Bài viết Nghiên cứu kháng oxy hóa, kháng viêm và ức chế enzyme xanthine oxidase của cao chiết hạt nhãn (Dimocarpus longan) được thực hiện để tìm hiểu khả năng ức chế hoạt động của enzyme α-xanthin oxidase, kháng viêm và kháng oxy hóa của hạt nhãn ở phòng thí nghiệm.
NGHIÊN CỨU KHÁNG OXY HÓA, KHÁNG VIÊM VÀ ỨC CHẾ ENZYME XANTHINE OXIDASE CỦA CAO CHIẾT HẠT NHÃN (DIMOCARPUS LONGAN) Nguyễn Phạm Tuấn1, Nguyễn Thị Ái Lan2 Trung tâm Công nghệ sinh học tỉnh An Giang Trường Đại học Trà Vinh Tóm tắt Mục tiêu nghiên cứu thực để tìm hiểu khả ức chế hoạt động enzyme α-xanthin oxidase, kháng viêm kháng oxy hóa hạt nhãn phịng thí nghiệm Mẫu hạt nhãn ly trích phương pháp ngâm dầm với dung môi (nước, Ethanol 70 % Methanol 70 %) Hàm lượng Phenolic, Flavonoid, khả ức chế enzyme xanthine oxidase, kháng viêm kháng oxy hóa xác định việc đo quang phổ bước sóng 660 nm, 405 nm, 517 nm, 510 nm 765 nm Kết quả, độ ẩm đạt 70,64 % hiệu suất chiết hạt nhãn đạt 9,78 - 13,13% Cao chiết hạt nhãn có diện hợp chất Alkaloid, Flavonoid, Saponin, Terpenoids, Steroid, Tanin Phenol Hàm lượng Phenolic Flavonoid tổng cao chiết hạt nhãn đạt 70,76 - 85,23 mg GE/g cao chiết 88,91 - 125,26 mg quercetin/g cao chiết Cao chiết hạt nhãn có khả kháng oxy hóa phương pháp với giá trị IC50 121,16 µg/mL (nước); 109,60 µg/mL (Ethanol) 98,42 µg/mL (Methanol) Cao chiết hạt nhãn có khả ức chế enzyme xanthine oxidase với giá trị IC50 145,31 µg/mL (nước); 131,72 µg/mL (Ethanol) 120,62 µg/mL (Methanol) Cao chiết hạt nhãn có khả kháng viêm với giá trị IC50 197,6 µg/mL (nước); 176,73 µg/mL (Ethanol) 158,01 µg/mL (Methanol) Từ khóa: Xanthine oxidase; Kháng viêm; Kháng oxy hóa; DPPH; Trái nhãn Abstract Antioxidant, anti-inlfammatory, xanthine oxidase inhibiting activities of the extract of Dimocarpus longan seed This study was to evaluate the inhibitory effects of extracts of D longan on enzyme xanthine oxidase, antioxidant and anti-inflammatory at in vitro The plant extraction was carried out by maceration method with solvents (aqueous, ethanol 70 % and methanol 70 %) The content of phenolic, flavonoid, antioxidant, anti-inflammatory and xanthine oxidase inhibiting activities of the extract of D longan seed were determined by the spectrophotometer method at 510 nm, 765 nm, 660 nm, 405 nm and 517 nm wavelength The results showed that the moisture content was 70.64 % and extraction efficiency of D longan seed ranged from 9.78 to 13.13 % D longan seed extract has the presence of bioactive compounds such as alkaloids, flavonoids, saponins, terpenoids, steroids, tannin and phenol The phenolic and flavonoid content of D longan seed per g of dry weight were 70.06 - 85.23 mg gallic acid/g and 88.91 - 125.56 mg quercetin/g, respectively D longan seed extract has antioxidant ability by DPPH method with IC50 value of 121.16 µg/mL (aqueous); 109.60 µg/mL (Ethanol) and 98.42 µg/mL (Methanol), respectively D longan seed extract has the ability to inhibit xanthine oxidase with an IC50 values of 145.31 µg/mL (aqueous); 131.72 µg/mL (Ethanol) and 120.62 µg/mL (Methanol), respectively D longan seed extract has the ability to anti-inflammatory with an IC50 values of 197.6 µg/mL (aqueous); 176.73 µg/mL (ethanol) and 158.01 µg/mL (methanol), respectively Keywords: Xanthin oxidase; Anti-inflammatory; Antioxidant; DPPH; Dimocarpus longan 100 Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững Mở đầu Ở Việt Nam, nhãn Xuồng Cơm Vàng giống nhãn phổ biến miền Nam nói chung đồng Sơng Cửu Long (ĐBSCL) nói riêng Nhãn Xuồng Cơm Vàng (Dimocarpus longan Lour var Xuong Com Vang) loại ăn trái phổ biến vùng đồng sông Cửu Long Quả nhãn sử dụng dạng tươi dạng khơ hay đóng hộp Cơng nghiệp chế biến nhãn đóng hộp thường loại bỏ hạt nhãn coi chất thải công nghiệp Hạt nhãn, chiếm 12,5 - 21,1 % trọng lượng nhãn, phụ phẩm trình công nghiệp chế biến nguồn nguyên liệu phong phú, tiềm cho việc nghiên cứu ứng dụng Trong hạt nhãn có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học kháng oxy hóa, kháng khuẩn, kháng nấm, kháng viêm, kháng ung thư,… Enzyme Xanthine oxidase enzyme xúc tác q trình oxy hố Hypoxanthine thành Xanthine oxy hoá Xanthine thành acid uric Enzyme Xanthine oxidase có vai trị quan trọng q trình dị hố vòng Purin, nguyên nhân gây bệnh Gout [1] Bệnh Gout thường gắn liền với mức độ Acid uric huyết cao, dẫn đến lắng đọng tinh thể Urat Kết gây đau dội khớp đêm, đặc biệt ngón chân tay Theo báo cáo lâm sàng, Acid uric không liên quan đến bệnh Gout, mà làm tăng nguy rối loạn tim mạch, sỏi thận, đái tháo đường [2] Viêm sản phẩm bình thường phản ứng bảo vệ vật chủ tổn thương mơ nhiều kích chấn thương vật lý, hóa học tác nhân truyền nhiễm, đặc trưng đau, đỏ, sưng rối loạn mô liên quan Rối loạn chức viêm dẫn đến bệnh mãn tính góp phần làm tăng chi phí chăm sóc sức khỏe cho xã hội [3] Các loại thuốc hóa học điều trị bệnh viêm thường gây nhiều tác dụng phụ loét, thủng, kích ứng dày, tụ máu, phù mạch,… Bên cạnh đó, stress oxy hóa nhân tố gây viêm, dẫn đến hình thành chất độc tiềm ẩn, gây vấn đề sức khỏe lão hóa, tim mạch, đái tháo đường, ung thư,… Vì vậy, cần có nghiên cứu, tìm hiểu chất từ tự nhiên có khả ức chế enzyme Xanthine oxidase ngăn chặn hình thành Acid uric, hỗ trợ kháng viêm kháng oxy hóa Những hợp chất có hoạt tính sinh học nguồn gốc từ tự nhiên, ngày quan tâm nghiên cứu tính an tồn hiệu việc phịng ngừa điều trị bệnh Gout, kháng viêm [4] Từ đó, nghiên cứu thực nhằm đánh giá khả kháng oxy hóa, kháng viêm ức chế enzyme Xanthine oxidase hạt nhãn điều kiện in vitro, góp phần tận dụng phụ phế phẩm, làm giảm ô nhiễm mơi trường góp phần tạo nguồn ngun liệu cho q trình sản xuất sản phẩm có khả hỗ trợ điều trị bệnh Phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu nghiên cứu Nguyên vật liệu: trái nhãn Xuồng (Dimocarpus longan) thu thập vùng trồng nhãn Xuồng huyện Châu Phú, tỉnh An Giang Hóa chất thiết bị: máy đo quang phổ (Human, Hàn Quốc); máy đông khô chân không (Christ, Mỹ); máy cô quay chân không (Eyala, Nhật Bản); máy ly tâm (Orto alresa, Tây Ban Nha); Gallic acid; Quercetin; DPPH (Merck, Mỹ); Enzyme Xanthine oxidase; Xanthine, allopurinol; BSA (Sigma, Mỹ);… hóa chất thiết bị cần thiết khác 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp tạo cao chiết hạt nhãn Trái nhãn Xuồng (Dimocarpus longan) thu thập tại vùng trồng nhãn xuồng huyện Châu Phú, tỉnh An Giang vận chuyển phịng thí nghiệm Trung tâm Công nghệ sinh Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững 101 học tỉnh An Giang Quả nhãn xuồng tiến hành phân tách vỏ, thịt hạt, phần hạt nhãn tiến hành sấy khô điều kiện nhiệt độ 50 0C 96 giờ, nghiền thành bột mịn Hạt nhãn xuồng (300 g) chiết xuất phương pháp ngâm dầm với dung môi (nước, Ethanol 70 % Methanol 70 %), kết hợp với sóng siêu âm điều kiện nhiệt độ 500C, với tỷ lệ nguyên liệu dung môi 1:10 (w/v), 72 điều kiện tối để tránh q trình oxy hóa Sau đó, hỗn hợp tiến hành ly tâm 5.000 vòng/phút 20 phút, loại bỏ phần cặn thu phần dịch Phần dịch lọc lọc qua giấy lọc Whatman có đường kính 0,45 µm, thu dịch lọc bỏ phần cặn Phần dịch lọc sau tiến hành cô quay chân không để đuổi dung môi (Ethanol Methanol) Dịch lọc sau cô quay đuổi dung môi đông khô máy đông khô để thu cao chiết hạt nhãn, bảo quản nhiệt độ -20 0C thực nghiên cứu 2.2.2 Định tính hợp chất có hoạt tính sinh học cao chiết hạt nhãn Định tính hợp chất có hoạt tính sinh học theo Yadav cộng [5] (Bảng 1) Bảng Định tính hợp chất cao chiết hạt nhãn Hợp chất Alkaloid (Mayer) Flavonoid Saponin (Foam) Thực nghiệm mL dịch trích + vài giọt TT Mayer mL dịch trích + mL Pb (OAc)4 10% mL dịch trích + mL H2O→ đun nóng Hiện tượng Kết tủa màu nâu Xuất màu vàng Xuất bọt Xuất vòng đỏ nâu Steroid (Salkowski) mL dịch trích + mL CHCl3 + mL H2SO4 đậm đặc lớp Tannin Phenol 0,5 mL dịch trích + 10 mL H2O + 2-3 giọt FeCl3 0,1 % Kết tủa xanh dương đen ( Braymer) mL dịch trích + mL (CH3CO)2O + 2-3 giọt H2SO4 Xuất màu đỏ đậm Terpenoid đậm đặc 2.2.3 Phân tích hàm lượng phenolic Flavonoid tổng cao chiết hạt nhãn Hàm lượng Flavonoid tổng theo Pieme cộng [7]: lấy 10 mg Quercetin hịa tan mL Ethanol 80 % Sau đó, pha lỗng nồng độ 25 - 400 µg/mL Hút 0,1 mL Quercetin, thêm vào 0,3 mL nước cất, 0,03 mL NaNO2 % Ủ phút 25 0C, thêm 0,03 mL AlCl3 10 % Ủ thêm phút, sau cho thêm 0,2 mL NaOH mM Thêm nước cất để tổng thể tích mL, đo λ = 510 nm Hàm lượng Flavonoid tổng xác định theo công thức: C = c x V/m Trong đó: C: hàm lượng Flavonoid tổng (mg Quercetin/g chiết xuất); c: giá trị x từ đường chuẩn Quercetin (mg/mL); V: thể tích dịch chiết (mL); m: khối lượng cao chiết có V (g) Hàm lượng phenolic tổng theo mô tả Yadav Agarwala [6]: chuẩn bị dung dịch Gallic acid nồng độ 20 - 100 µg/mL; thuốc thử Folin-Ciocalteu 10 % Lần lượt cho mL dung dịch Gallic acid vào 2,5 mL thuốc thử Folin-Ciocalteu 10 % để phản ứng phút; sau đó, thêm tiếp vào mL dung dịch Na2CO3 % Sau 45 phút phản ứng nhiệt độ phòng, độ hấp thụ λ = 765 nm Hàm lượng Phenolic tổng tính theo cơng thức: P = a × V/m Trong đó: P: hàm lượng Phenolic tổng (mg Gallic acid/g cao chiết); a: giá trị x từ đường chuẩn (mg/mL); V: thể tích dung dịch cao chiết (mL); m: khối lượng cao chiết thể tích V (g) 2.2.4 Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết hạt nhãn Khảo sát khả ức chế gốc tự DPPH theo Shekhar Anju [8]: mL cao chiết hạt nhãn phản ứng với mL dung dịch DPPH 0,1 M, nhiệt độ phòng 30 phút điều kiện tối để tránh oxy hoá đo độ hấp thụ λ = 517 nm Khả ức chế gốc tự DPPH xác định theo công thức: AA% =(Ao-A1/Ao) x 100 102 Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững đó: AA%: Phần trăm ức chế gốc tự DPPH; Ao: Độ hấp thụ quang phổ mẫu đối chứng; A1: Độ hấp thụ quang phổ mẫu cao chiết; Vitamin C chất chuẩn 2.2.5 Khảo sát khả ức chế enzyme Xanthine oxidase cao chiết hạt nhãn Khả ức chế enzyme Xanthine oxidase cao chiết thực theo Nguyen cộng [9] Hỗn hợp phản ứng gồm 50 µL dung dịch cao chiết, 35 µL dung dịch đệm Phosphate (0,05 M; pH 7,5), 30 µL dung dịch enzyme XO, ủ điều kiện 25 0C 15 phút Tiếp theo, cho thêm 60 µL dung dịch Xanthine ủ 25 0C 30 phút Sau đó, µL HCl N thêm vào để ngừng hoạt động enzyme XO Tiến hành đo độ hấp thu λ = 290 nm để xác định lượng Acid uric tạo thành Allopurinol sử dụng chất đối chứng dương Phần trăm ức chế tính theo cơng thức (%) = (A0-At/A0) x 100 Trong đó: A0: mật độ quang mẫu chứa đệm Phosphate; At: mật độ quang mẫu thử có chứa cao chiết thuốc chuẩn 2.2.6 Khảo sát khả kháng viêm cao chiết hạt nhãn Khả kháng viêm cao chiết khảo sát thông qua hoạt động ức chế biến tính Protein thực theo phương pháp Shah cộng [10] có hiệu chuẩn cho phù hợp: hỗn hợp phản ứng gồm 150 μL cao chiết với 150 μL dung dịch Albumin huyết bò (BSA) % Sau đó, hỗn hợp ủ điều kiện nhiệt độ 30 0C 15 phút Sự biến tính Protein gây cách giữ hỗn hợp phản ứng 60 0C 10 phút Sau làm mát, tiến hành đo mật độ quang λ = 660 nm Diclofenac Prednisolone sử dụng chất đối chứng dương Khả ức chế biến tính Protein xác định theo cơng thức: Phần trăm ức chế (%) = 100 x (1-Vt/Vc) Trong đó: Vt: mật độ quang mẫu thử có chứa cao chiết thuốc chuẩn; Vc: mật độ quang mẫu chứa đệm Phosphate 2.3 Phương pháp thống kê Số liệu thí nghiệm xử lý phần mềm Excel 2010 thống kê phần mềm Statgraphics plus 16.0 Số liệu trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn Kết thảo luận 3.1 Kết tạo cao chiết hạt nhãn Việc xác định độ ẩm mẫu trước tiến hành ly trích giúp biết điều kiện để xác định phương pháp ly trích phù hợp, nhằm thu lượng cao chiết tối ưu Ngoài ra, việc xác định độ ẩm nguyên liệu tạo điều kiện để xác định nhiệt độ thời gian sấy mẫu thích hợp để tiến hành ly trích có hiệu suất cao [11] Trong suốt trình sấy, nhiệt độ cao làm phá vỡ cấu trúc tế bào bên nguyên liệu, tạo điều kiện cho dung môi nguyên liệu tiếp xúc tốt hơn, tăng khả ly trích Bên cạnh đó, q trình sấy cịn có tác dụng làm giảm độ ẩm nguyên liệu, tăng tỷ lệ dung môi sử dụng với nguyên liệu Độ ẩm hàm lượng nước tự có mẫu, độ ẩm cao tương ứng với hàm lượng nước có mẫu nhiều [12] Quy trình trích cao thực với khối lượng hạt nhãn 3.000 g (tươi), độ ẩm hạt nhãn 37,09 % hạt nhãn chiết xuất với dung môi khác 300 g (khô) (Bảng 2) Kết nghiên cứu cho thấy, hiệu suất trích cao có khác biệt dung môi chiết, hiệu suất chiết cao dung môi Methanol đạt hiệu suất 9,16 %; dung môi Ethanol 80 % đạt hiệu suất 8,85 % dung môi nước đạt hiệu suất 7,46 % Hiệu suất chiết dung mơi có khác biệt phụ thuộc vào dung môi độ phân cực dung môi [13] Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững 103 Bảng Kết phân tích độ ẩm, hiệu suất cao chiết hạt nhãn Chỉ tiêu theo dõi Khối lượng mẫu tươi (g) Độ ẩm (%) Khối lượng mẫu khô (g) Khối lượng cao khô (g) Hiệu suất chiết (%) Cao chiết nước 3.000 37,09 ± 0,11 300 22,39 ± 0,21 7,46 ± 0,10 Cao chiết Ethanol 3.000 37,09 ± 0,11 300 26,56 ± 0,09 8,85 ± 0,20 Cao chiết Methanol 3.000 37,09 ± 0,11 300 27,47 ± 0,26 9,16 ± 0,05 Bảng Kết phân tích hợp chất có hoạt tính sinh học cao chiết hạt nhãn Chỉ tiêu theo dõi Saponin Flavonoid Terpenoids Alkaloid Tanin phenol Steroid Cao chiết nước (+) (+) (-) (+) (+) (+) Cao chiết Ethanol (+) (+) (+) (+) (+) (+) Cao chiết Methanol (+) (+) (+) (+) (+) (+) Ghi chú: “+”: dương tính; “-”: âm tính 3.2 Định tính hợp chất có hoạt tính sinh học cao chiết hạt nhãn Cao chiết hạt nhãn vừng từ dung mơi khác có diện hợp chất Alkaloid, Terpenoids, Flavonoid, Steroid, Tanin Phenol (Bảng 3) Kết tương tự với nghiên cứu Ravindran cs [14] cho rằng, dịch trích hạt nhãn có diện hợp chất Saponin, Flavonoid, Alkaloid, Terpenoid, Steroid, Tanin Phenol Nhóm chất Flavonoid Polyphenol có hoạt tính sinh học cao, có ý nghĩa hoạt động kháng oxy hóa, kháng viêm, kháng ung thư bảo vệ gan 3.3 Phân tích hàm lượng Phenolic Flavonoid tổng cao chiết hạt nhãn Hàm lượng Phenolic Flavonoid tổng cao chiết hạt nhãn xác định dựa vào phương trình hồi quy tuyến tính chất chuẩn Gallic acid Quercetin (Bảng 4) Hàm lượng Phenolic tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn Gallic acid: y = 0,0049x + 0,0127, với hệ số R2 = 0,9985 (Hình 1a) Hàm lượng Phenolic thấp cao chiết hạt nhãn nước 80,26 mg Gallic acid/g cao chiết; hàm lượng Phenolic hạt nhãn Ethanol đạt 105,11 mg Gallic acid/g cao chiết Cao hàm lượng Phenolic hạt nhãn Methanol đạt 137,82 mg Gallic acid/g cao chiết Hàm lượng Flavonoid tổng phân tích phương pháp quang phổ đường chuẩn Quercetin: y = 0,0054x + 0,0185, với hệ số R2 = 0,9992 (Hình 1b) Cụ thể, hàm lượng Flavonoid tổng cao cao chiết hạt nhãn Methanol (45,84 mg Quercetin/g cao chiết); cao chiết hạt nhãn Ethanol (32,79 mg Quercetin/g cao chiết) thấp cao chiết hạt nhãn nước (24,92 mg Quercetin/g cao chiết) Bảng Kết phân tích hàm lượng Phenolic Flavonoid tổng cao chiết hạt nhãn Hoạt chất Hàm lượng Phenolic (mg Gallic acid/g cao chiết) Hàm lượng Flavonoid (mg Quercetin/g cao chiết) Cao chiết nước Mẫu cao chiết Cao chiết Ethanol Cao chiết Methanol 80,26c ± 0,13 105,11b ± 0,04 137,82a ± 0,17 24,92c ± 0,23 32,79b ± 0,05 45,84a ± 0,11 Ghi chú: số chữ số giống theo hàng khơng có ý nghĩa khác biệt thống kê mức ý nghĩa % Số liệu trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn 104 Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững 0,6 0,5 Độ hấp thu Độ hấp thu 0,5 0,4 0,3 0,4 0,3 0,2 0,2 0,1 0,1 0 20 40 60 80 y = 0,0054x + 0,0185 R² = 0,9992 0,6 y = 0,0049x + 0,0127 R² = 0,9985 100 0 Gallic acid (µg/mL) 20 40 60 80 100 Quercetin (µg/mL) (a) (b) Hình 1: Đường chuẩn Gallic acid (a) Quercetin (b) Hàm lượng Flavonoid Phenolic tổng dung môi sử dụng trích ly có khác nhau, hàm lượng Flavonoid Phenolic thể cao cao chiết hạt nhãn Methanol (137,82 mg Gallic acid/g cao chiết; 45,84 mg Quercetin/g cao chiết); cao chiết hạt nhãn Ethanol đạt hàm lượng 105,11 mg Gallic acid/g cao chiết; 32,79 mg Quercetin/g cao chiết thấp nhất, cao chiết hạt nhãn nước chi đạt 80,26 mg Gallic acid/g cao chiết; 24,92 mg Quercetin/g cao chiết Kết nghiên cứu cao Natungnuy cộng [15], cao chiết Methanol hạt nhãn Thao phương pháp ngâm dầm có hàm lượng Phenolic tổng 83,01 mg Galic aicd/g cao chiết (Thao 1); 103,96 mg Galic aicd/g cao chiết (Thao 2); 61,15 mg Galic aicd/g cao chiết (Thao 3) Nhưng thấp hơn, cao chiết Methanol hạt nhãn Edor phương pháp ngâm dầm có hàm lượng Phenolic đạt 140, 06 mg Galic aicd/g cao chiết Trong đó, Yang cộng [16], cao chiết Ethanol hạt nhãn phương pháp ngâm dầm có hàm lượng Flavonoid Phenolic tổng mg 6,37 Quercetin/g cao chiết; 248,42 mg Gallic acid/g cao chiết Sự khác biệt hàm lượng Flavonoid Phenolic tổng phương pháp trích cao giống cho kết khác khác biệt yếu tố giai đoạn sinh trưởng thời gian lấy mẫu thí nghiệm; hợp chất có hoạt tính sinh học thực vật bậc cao vị trí khác có hàm lượng, thành phần khác nhau; thành phần hóa học cao chiết khác cho kết hàm lượng hoạt chất sinh học khác [17] 3.4 Khả kháng oxy hóa cao chiết hạt nhãn Khả kháng oxy hoa phương pháp DPPH cao chiết hạt nhãn vitamin C khảo sát nồng độ từ - 100 µg/mL Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự phương pháp DPPH vitamin C Phương trình đường chuẩn vitamin C: y = 0,8713x + 4,8127 có R2 = 0,9901 Từ đó, suy giá trị IC50 vitamin C 51,86 µg/mL Tiến hành vẽ đường biểu diễn phần trăm ức chế gốc tự phương pháp DPPH cao chiết nước hạt nhãn Phương trình đường chuẩn cao chiết nước hạt nhãn: y = 0,6803x - 0,8155 có R2 = 0,996 Từ đó, suy giá trị IC50 cao chiết nước hạt nhãn 74,70 µg/mL (Bảng 5) Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự phương pháp DPPH cao chiết Ethanol hạt nhãn Phương trình đường chuẩn cao chiết Ethanol hạt nhãn: y = 0,7362x + 1,2492 có R2 = 0,9955 Suy ra, giá trị IC50 cao chiết Ethanol hạt nhãn 109,60 µg/mL (Bảng 5) Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững 105 Bảng Khả kháng oxy hóa cao chiết hạt nhãn vitamin C Nồng độ (µg/ mL) 20 40 60 80 100 Phần trăm khử gốc tự (%) Vitamin C Cao chiết nước Cao chiết Ethanol Cao chiết Methanol 0f 0f 0f 0f 27,40e ± 0,11 12,90e ± 0,08 18,77e ± 0,14 23,64e ± 0,19 d d d 26,13 ± 0,19 30,68 ± 0,23 37,35d ± 0,42 40,76 ± 0,04 37,15c ± 0,31 43,69c ± 0,32 50,24c ± 0,16 57,67c ± 0,09 b b b 55,63 ± 0,34 58,73 ± 0,41 64,48b ± 0,22 73,52 ± 0,22 67,40a ± 0,03 76,49a ± 0,07 80,26a ± 0,06 90,93a ± 0,17 y = 0,8713x + 4,8127 y = 0,6803x - 0,8155 y = 0,7362x + 1,2492 y = 0,7667x + 4,3264 Phương trình R2 = 0,996 R2 = 0,9955 R2 = 0,9899 R2 = 0,9901 51,86 74,70 66,22 59,57 IC50 (µg/mL) Ghi chú: số chữ số giống theo cột khơng có ý nghĩa khác biệt thống kê mức ý nghĩa % Số liệu trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn Tiến hành vẽ đường biểu diễn thể phần trăm ức chế gốc tự do phương pháp DPPH cao chiết Methanol hạt nhãn Phương trình đường chuẩn cao chiết Methanol hạt nhãn: y = 0,8713x + 4,8127và có R2 = 0,9901 Suy ra, giá trị IC50 cao chiết Methanol hạt nhãn 51,86 µg/mL (Bảng 5) Hiệu kháng oxy hóa phương pháp DPPH cao chiết hạt nhãn cao so với chất chuẩn vitamin C Cụ thể, giá trị IC50 vitamin C đạt 51,86 µg/mL, giá trị IC50 cao chiết hạt nhãn cao gấp 1,44 lần (nước, IC50 = 74,70 µg/mL); cao gấp 1,28 lần (Ethanol, IC50 = 66,22 µg/mL); cao gấp 1,15 lần (Methanol, IC50 = 59,57 µg/mL) Hiệu kháng oxy hóa phương pháp DPPH cao chiết hạt nhãn cao hặc tương đượng số nghiên cứu trước Nghiên cứu Yang cộng [15], cao chiết Ethanol hạt nhãn phương pháp ngâm dầm cho hiệu kháng oxy hóa phương pháp DPPH có giá trị IC50 = 61,88 µg/ mL Trong đó, Ravindran cộng [14], cao chiết Methanol hạt nhãn phương pháp ngâm dầm cho hiệu kháng oxy hóa phương pháp DPPH có giá trị IC50 = 48,95 µg/mL Hiệu kháng oxy hóa phương pháp DPPH cao chiết hạt nhãn có khác biệt dung môi chiết xuất hàm lượng việc khảo sát hàm lượng Phenolic Flavonoid loại cao chiết (Bảng 5) Các hợp chất Polyphenol gồm nhóm lớn chất có khả kháng oxy hóa Khả kháng oxy hóa khử cho phép hợp chất Polyphenol hoạt động chất khử cung cấp hydro làm ngừng hoạt động gốc tự Flavonoid nhóm hợp chất có thực vật, cho thấy hoạt tính kháng oxy hóa thơng qua q trình thu nhặt khử gốc tự [18] 3.5 Hiệu ức chế enzyme Xanthine oxidase cao chiết hạt nhãn Khảo sát hiệu ức chế enzyme Xanthine oxidase cao chiết hạt nhãn chất chuẩn Allopurinol khảo sát mức nồng độ từ - 200 µg/mL (Bảng 6) Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả ức chế Xanthine oxidase Allopurinol, phương trình đường chuẩn Allopurinol, y = 0,4786x + 4,844 R² = 0,9948; giá trị IC50 Allopurinol 94,35 µg/mL (Bảng 6) Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả ức chế Xanthine oxidase cao chiết nước hạt nhãn, phương trình đường chuẩn cao chiết nước hạt nhãn, y = 0,4287x - 0,2144 R² = 0,9977; giá trị IC50 cao chiết nước hạt nhãn 116,63 µg/mL (Bảng 6) 106 Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả ức chế Xanthine oxidase cao chiết Ethanol hạt nhãn, phương trình đường chuẩn cao chiết Ethanol hạt nhãn, y = 0,4608x + 2,2042 R² = 0,9978; giá trị IC50 cao chiết Ethanol hạt nhãn 103,72 µg/mL Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả ức chế Xanthine oxidase cao chiết Methanol hạt nhãn, phương trình đường chuẩn cao chiết Methanol hạt nhãn, y = 00,4814x + 6,873 R² = 0,992; giá trị IC50 cao chiết Methanol hạt nhãn 91,01 µg/mL Bảng Hiệu ức chế enzyme Xanthin oxidase cao chiết hạt nhãn Allopurinol Nồng độ (µg/ Phần trăm ức chế enzyme α-amylase (%) Allopurinol Cao chiết nước Cao chiết Ethanol Cao chiết Methanol mL) k k 0,0 0,0k 0,0k 0,0 h h h 25 18,56 ± 0,26 11,25 ± 0,26 15,47 ± 0,26 20,36h ± 0,26 21,11g ± 0,26 25,48g ± 0,26 33,01g ± 0,26 50 30,29g ± 0,26 f f f 30,58 ± 0,26 36,15 ± 0,26 44,05f ± 0,26 75 42,59 ± 0,26 40,91e ± 0,26 49,29e ± 0,26 55,16e ± 0,26 100 53,46e ± 0,26 d d d 56,46 ± 0,26 60,49 ± 0,26 67,48d ± 0,26 125 65,49 ± 0,26 63,28c ± 0,26 71,01c ± 0,26 80,19c ± 0,26 150 78,46c ± 0,26 b b b 74,59 ± 0,26 84,49 ± 0,26 89,45b ± 0,26 175 87,59 ± 0,26 85,69a ± 0,26 92,19a ± 0,26 99,27a ± 0,26 200 97,89a ± 0,26 Phương trình, y = 0,3557x + 11,981 y = 0,4287x - 0,2144 y = 0,4608x + 2,2042 y = 0,4814x + 6,873 R² = 0,9753 R² = 0,9977 R² = 0,9978 R² = 0,992 giá trị R2 94,35 116,63 103,72 91,01 IC50 Ghi chú: số chữ số giống theo cột khơng có ý nghĩa khác biệt thống kê mức ý nghĩa % Số liệu trình bày dạng trung bình ± sai số chuẩn Hiệu ức chế enzyme Xanthine oxidase cao chiết hạt nhãn cao tương đương so với chất chuẩn Allopurinol Cụ thể, giá trị IC50 Allopurinol đạt 94,35 µg/mL, giá trị IC50 cao chiết hạt nhãn cao gấp 1,24 lần (nước, IC50 = 116,63 µg/mL); cao gấp 1,09 lần (Ethanol, IC50 = 103,72 µg/mL); thấp gấp 0,96 lần (Methanol, IC50 = 91,01 µg/mL) Kết nghiên cứu thấp nghiên cứu Sheu cộng [19] cho rằng, cao chiết từ phụ phẩm trái nhãn có khả ức chế enzyme Xanthine oxidase với giá trị IC50 115,8 μg/mL (hoa), 118,9 μg/mL (vỏ),125,3 μg/mL (cành), 262,5 μg/mL (hạt), 331,1 μg/mL (lá) Trong đó, Hou cộng [20] cho rằng, cao chiết hạt trái nhãn có khả ức chế enzyme Xanthine oxidase với giá trị IC50 = 277,8 μg/mL Nhiều nghiên cứu phân tích thành phần hóa học hạt nhãn nhãn chứa nhiều hợp chất Tannin, Phenol, Glycoside, Saponin, Steroid, Terpenoid Antharaquinon [14] Các hợp chất Phenol, đặc biệt Flavonoid có hoạt tính ức chế mạnh enzyme Xanthine oxidase tiềm chống oxy hóa cao Trong nhóm Flavonoid đáng ý hợp chất Flavonol glycosides cụ thể Kaempferol Quercetin glycosides Sự ức chế hoạt động enzyme XO xem chế chống oxy hóa hợp chất Polyphenol Nhiều nghiên cứu enzyme Xanthine oxidase chứng minh rằng, hoạt động enzyme Xanthine oxidase nguyên nhân dẫn tới tạo nhiều gốc tự Những hợp chất chống oxy hóa hợp chất Polyphenol sử dụng rộng rãi phần chế độ ăn uống ngày người để chống lại stress oxy hóa mơ tổn thương bị oxy hóa [21] 3.6 Hiệu kháng viêm cao chiết hạt nhãn Khảo sát hiệu kháng viêm cao chiết hạt nhãn chất chuẩn Diclofenac, Prednisolon khảo sát mức nồng độ từ - 100 µg/mL (Bảng 7) Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững 107 Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả kháng viêm Prednisolon, phương trình đường chuẩn Prednisolon, y = 0,9198x + 9,3038 R² = 0,9699; giá trị IC50 Prednisolon 44,24 µg/mL (Bảng 7) Tương tự, tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả kháng viêm Diclofenac, phương trình đường chuẩn Diclofenac, y = 0,891x + 7,3276 R² = 0,9795; giá trị IC50 Diclofenac 47,89 µg/mL (Bảng 7) Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả kháng viêm cao chiết nước hạt nhãn, phương trình đường chuẩn cao chiết nước hạt nhãn, y = 0,5426x - 5,0238 R² = 0,9724; giá trị IC50 cao chiết nước hạt nhãn 101,44 µg/mL (Bảng 7) Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả kháng viêm cao chiết Ethanol hạt nhãn, phương trình đường chuẩn cao chiết Ethanol hạt nhãn, y = 0,6102x - 3,9295 R² = 0,9813; giá trị IC50 cao chiết Ethanol hạt nhãn 88,38 µg/mL (Bảng 7) Tiến hành xây dựng phương trình đường chuẩn biễu diễn khả kháng viêm cao chiết Methanol hạt nhãn, phương trình đường chuẩn cao chiết Methanol hạt nhãn, y = 0,6992x 2,5281 R² = 0,9938; giá trị IC50 cao chiết Methanol hạt nhãn 75,13 µg/mL (Bảng 7) Bảng Hiệu kháng viêm cao chiết hạt nhãn Diclofenac, Prednisolon Nồng độ (µg/ mL) 20 40 60 80 100 Phương trình, giá trị R2 IC50 Prednisolon 0,0f 35,48e ± 0,26 50,97d ± 0,26 65,19c ± 0,26 82,25b ± 0,26 97,86a ± 0,26 y = 0,9198x + 9,3038 R² = 0,9699 44,24 Phần trăm ức chế kháng viêm (%) Cao chiết Diclofenac Cao chiết nước Ethanol f f 0,0 0,0 0,0f e e 30,29 ± 0,26 3,21 ± 0,26 7,49e ± 0,26 46,59d ± 0,26 12,49d ± 0,26 16,59d ± 0,26 c c 63,45 ± 0,26 26,47 ± 0,26 29,45c ± 0,26 78,49b ± 0,26 38,45b ± 0,26 46,46b ± 0,26 a a 92,45 ± 0,26 52,03 ± 0,26 59,45a ± 0,26 y = 0,891x + y = 0,5426x y = 0,6102x 7,3276 5,0238 3,9295 R² = 0,9795 R² = 0,9724 R² = 0,9813 47,89 101,44 88,38 Cao chiết Methanol 0,0f 5e 10,4 ± 0,26 23,34d ± 0,26 37,25c ± 0,26 55,45b ± 0,26 68,11a ± 0,26 y = 0,6992x 2,5281 R² = 0,9938 75,13 Hiệu kháng viêm cao chiết hạt nhãn cao so với chất chuẩn Prednisolon, Diclofenac Cụ thể, giá trị IC50 Diclofenac Prednisolon đạt 47,89 µg/mL 44,24 µg/mL Trong giá trị IC50 cao chiết hạt nhãn cao gấp 2,29 lần (nước, IC50 = 101,44 µg/mL); cao gấp 1,99 lần (Ethanol, IC50 = 88,38 µg/mL); cao gấp 1,69 lần (Methanol, IC50 = 75,13 µg/mL) so cánh với chất chuẩn Prednisolon Kết nghiên cứu góp phần khẳng định hiệu kháng viêm hạt nhãn minh chứng cho hiệu mơ hình thử nghiệm hiệu cao chiết hạt nhãn điều kiện in vitro in vivo Hiệu ức chế hình thành NO với giá trị IC50 đạt 179,8 µg/mL Hiệu kháng viêm cao chiết hạt nhãn từ loại dung mơi phụ thuộc vào khả kháng oxy hóa mạnh hàm lượng Phenolic, Flavonoid lớn hiệu kháng viêm cao [22] Kết luận Cao chiết hạt nhãn nguồn phụ phẩm có chứa nhiều hoạt chất có hoạt tính sinh học Cao chiết hạt nhãn từ loại dung mơi có khả kháng oxy hóa, kháng viêm ức chế enzyme Xanthine oxidase điều kiện phịng thí nghiệm Nghiên cứu phân tách đánh giá hoạt tính sinh học hạt nhãn điều kiện in vitro in vivo 108 Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững Lời cảm ơn: Nhóm nghiên cứu xin chân thành cảm ơn Trung tâm Công nghệ sinh học tỉnh An Giang Trường Đại học Trà Vinh hỗ trợ tạo điều kiện để thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Sheu, S.Y., Fu, Y.T., Huang, W.D, Chen, Y.A., Lei Y.C & Yao C.H (2016) Evaluation of xanthine oxidase inhibitory potential and In vivo hypouricemic activity of Dimocarpus longan lour extracts Phcog Mag, 12: 206 - 12 [2] Rasaratnam, I & Christophidis, N (1995) Gout: A disease of plenty Aust Fam Physician, 24, 849 851 [3] Kramer, H.M & Curhan, G (2002) The association between gout and nephrolithiasis: the National Health and Nutrition Examination Survey III 1988 - 1994 American Journal of Kidney Disease, 40, 37 - 42 [4] Choi, J.H, Dong S.C & Hoon J (2012) Anti-inflammatory and anti-nociceptive properties of Prunus padus J Ethnopharmacol, 144(2):379 - 86 [5] Yadav, M., S Chatterji, Gupta, S.K & Watal, G (2014) Preliminary phytochemical screening of six medicinal plants used in traditional medicine International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 6(5): 539 - 542 [6] Yadav, R.N.S & Agarwala, M (2011) Phytochemical Analysis of Some Medicinal Plants Journal of Phytology, 3: 10 - 14 [7] Pieme, C.A., M.S Dongmo, F.F Boyoum, J.Y Ngogang & Saxena, A.K (2014) Antiproliferative activity and induction of apoptosis by Annona muricata (Annonaceae) extract on human cancer cells BMC complementary and alternative medicine, 14(1): - 10 [8] Shekhar, T.C and Anju, G (2014) Antioxidant Activity by DPPH Radical Scavenging Method of Ageratum conyzoides Linn Leaves. American Journal of Ethnomedicine, 1(4): 244 - 249 [9] Nguyen, M.T.T, S Awale, Y Tezuka, Q.L Tran, H Wantanabe & Kadota, S (2004) Xanthine oxidase inhibitory activity of Vietnamese Medicinal Plants Biological & Pharmaceutical Bulletin, 27/9: 1414 1421 [10] Shah M., Z Parveen & Muhammad, R.K (2017) Evaluation of antioxidant, anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activities of the stem bark of Sapindus mukorossi BMC Complement Altern Med, 17(1): 526 doi: 10.1186/s12906-017-2042-3 [11] Viện Dược liệu (2008) Kỹ thuật chiết xuất dược liệu Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật [12] Dương Thị Phượng Liên Nguyễn Nhật Minh Phương (2014) Ảnh hưởng biện pháp xử lý nguyên liệu đến khả trích ly ổn định anthocyanin từ bắp cải tím (Brassica oleracea) Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, Số chuyên đề: Nông nghiệp (1): - [13] Boeing, JS., Érica, O.B., Beatriz, A & Jesuí, V.V (2014). Evaluation of solvent effect on the extraction of phenolic compounds and antioxidant capacities from the berries: application of principal component analysis Chemistry Central Journal, 8(1) : 48 - 53 [14] Ravindran M., Alifah Ilyana, N.A Fithriyaani, Nur Ain Najihah, Nur Asyiqin & Mahendran, S (2016) Formulation and Evaluation of Natural Antioxidant Cream Comprising Methanolic Peel Extract of Dimocarpus longan International Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 8(9): 1305 - 1309 [15] Natungnuy, K., Chareonsap, P.P & Poeaim, S (2018) Biological activities of the methanolic extracts from two varieties of Dimocarpus longan seeds International Journal of Agricultural Technology, 14(7): 1505 - 1514 [16] Yang, E.Y., Han, Y.S & Sim, K.H (2021) Characterisation of nutritional, physiochemical, and mineral compositions of aril and seed of longan fruit (Dimocarpus longan L.) International Food Research Journal, 28(1): 91-101 Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững 109 [17] Mayachiew, P & Devahastin, S (2008) Antimicrobial and antioxidant activities of Indian gooseberry and galangal extract J LWT-Food Science and Technology, 41(7): 1153 - 1159 [18] Baharfar, R R Azimi, and M Mohseni (2015) Antioxidant and antibacterial activity of flavonoid-, polyphenol- and anthocyanin-rich extracts from Thymus kotschyanus boiss & hohen aerial parts J Food Sci Technol, 52(10): 6777 - 6783 [19] Sheu, S.Y., Fu, Y.T., Huang, W.D., Chen, Y.A., Lei, Y.C & Yao, C.H (2016) Evaluation of xanthine oxidase inhibitory potential and In vivo hypouricemic activity of Dimocarpus longan lour extracts Phcog Mag, 12: 206 - 12 [20] Hou, C.W., Lee, Y.C., Hung H.F., Fu H.W & Jeng K.C (2012) Longan seed extract reduces hyperuricemia via modulating urate transporters and suppressing xanthine oxidase activity Am J Chin Med, 40: 979 ‑ 91 [21] Chrysoula S., Aristidis S.V., Maria O., Apostolos A., Nektarios A., Alexios-L.S., & Dimitrios, K (2012) Flavonoid Glycosides Isolated from Unique Legume Plant Extracts as Novel Inhibitors of Xanthine Oxidase January 25, 2012 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0032214 [22] Huang G.J, B.S Wang, Wei-Chao Lin, Shyh-Shyun Huang, Chao-Ying Lee, Ming-Tsung Yen, & Huang, M.H (2012) Antioxidant and Anti-Inflammatory Properties of Longan (Dimocarpus longan Lour.) Pericarp Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine Volume 2012, Article ID 709483, 10 pages Ngày chấp nhận đăng: 10/11/2021 Phản biện: TS Nguyễn Thị Phương Mai 110 Nghiên cứu chuyển giao, ứng dụng khoa học công nghệ sử dụng hợp lý tài nguyên, bảo vệ môi trường phát triển bền vững ... hoạt tính kháng oxy hóa thơng qua trình thu nhặt khử gốc tự [18] 3.5 Hiệu ức chế enzyme Xanthine oxidase cao chiết hạt nhãn Khảo sát hiệu ức chế enzyme Xanthine oxidase cao chiết hạt nhãn chất... sinh học Cao chiết hạt nhãn từ loại dung mơi có khả kháng oxy hóa, kháng viêm ức chế enzyme Xanthine oxidase điều kiện phịng thí nghiệm Nghiên cứu phân tách đánh giá hoạt tính sinh học hạt nhãn điều... µg/mL Bảng Hiệu ức chế enzyme Xanthin oxidase cao chiết hạt nhãn Allopurinol Nồng độ (µg/ Phần trăm ức chế enzyme α-amylase (%) Allopurinol Cao chiết nước Cao chiết Ethanol Cao chiết Methanol