virus điều kiện định mơi trường tạo thành tinh thể 2.3.1.2 Sự lan truyền bệnh virus thực vật Đa số virus di chuyển theo bó mạch libe từ xuống lại từ lên dòng chất dinh dưỡng vận chuyển quan sinh thực Virus di chuyển từ tế bào sang tế bào khác cầu nối nguyên sinh chậm chạp, di chuyển mơ mạch dẫn có tốc độ nhanh Các đường truyền bệnh: Truyền qua nhân giống vơ tính: Ghép cây, ghép chồi, chiết cành, gốc ghép, cành ghép, cành giâm, nuôi cấy mô thực vật hay nhân giống vô tính từ củ hay thân Truyền qua hạt giống hay phấn hoa trồng: Có khoảng 100 lồi virus có khả này, phần lớn tập trung họ bầu bí LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 12 Truyền bệnh học, tiếp xúc: Trồng với mật độ dày, giao tán, cọ sát bệnh với khỏe Hay truyền qua vết thương gió, chăm sóc, thu hái, gia súc Truyền bệnh côn trùng môi giới (nhện, tuyến trùng): Côn trùng nhóm mơi giới (vectơ) truyền bệnh virus quan trọng gây thiệt hại kinh tế lớn đồng ruộng Một loại côn trùng thường môi giới truyền bệnh cho loại virus mà Các dạng tồn virus thể côn trùng: Nhóm virus khơng bền vững virus khơng có khả tồn thể trùng từ vài phút tới Đó virus lây bệnh nhanh chóng khoảng thời gian từ 15 giây tới 30 phút sau chích hút bệnh lây Nhóm virus bền vững virus sống bền vững thể côn trùng thời gian từ vài tới vài tuần lễ có khả truyền bệnh cho truyền bệnh đến suốt đời Đây kiểu truyền bệnh theo phương pháp sinh học Nhóm virus bán bền vững virus có kiểu truyền bệnh trung gian hai nhóm Trong mối quan hệ sinh học virus trùng virus có lợi: Tăng số lượng, tăng cường tính ký sinh gây bệnh đưa vào tầng mô mẫn cảm bệnh Nhưng côn trùng môi giới bị giảm tuổi thọ, sức sinh sản sức sống giảm Truyền bệnh nhờ nấm: Đa số nấm sống đất có khả truyền bệnh virus cho Truyền bệnh dây tơ hồng (Cuscuta sp.): Đây thực vật thượng đẳng ký sinh tạo rễ ăn sâu vào thân sống để hút nhựa Do vậy, có nhiều loại virus thực vật di chuyển theo thân dây tơ hồng từ sang khác để gây bệnh 2.3.2 Một số bệnh virus khác gây hại thuốc  Bệnh virus Y khoai tây Triệu chứng: Rất đa dạng, điển hình khảm gân xanh đậm, nhăn nheo, biến dạng, bị lùn Virus gây bệnh: Potato Virus Y (PVY), thuộc nhóm Potyvirus LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 13  Bệnh virus gây vết hằn thuốc Triệu chứng: Bao gồm triệu chứng TMV, CMV, bị khảm có vệt xanh đậm dọc theo gân Virus gây bệnh: Tobacco Etch Virus (TEV), thuộc nhóm Potyvirus  Bệnh virus đốm gân thuốc Triệu chứng: Đa dạng tùy theo dòng thuốc khác nhau, bị khảm nhẹ, biến dạng, triệu chứng điển hình hóa vàng dọc theo gân Virus gây bệnh: Tobacco Vein Mottling Virus (TVMV), nhóm Potyvirus  Bệnh virus gây khảm cỏ linh lăng Triệu chứng: Trên tàn xuất dạng khảm có màu vàng trắng hay trắng, màu vùng mô gân lá, thường xem bệnh khảm calico, dạng sọc vàng chết hoại xảy Thông thường, không bị biến dạng, lùn đơi trái bị biến dạng Virus gây bệnh: Alfalfa Mosaic Virus (AMV)  Bệnh virus cong thuốc Triệu chứng: Lá cong biến dạng, lốm đốm vàng chết hoại, bị lùn Virus gây bệnh: Tobacco Leaf Curl Virus (TLCV) 2.3.3 Một số bệnh virus khác gây hại đậu phộng  Bệnh hoại tử chồi (thối ngọn) Triệu chứng: Lá có vịng đồng tâm úa vàng mảng vàng xanh xen lẫn nhau, thối ngọn, lan sang phần khác, bị ức chế sinh trưởng, nách nảy chồi nhanh, chồi nách giảm kích thước, bị vặn, đốm khảm úa vàng Cây bị nhiễm sớm xoăn lại thành dạng bụi Virus gây bệnh: Tomato Spotted Wilt Virus (TSWV)  Bệnh chùn đậu phộng virus Triệu chứng: Đầu tiên xuất vết đốm trịn úa vàng, sau mờ dần, phiến màu xanh đậm với đốm nhạt, cằn lại, xanh tối, tạo thành búi, có đốm khảm, vịng vàng, nhỏ, rễ phát triển, đen tối, vỏ dễ bong, dễ nhiễm vật hại khác Virus gây bệnh: Peanut Clump Virus (PCV) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... Chí Minh Tháng 09/ 2006 “ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS, TOMATO SPOTTED WILT VIRUS TRÊN CÂY THUỐC LÁ (NICOTIANA TABACUM L.) VÀ CÂY ĐẬU PHỘNG (ARACHIS HYPOGAEA... đất nước Chính lý mà chúng tơi thực đề tài: ? ?Đánh giá tình trạng nhiễm Cucumber Mosaic Virus, Tobacco Mosaic Virus, Tomato Spotted Wilt Virus thuốc (Nicotiana tabacum L.) đậu phộng (Arachis hypogaea... BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ….  … KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NHIỄM CUCUMBER MOSAIC VIRUS, TOBACCO MOSAIC VIRUS, TOMATO