Nghiên cứu nuôi cấy nấm isaria sp và thử nghiệm hiệu lực phòng trừ nhện đỏ (tetranychus sp )

BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY NẤM Isaria sp VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU LỰC PHÒNG TRỪ NHỆN ĐỎ (Tetranychus sp.) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG /2020 BAN QUẢN LÝ KHU NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO TP.HCM TRUNG TÂM ƯƠM TẠO DOANH NGHIỆP NÔNG NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY NẤM Isaria sp VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU LỰC PHÒNG TRỪ NHỆN ĐỎ (Tetranychus sp.) CƠ QUAN CHỦ TRÌ CHỦ NHIỆM NHIỆM VỤ Nguyễn Tiến Duy THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG /2020 MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v TÓM TẮT .viii THÔNG TIN CHUNG ix Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu nuôi cấy nấm Isaria sp thử nghiệm hiệu lực phòng trừ nhện đỏ (Tetranychus sp.) ix Nội dung x Sản phẩm x PHẦN MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết Mục tiêu nhiệm vụ Giới hạn nghiên cứu CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan nấm ký sinh côn trùng chi nấm Isaria 1.2 Tổng quan nhện đỏ hai chấm Tetranychus sp gây hại trồng 1.3 Tình hình nghiên cứu nước 1.4 Đánh giá trạng cơng trình nghiên cứu liên quan đến đề tài 13 CHƯƠNG II: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nội dung nghiên cứu 18 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 18 2.3 Vật liệu nghiên cứu 18 2.4 Phương pháp nghiên cứu 19 i 2.4.1 Khảo sát ảnh hưởng bốn loại môi trường dinh dưỡng CAM, CDA, SDAY1 SDAY3 đến hình thành phát triển bào tử nấm chủng nấm Isaria sp phân lập tự nhiên 19 2.4.2 Sản xuất chế phẩm sinh học Isaria sp phòng trừ nhện đỏ hai chấm 22 2.4.3 Thử nghiệm hoạt lực sinh học chế phẩm nấm Isaria sp nhện đỏ hai chấm điều kiện đồng ruộng 29 2.5 Phương pháp phân tích số liệu 31 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Khảo sát ảnh hưởng bốn loại môi trường dinh dưỡng CAM, CDA, SDAY1 SDAY3 đến hình thành phát triển bào tử nấm chủng nấm Isaria sp phân lập tự nhiên 32 3.1.1 Sự phát triển chủng nấm Isaria japonica - CT2 mơi trường thí nghiệm 32 3.1.2 Sự phát triển chủng nấm Isaria cicadae - CT3 môi trường thí nghiệm 34 3.1.3 Sự phát triển chủng nấm Isaria farinosa - CT11 mơi trường thí nghiệm 36 3.1.4 Sự phát triển chủng nấm Isaria takamizusanensis - CT25 mơi trường thí nghiệm 38 3.1.5 Sự phát triển chủng nấm môi trường CAM 40 3.2 Sản xuất chế phẩm sinh học phòng trừ nhện đỏ hai chấm 41 3.3 Kết thí nghiệm đánh giá hiệu quả, hoạt lực sinh học dạng chế phẩm nhện đỏ hai chấm điều kiện phịng thí nghiệm 46 ii 3.4 Thử nghiệm hoạt lực sinh học chế phẩm nấm Isaria sp nhện đỏ hai chấm điều kiện đồng ruộng 53 3.5 Sản phẩm nhiệm vụ 534 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 Kết luận 60 Kiến nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 PHỤ LỤC 64 iii DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm khảo sát loại môi trường chủng nấm Isaria sp 19 Bảng 2.2 Thành phần môi trường dinh dưỡng bốn loại mơi trường thí nghiệm 21 Bảng 3.1 Ảnh hưởng môi trường ni cấy đến phát triển hình thành bào tử chủng nấm Isaria japonica - CT2 33 Bảng 3.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển hình thành bào tử chủng nấm Isaria cicadae - CT3 36 Bảng 3.3 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển hình thành bào tử chủng nấm Isaria farinosa - CT11 37 Bảng 3.4 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát triển hình thành bào tử chủng nấm Isaria takamizusanensi - CT25 39 Bảng 3.5 Mật độ bào tử chủng nấm Isaria phân lập môi trường CAM sau 19 ngày nuôi cấy 40 Bảng 3.6 Đường kính sợi nấm mật độ bào tử chủng nấm Isaria farinosa - CT11 nuôi cấy điều kiện nhiệt độ, ánh sáng khác 41 Bảng 3.7 So sánh chế phẩm Isaria sp dạng bột dạng lỏng 45 Bảng 3.8 Hiệu lực phòng trừ nhện sau phun chế phẩm (cp) thời điểm ngày, ngày ngày, ngày, ngày 50 Bảng 3.9 Hiệu lực phòng trừ nhện sau phun thuốc chế phẩm Isaria sp (cp) cà tím ngồi đồng ruộng sau xử lý 1, 3, ,7 ,10 ngày 54 iv DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1 Số lượng mẫu số lượng phân lập chi nấm côn trùng Vườn Quốc Gia Cát Tiên (Lê Tấn Hưng cộng sự, 2007) Hình 1.2 Nhện đỏ hai chấm Hình 1.3 Nấm Isaria ký sinh trùng thu thập tự nhiên rừng Quốc gia Cát Tiên, huyện Tân Phú, tỉnh Đồng Nai A: Isaria japonica; B,: Isaria farinosa; C: Isaria cicadae; D: Isaria takamizusanensis 16 Hình 1.4 Hình thái bào tử sợi chủng nấm Isaria phân lập phát triển môi trường thạch đĩa a:bào tử đính, b: cuống sinh bào tử thể bình; c: thể bình, d: hệ sợi đĩa PDA 16 Hình 1.5 Sự phát triển tơ nấm Isaria nhện đỏ sau ngày phun bào tử nấm (hình A mơ nhện cịn sống, hình B mơ nhện nhiễm nấm Isaria) 17 Hình 2.1 Ni cấy chủng nấm Isaria đĩa petri nuôi môi trường lỏng 20 Hình 2.2 Nuôi cấy nấm điều kiện nhiệt độ ánh sáng khác A: 25 0C: 12h sáng: 12h tối; B: 300C, 12h sáng: 12h tối; C: nhiệt độ ánh sáng phịng 22 Hình 2.3 Nhân sinh khối nấm Isaria môi trường gạo lức, điều kiện ánh sáng 12h tối, 12h sáng, độ ẩm 70-80%, nhiệt độ 250C 23 Hình 2.4 Thu sinh khối nấm, sấy, rây đóng gói bào tử nấm Isaria 24 Hình 2.5 Nhân sinh khối nấm Isaria môi trường lỏng, lắc 120 vòng/phút, điều kiện ánh sáng 12h tối, 12h sáng, độ ẩm 70-80%, nhiệt độ 250C 25 Hình 2.6 Sơ đồ quy trình sản xuất chế phẩm Isaria sp phòng trừ nhện dạng bột lỏng 26 Hình 2.7 Bố trí thí nghiệm trồng cà tím lồng lưới 28 v Hình 2.8 Bố trí thí nghiệm đồng ruộng điều tra nhện cà tím kính lúp điện tử 30 Hình 3.1 Bào tử nấm đếm buồng đếm sau 15 ngày ni cấy 32 Hình 3.2 Sự phát triển chủng nấm Isaria japonica - CT2 môi trường CAM sau khoảng thời gian nuôi cấy (A: ngày nuôi cấy, B: sau 10 ngày nuôi cấy, C: sau 15 ngày nuôi cấy, D: sau 20 ngày nuôi cấy) 33 Hình 3.3 Sự phát triển chủng nấm CT3 môi trường CAM qua mốc thời gian nuôi cấy (A: ngày nuôi cấy, B: sau 10 ngày nuôi cấy, C: sau 15 ngày nuôi cấy, D: sau 20 ngày nuôi cấy) 35 Hình 3.4 Bào tử đếm buồng đếm sau 17 ngày nuôi cấy 37 Hình 3.5 Sự phát triển chủng nấm CT11 môi trường CAM qua mốc thời gian nuôi cấy (A: ngày nuôi cấy, B: sau 10 ngày nuôi cấy, C: sau 17 ngày nuôi cấy, D: sau 19 ngày nuôi cấy) 38 Hình 3.6 Sự phát triển nấm CT25 sau 20 ngày nuôi cấy (A) hình chụp thể synema kính hiển vi (B) 39 Hình 3.7 Sự phát triển hệ sợi chủng nấm Isaria farinosa - CT11 đĩa petri điều kiện ánh sáng nhiệt độ khác 42 Hình 3.8 Các công đoạn sản xuất chế phẩm dạng bột từ nấm Isaria farinosa 43 Hình 3.9 Các cơng đoạn sản xuất chế phẩm dạng lỏng từ nấm Isaria farinosa 1:nhân sinh khối cấp 1; 2: Nhân sinh khối cấp 2; 3: Nấm Isaria farinosa sau 10 ngày nuôi cấy; 4: Nấm Isaria farinosa sau 15 ngày nuôi cấy; 5: Thu, lọc; 6: Đóng chai 44 Hình 3.10 Chế phẩm Isaria sp dạng lỏng sau sản xuất 20 ngày A: bị nhiễm vi sinh khác B: nấm Isaria tiếp tục phát triển hình thành hệ sợi bề mặt 46 vi Hình 3.11 Nhện cà tím trước sau phun ngày T1: Trước phun nước lã, S1: Sau phun nước lã; T2: trước phun 1g/150ml chế phẩm dạng bột; S2: Sau phun 1g/150ml chế phẩm dạng bột T3 trước phun 1.4g/150ml chế phẩm dạng bột S3: Sau phun 1,4g/150ml chế phẩm dạng bột 47 Hình 3.12 Nhện cà tím trước sau phun ngày T4: Trước phun 1,8g chế phẩm bột, S4: phun 1,8g chế phẩm bột; T5: Trước phun 2,2g chế phẩm bột, S5: phun 2,2g chế phẩm bột; T6 trước phun 1g chế phẩm dạng nước S6: Sau phun 1g chế phẩm dạng nước 48 Hình 3.13 Nhện cà tím trước sau phun ngày T7 trước phun 1.4g chế phẩm dạng nước S7: Sau phun 1,4g chế phẩm dạng nước T8 trước phun 1.8g chế phẩm dạng nước S8: Sau phun 1,8g chế phẩm dạng nước T9: trước phun 2.2g chế phẩm dạng nước S9: Sau phun 2,2g chế phẩm dạng nước 49 Hình 3.14 Nấm Isaria farinosa kí sinh nhện A: ngày B: ngày 52 Hình 3.15 Thuốc chế phẩm dùng để phun phịng trừ nhện ngồi đồng ruộng 53 Hình 3.16 A1, A2: Nhện trước sau phun nước lã 5-10 ngày; B1, B2: Nhện trước sau phun thuốc thuốc hóa học 5-10 ngày C1, C2: nhện trước sau phun thuốc sinh học 5-10 ngày 56 Hình 3.17 A1, A2: Nhện trước sau phun chế phẩm Isaria sp dạng bột (mật độ 107 cfu/g) 5-10 ngày; B1, B2: Nhện trước sau phun Isaria sp dạng lỏng (mật độ 107 cfu/g) 5-10 ngày C1, C2: nhện trước sau phun Isaria sp dạng bột (mật độ 108 cfu/g) 5-10 ngày 57 vii TĨM TẮT Nhiệm vụ “Nghiên cứu ni cấy nấm Isaria sp thử nghiệm hiệu lực phòng trừ nhện đỏ (Tetranychus sp.)” tiến hành thực nhân nuôi chủng nấm phân lập môi trường nhân tạo với số lượng lớn tạo chế phẩm sinh học xác định hiệu lực chế phẩm đồng ruộng đối tượng nhện đỏ hai chấm Khảo sát ảnh hưởng bốn loại môi trường dinh dưỡng CAM, CDA, SDAY1 SDAY3 đến hình thành phát triển bào tử nấm chủng nấm Isaria Japonica, Isaria cicadae, Isaria farinosa, Isaria takamizusanensis Chủng nấm Isaria farinosa cho mật độ bào tử cao sau 19 ngày nuôi cấy 20,54 x 108 bào tử/g canh trường Khảo sát điều kiện nuôi cấy nhiệt độ 250C, 300C, nhiệt độ phòng, ánh sáng 12h sáng, 12h tối, độ ẩm 70% Điều kiện nuôi cấy 25 0C phù hợp để sản xuất, nhân sinh khối số lượng lớn Bước đầu sản xuất chế phẩm dạng bột quy mô 100kg/mẻ, chế phẩm dạng lỏng 100L/mẻ Thử nghiệm hiệu lực phịng trừ nhện cà tím trồng lồng lưới Với liều lượng thử 1g/150ml, 1,4g/150ml, 1,8g/150ml, 2,2g/150ml Liều lượng 2,2g/150ml có hiệu lực phịng trừ nhện 80-83% dạng chế phẩm Thử nghiệm hiệu lực phòng trừ nhện gây hại cà tím ngồi đồng ruộng Thí nghiệm thực với thuốc phịng trừ nhện hóa học, sinh học chế phẩm Isaria sp dạng bột, dạng lỏng mật độ bào tử 107 cfu/g 108 cfu/g Hiệu lực phòng trừ nhện phun chế phẩm liều lượng 5,87 kg/ha 70% so với thuốc hóa học 82% thuốc sinh học 71% viii TÀI LIỆU THAM KHẢO Allan Mweke, Christian Ulrichs, Paulin Nana, Komivi Senyo Akutse, Komi Kouma Mokpokpo Fiaboe, Nguya Kalemba Maniania, and Sunday Ekesi 2018 Evaluation of the Entomopathogenic Fungi Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana and Isaria sp for the Management of Aphis craccivora (Hemiptera: Aphididdae) Dingfeng Wang, Liangde Li, GuangyuanWu, Liette Vasseur, Guang Yang, Pengrong Huang, 2017 De novo transcriptome sequencing of Isaria sp and comparative analysis of gene expression in response to heat and cold stresses Fumihide, T., Y Nobuo, Y Remiko, T Satoko, Y Masaya, S Satoko, M Takeshi, F.Shinji, O Tomihisa, 2005 International Immunopharmacology, 5: 903-916 Hajek, A.E and R.J St Leger, 1994 Interactions between fungal pathogens and insect hosts Annu Rev Entomol 39 293-322 Hong, I P., S H Nam, G B Sung, I M Chung, H Hur, M W Lee, M K Kim, S X Guo, 2007 The Korean Society of Mycology, 35(4): 215-218 Jin Dao Chao, Zhang Xiaona, Zou Xiao, Guo Jianjun, Chen Tingxu, 2015 Isaria cateniannulata as well as product, preparation method and use method thereof Patent China, CN104928185A Joseph I., Edwin Chellaiah D and Ranjit Singh A J A., 2010 Studies on the influence of Beauveria bassiana on survival and gut flora of groundnut caterpillar Spodoptera litura Fab., Journal of Biopesticides, 3(3): 553-555 Lê Tấn Hưng, Võ Thị Hạnh, Lê Thị Bích Phượng, Trần Thạnh Phong, Trương Thị Hồng Vân, Somsak Sivichai, 2010 Nấm côn trùng Vườn quốc gia Cát Tiên: nguồn tài nguyên quý cho ứng dụng sinh học Hội nghị Khoa học kỷ niệm 35 năm Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam – Hà Nội, ngày 26/10/2010 Lei Zhang, Weibing Shi, Ming-Guang Feng, 2014 Histopatholog cal and molecular insights into the ovicidal activities of two entomopathogenic fungi against two-spotted spider mite,Journal of Invertebrate Pathology 117(1) 10 Luangsa-ard, J J., N L Hywel-Jones, L Manoch and R A Samson ,2005 On the relationships of Paecilomyces sect Isarioidea species Mycol Res 109: 581589 11 McCoy, C.W 1990 Entomogenous fungi as microbial pesticides, pp 139159 In R.R Baker, and P.E Dunn (eds.), New Directions in Biological Control Alan R Liss, New York pp 139-159 12 Mitsuaki Shimazu, 2001 Paecilomyces cateniannulatus Liang, a commonly found, but an unrecorded entomogenous fungus in Japan 13 Nguyễn Dương Khuê, 2005 Sử dụng nấm Metarhizium anisopliae Sorok phòng trừ mối nhà (Coptotetrmes formosanus Shiraki) theo phương pháp lây 61 nhiễm, Hội nghị trùng học tồn quốc lần thứ Hà Nội 11-12/04/2005 Trang 409 – 414 14 Nguyễn Thị Hằng Nga, Nguyễn Lan Hương, Trần Khắc Hiệp, Nguyễn Kiều Băng Tâm, Lương Hữu Thành, 2016 “Nghiên cứu sản xuất chế phẩm vi sinh vật để xử lý phế thải rắn sau chế biến tinh bột sắn làm phân bón sinh học” Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Các Khoa học Trái đất Môi trường, Tập 32, Số IS (2016) 282-288 15 Nguyễn Thị Liên Thương, Trinh Diệp Phương Danh Nguyễn Văn Hiệp, 2016 Nấm đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris: đăc điểm sinh hoc, ̣ giá tri dược liệu yếu tố ảnh hưởng đến trình ni trồng nấm Tạp chí Khoa hoc trường Đại học Cần Thơ, 44:9-22 16 Nguyễn Thị Lộc, Võ Thị Bích Chi, Nguyễn Thị Nhàn, Phạm Quang Hưng, Huỳnh Văn Nghiệp, Vũ Tiến Khang Nguyễn Đức Thành, 2002 Nghiên cứu, sản xuất ứng dụng hai chế phẩm sinh học để quản lý loài sâu hại lúa, Viện lúa ĐBSCL Trang 274 – 295 17 Phạm Thị Thùy, Trần Văn Huy, Nguyễn Duy Mạn, 2005 Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ sản xuất thuốc trừ sâu vi nấm Beauveria Metarhizium để phòng trừ sâu hại đậu tương đậu xanh Hà Tĩnh năm 2003-2004 Hội nghị cơng nghệ sinh học tồn quốc Hà Nội 11-12/4/2005 Trang 494 -497 18 Posada F and Vega F.E., 2005 A new method to evaluate the biocontrol potential of single spore isolates of fungal entomopathogens, Journal of Insect Science, 5(37): 1-10 19 Ren CuiJuan ; Han YanFeng ; Zhang YanWei ; Zhang TongRui ; Wang Xiong, 2014 Lethal effect of Isaria sp fermentation broth and mycelia extract on Plutella xylostella Southwest China Journal of Agricultural Sciences Vol.27 No.4 pp.1518-1521 20 Samson, R.A., H.C Evans, and J.P Latgé 1988 Atlas of Entomopathogenic Fungi Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, New York 187pp 21 Shah, P.A and J.K Pell 2003 Entomopathogenic fungi as biological control agents Appl Microbiol Biotech 61: 413-423 22 Shaukat Ali, Zhen Huang, Shunxiang Ren, 2010 Production of cuticle degrading enzymes by Isaria fumosorosea and their evaluation as a biocontrol agent against diamondback moth J Pest Sci (2010) 83:361–370 23 Sung G H., J M Sung, N L Hywel-Jones, J W Spatafora, 2007 Molecular Phylogenetics and Evolution, 44(3): 1204-1223 24 Taborsky, V 1992 Small-scale processing of microbial pestcides FAO Agric Service Bull 96 Food and Agriculture Organization of the United Nations Rome 62 25 Trần Văn Hai, Trịnh Thị Xuân, Phạm Kim Sơn, 2006 Tạo sinh khối thử nghiệm hiệu lực số loại nấm ký sinh sâu ăn tạp rầy mềm hại rau cải TP Cần Thơ Tạp chí nghiên cứu khoa học, trường ĐHCT 26 Vega F.E., Posada F., M Catherine Aime, Monica Pava-Ripoll, Francisco Infante, Stephen A Rehner D., 2008 Entomopathogenic fungal endophytes, Biological Control, 46: 72-82 27 Vijayavani S., Reddy K R K and Murthy G.B.V.N., 2009 Pathogenicity of Beauveria bassiana (Deuteromycotina: Euteromycotina: Hyphomycetes) strains on Spodoptera litura (Fab.), Journal of Biopesticides, 2(2): 205-207 28 Võ Thị Thu Oanh, Lê Đình Đơn, Bùi Cách Tuyến 2007 Đặc điểm sinh học khả gây bệnh nấm Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin đối vời sâu khoang (Spodoptera litura F.) hại rau cải xanh (Brassica juncea L.) Tạp chí KHKT Nơng Lâm nghiệp, số 1&2 Đại học Nông Lâm Tp HCM Trang 5863 29 Xiao‑na Zhang, Jian‑jun Guo, Xiao Zou, Dao‑chao Jin1, 2018 Athogenic diferences of the entomopathogenic fungus Isaria cateniannulata to the spider mite Tetranychus urticae (Trombidiformes: Tetranychidae) and its predator Euseius nicholsi (Mesostigmata: Phytoseiidae) 63 PHỤ LỤC Bảng tính chi phí sản xuất 100kg dạng bột Nội dung 10 11 12 13 14 15 Glucose Yeast extract MgSO4 KH2PO4 Na2HPO4 KCl NH4NO3 Cao lanh Điện Hộp nhựa Gạo lức Nhộng tằm Công lao động Bao nhôm TT Nội dung Đơn vị tính Số lượng 11 12 Glucose Yeast extract MgSO4 KH2PO4 Na2HPO4 KCl NH4NO3 Điện Nhộng tằm Công lao động Chai đựng 500ml g g g g g g g kWh kg công 400 200 40 160 560 40 280 100 313 995 3,174 3,313 253 253 825 2,200 25,000 120,000 125,200 199,000 126,960 530,080 141,680 10,120 231,000 220,000 25,000 720,000 Cái 400 3,000 1,200,000 13 14 Đơn vị tính Số lượng 40 20 1,6 5,6 2,8 10 50 400 100 TT Đơn giá g 313 g 995 g 3,174 g 3,313 g 253 g 253 g 825 kg 4,000 kWh 2,200 400 kg 23,000 kg 25,000 công 120,000 kg 50,000 Cộng Bảng tính chi phí sản xuất 100L dạng lỏng: Cộng 64 Đơn giá Thành tiền 12,520 19,900 12,696 5,300 1,416 1,012 2,310 40,000 110,000 1,600,000 2,300,000 25,000 600,000 100,000 3,390,156 Thành tiền 3,529,040 QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM DẠNG BỘT Giống nấm Isaria farinosa Lên men cấp Môi trường: 140g gạo lức/hộp, 5g bột nhộng tằm, môi trường CAM 250C, 12h sáng (400lux), 12h tối, độ ẩm 70% Lên men cấp (KH2PO4 0,4g/L; MgSO4 1g/L; KCl 1g/L; Na2HPO4 15-20 ngày NH4NO3 1,4g/L; 0,7 g/L; Glucose 10g/L; Yeast Thu bào tử, Sấy 500C đến độ Extract 5g/L, pH 6,5-7) sinh khối ẩm đạt 8-9% , xay, rây (màng Phụ gia theo tỉ lệ rây 60 mesh) Phối trộn (khối lượng) cao lanh 9: bào tử Đóng gói Bảo quản Bảo quản nơi khơ thống mát 65 QUY TRÌNH SẢN XUẤT CHẾ PHẨM DẠNG LỎNG Giống nấm Isaria farinosa Lên men cấp Môi trường: 5g bột nhộng tằm, môi trường CAM (KH2PO4 0,4g/L; 250C, 12h sáng (400lux), 12h tối, độ ẩm 70%, Lên men cấp MgSO4 1g/L; KCl 1g/L; Na2HPO4 1,4g/L; NH4NO3 0,7 g/L; lắc 200v/phút Glucose 10g/L; Yeast 15-20 ngày Extract 5g/L, pH 6,5-7) Thu sinh khối Xay thể synema, lọc dịch lỏng Phối trộn Đóng chai Bảo quản Bảo quản nơi khơ ráo, thống mát 66 Mơ tả quy trình Bước 1: Lên men cấp Các ống giống chủng nấm Isaria farinosa – ICT 11 không tạp nhiễm, bảo quản nhiệt độ 50C Nấm cấy chuyền từ ống nghiệm chứa sang đĩa petri có chứa mơi trường PDA, đặt nhiệt độ phòng từ 25–280C, ống giống cấy chuyền khoảng 10-20 ống nghiệm giống cấp 1, lần sản xuất 100kg sử dụng ống cấp + Điều kiện: tủ cấy, nồi hấp tiệt trùng, phịng cấy vơ trùng + Thời gian: 5-7 ngày + Nhân sự: cán kỹ thuật hiểu biết vi sinh vật, nắm vững thao tác cấy Bước 2: Lên men cấp Chuẩn bị môi trường 140g gạo lức/hộp, 5g bột nhộng tằm, dung dịch môi trường CAM (thành phần môi trường: KH2PO4 0,4g/L; MgSO4 1g/L; KCl 1g/L; Na2HPO4 1,4g/L; NH4NO3 0,7 g/L; Glucose 10g/L; Yeast Extract 5g/L, pH 6,5-7), hấp 1210C, atm thời gian 20 phút, môi trường để hộp nhựa thể tích 500ml, cấy nấm ICT 11 vào, ni điều kiện 250C, 12h sáng, 12h tối, độ ẩm 70% + Điều kiện: tủ cấy, nồi hấp tiệt trùng, phịng cấy vơ trùng, phịng ni cấy có hệ thống tạo ẩm, kệ nuôi gắn đèn LED + Thời gian: 15 ngày + Nhân sự: cán kỹ thuật hiểu biết vi sinh vật, nắm vững thao tác cấy Bước 3: Thu sấy sinh khối nấm Sinh khối nấm sau nuôi cấy 15 ngày đổ khay, khay chứa khoảng kg, bóp tơi sinh khối đưa vào máy sấy lạnh khử trùng tia UV, nhiệt sấy khoảng 500C, thời gian sấy khoảng 28 Sau sản phẩm khơ với độ ẩm khoảng 810%, sinh khối nấm cịn khoảng 10-20% + Điều kiện: tủ cấy, nồi hấp tiệt trùng, phịng cấy vơ trùng, máy sấy lạnh có lắp đèn UV, khay sạch, máy sấy với công suất 100kg/lần + Thời gian: ngày + Nhân sự: cán kỹ thuật hiểu biết vi sinh vật, hiểu biết vận hành thiết bị sấy Bước 4: Nghiền rây sinh khối nấm 67 Sản phẩm nấm sau sấy khơ đưa vào mày nghiền có kích cỡ lưới nghiền 0,5mm với công suất 20 kg/giờ Sau nghiền, tiến hành đếm mật số nấm, quan sát bào tử Sinh khối sau nghiền đưa vào máy rây với màng rây 60 mesh, bột sinh khối + bào tử thu 50-60% + Điều kiện: phòng sạch, máy nghiền, máy rây, kinh hiển vi độ phóng đại 1000x, buồng đếm hồng cầu + Thời gian: 6-8giờ + Nhân sự: lao động kỹ thuật cán kỹ thuật hiểu biết vi sinh vật Bước 5: Phối trộn phụ gia Sản phẩm sau sấy tiến hành phối trộn với chất phụ gia bột cao lanh theo tỷ lệ 90% nấm, 10% chất phụ gia Mỗi lần trộn vòng 10 phút tạo sản phẩm đồng với máy trộn 100 kg/lần + Điều kiện: phịng sạch, máy trộn bột ngang cơng suất 100-500kg/lần + Thời gian: 2-4 + Nhân sự: lao động kỹ thuật Bước 6: Đóng gói, bảo quản chế phẩm Bao bì thành phẩm thiết kế cung cấp công ty, lượng thành phẩm 1kg/túi định lượng cân hàn miệng túi máy ép + Điều kiện: phòng sạch, máy ép miệng bao, máy đóng date, cân định lượng + Thời gian: không hạn định + Nhân sự: lao động phổ thơng Bảo quản chế phẩm: Sản phẩm sau đóng gói cho vào thùng để vào kho bảo quản nhiệt độ 28320C, phịng rộng rãi, thống mát, không ẩm ướt Không tồn trữ hàng tháng nhà kho 68 Bảng số liệu đếm nhện Thời số nhện Số gian sống nhện sống (bột nhện nhện sau công sống 1,4g) sống sống phun thức (bột (bột (bột thuốc đối 1g) 1,8g) 2,2g) (ngày) chứng H1 H2 Số nhện Số H3 H4 Số H5 sau xử lý 30 1.11 29 3.33 27 10.00 30 0.00 29 3.33 30 3.33 28 6.67 27 10.00 28 6.67 28 6.67 30 3.33 30 0.00 30 0.00 30 0.00 30 0.00 30 3.33 28 6.67 29 3.33 28 6.67 29 3.33 30 3.33 30 0.00 28 6.67 28 6.67 29 3.33 30 3.33 29 3.33 29 3.33 29 3.33 27 10.00 30 3.33 22 26.67 24 20.00 11 63.33 70.00 30 6.67 18 40.00 22 26.67 12 60.00 83.33 30 3.33 20 33.33 21 30.00 15 50.00 86.67 30 3.33 15 50.00 11 63.33 11 63.33 70.00 30 3.33 13 56.67 15 50.00 12 60.00 73.33 30 6.67 12 60.00 13 56.67 14 53.33 83.33 30 6.67 14 53.33 12 60.00 13 56.67 80.00 30 3.33 70.00 12 60.00 70.00 76.67 30 6.67 73.33 73.33 73.33 80 Số H6 Số H7 Số H8 Số nhện nhện nhện nhện sống sống sống sống (lỏng (lỏng (lỏng (lỏng 1g) 1,4g) 1,8g) 2,2g) H9 2,6 h10 2,6long h11 bot 28 6.7 30 0.0 30 0.00 30 0.00 29 3.333333 27 10 30 0.0 30 0.0 30 0.00 30 0.00 29 3.333333 29 3.333333 69 29 3.3 29 3.3 30 0.00 30 0.00 28 6.666667 28 6.666667 27 10.0 29 3.3 29 3.33 29 3.33 28 6.666667 30 29 3.3 27 10.0 28 6.67 28 6.67 29 3.333333 28 6.666667 28 6.7 30 0.0 29 3.33 28 6.67 28 6.666667 29 3.333333 27 10.0 25 16.7 10 66.67 11 63.33 86.66667 11 63.33333 26 13.3 23 23.3 13 56.67 15 50.00 76.66667 18 40 28 6.7 24 20.0 14 53.33 11 63.33 86.66667 10 66.66667 14 53.3 12 60.0 73.33 83.33 83.33333 11 63.33333 12 60.0 17 43.3 70.00 86.67 86.66667 12 60 11 63.3 73.3 15 50.00 10 66.67 10 66.66667 15 50 13 56.7 11 63.3 90.00 80.00 80 83.33333 11 63.3 12 60.0 76.67 90.00 90 93.33333 10 66.7 10 66.7 73.33 76.67 76.66667 73.33333 Xử lý thống kê số liệu thí nghiệm chieucao 15/3 N Subset for alpha = 0.05 Duncana NT20/5 NT15/3 1.5233 NT15/4 1.5500 NT15/5 NT20/3 NT20/4 NT25/3 NT25/4 3.7800 NT25/5 3.7933 Sig .0000 2.3667 2.8933 3.3700 3.5933 1.000 578 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 hieuluc1ngay 70 1.000 1.000 1.000 1.000 780 lieuluong N Subset for alpha = 0.05 Duncana bot 1.8g 0000 long 1,8g 0000 long 2,2g 0000 long 1,4g 1.1000 nuocla 1.4800 bot1g 1.4800 bot 2,2g 1.4800 long1g 2.2100 bot1.4g 2.2200 bot 2,6g 2.2222 long2,6g 2.5911 Sig .084 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 hieuluc2ngay lieuluong N Subset for alpha = 0.05 Duncana bot 1.8g 1.1100 long 2,2g 1.1100 nuocla 1.4800 bot1g 1.4800 long 1,8g 2.2200 bot 2,2g 2.5900 long 1,4g 3.3200 bot 2,6g 3.3311 long2,6g 3.3311 bot1.4g 3.3333 long1g 4.4333 Sig .057 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 71 hieuluc3ngay lieuluong N Subset for alpha = 0.05 Duncana nuocla 2.5900 long1g 27.7567 long 1,4g 28.9000 bot1.4g 30.0033 bot1g 31.1100 long 1,8g 43.3333 bot 1.8g 44.4433 long 2,2g 74.4433 long2,6g 77.7778 bot 2,6g 78.8889 bot 2,2g 80.0000 Sig 1.000 459 787 223 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 hieuluc5ngay lieuluong N Subset for alpha = 0.05 Duncana nuocla 3.3300 bot1g 35.5533 bot1.4g 41.1100 long1g 44.4400 long 1,4g 45.5500 bot 1.8g 58.8667 long 1,8g 64.4433 long 2,2g 76.8900 bot 2,2g 82.2200 bot 2,6g 82.2211 long2,6g 83.2200 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 72 097 305 287 hieuluc7ngay lieuluong N Subset for alpha = 0.05 Duncana nuocla 4.4433 bot1g 50.0000 bot1.4g 51.1100 long1g 52.2333 long 1,4g 53.3333 long 1,8g 66.6667 bot 1.8g 70.0000 long 2,2g 79.8900 bot 2,2g 82.2233 bot 2,6g 83.1100 long2,6g 84.3333 Sig 1.000 320 278 188 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 hieuluc1ngay Thuocphun N Subset for alpha = 0.05 Duncana sinhhoc 3.2700 cp long 5.2900 nuocla cp bot hoahoc cp bot mu Sig 5.2900 6.2700 6.2700 8.2067 8.2067 9.3700 9.3700 11.3767 099 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 73 403 112 323 101 hieuluc3ngay Thuocphun N Subset for alpha = 0.05 Duncana nuocla 12.0667 cp bot mu 15.4600 cp bot 15.9207 cp long 20.2367 hoahoc 34.1933 sinhhoc 38.1700 Sig .087 348 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 hieuluc5ngay Thuocphun N Subset for alpha = 0.05 Duncana nuocla 15.1067 cp long 38.2500 cp bot 40.1733 cp bot mu sinhhoc 70.3300 hoahoc 74.1867 52.8900 Sig 1.000 657 1.000 379 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 hieuluc7ngay Thuocphun N Subset for alpha = 0.05 Duncana nuocla cp bot 48.2333 cp long 51.2567 cp bot mu 69.6633 sinhhoc 71.3367 hoahoc 15.8667 81.4333 74 Sig 1.000 307 566 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 hieuluc10ngay Thuocphun N Subset for alpha = 0.05 Duncana nuocla 17.3333 cp bot 49.3233 cp long 51.9200 cp bot mu 71.6700 sinhhoc 72.9200 hoahoc 82.1033 Sig 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 75 401 683 1.000 ... NGHIỆP CÔNG NGHỆ CAO BÁO CÁO NGHIỆM THU NHIỆM VỤ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY NẤM Isaria sp VÀ THỬ NGHIỆM HIỆU LỰC PHÒNG TRỪ NHỆN ĐỎ (Tetranychus sp.) CƠ QUAN CHỦ TRÌ CHỦ NHIỆM... .viii THÔNG TIN CHUNG ix Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu nuôi cấy nấm Isaria sp thử nghiệm hiệu lực phòng trừ nhện đỏ (Tetranychus sp.) ix Nội dung x Sản phẩm ... ni cấy nấm Isaria sp thử nghiệm hiệu lực phòng trừ nhện đỏ (Tetranychus sp.) ” tiến hành thực nhân nuôi chủng nấm phân lập môi trường nhân tạo với số lượng lớn tạo chế phẩm sinh học xác định hiệu