buớc đầu đánh giá khả năng sinh trưởng và đa dạng di truyền của giống ngan xám dựa vào vùng cytochrome b trên ty thể

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA GIỐNG NGAN XÁM DỰA VÀO VÙNG CYTOCHROME b TRÊN TY THỂ Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Nguyễn Thị Lan Anh Thành phố Hồ Chí Minh - 2021 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA GIỐNG NGAN XÁM DỰA VÀO VÙNG CYTOCHROME b TRÊN TY THỂ (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 13/12/2021) Chủ nhiệm nhiệm vụ: (ký tên) Chủ tịch Hội đồng nghiệm thu (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Thị Lan Anh Cơ quan chủ trì nhiệm vụ Đồn Kim Thành Thành phố Hồ Chí Minh - 2021 THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Hồ Chí Minh, ngày 10 tháng 12 năm 2021 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THƠNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Vườn ươm Sáng tạo Khoa học Công nghệ trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Nguyễn Thị Lan Anh Ngày, tháng, năm sinh: 30/03/1986; Nam/ Nữ: Nữ Học vị: Thạc sỹ Chức danh khoa học: Nghiên cứu viên; Chức vụ: không Mobile: 0969300386 E-mail: lananh303@gmail.com Tên tổ chức công tác: Phân viện chăn nuôi Nam Bộ Địa tổ chức: Khu phố Hiệp Thắng, phường Bình Thắng, Tp Dĩ An, tỉnh Bình Dương Địa nhà riêng: Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Điện thoại: 028.38.230.780 E-mail: khoahoctre@gmail.com Website: khoahoctre.com.vn Địa chỉ: Số 01 Phạm Ngọc Thạch, Phường Bến Nghé, Quận 1, Tp HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: Đoàn Kim Thành Số tài khoản: 3713.0.1083277.00000 - Tại Kho bạc Nhà nước Quận Tên quan chủ quản đề tài: Sở Khoa học Cơng nghệ Tp HCM II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 12 năm 2020 đến tháng 11 năm 2021 - Thực tế thực hiện: từ tháng 12 năm 2020 đến tháng 12 năm 2021 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng… năm… đến tháng… năm… - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực 80 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 80 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT … Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 6/2021 40 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 6/2021 40 Ghi (Số đề nghị toán) 40 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng NSKH 40 40 Nguồn khác Thực tế đạt Tổng NSKH 40 40 Nguồn khác - Lý thay đổi (nếu có): Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ cơng đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số TT Số, thời gian ban hành văn 29/2020-HĐ-KHCNTVƯ Tên văn Hợp đồng thuê khoán … Ghi Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh ThS Nguyễn Thị Lan Anh Tên cá nhân tham gia thực ThS Nguyễn Thị Lan Anh CN Nguyễn Thị Thủy Tiên CN Nguyễn Thị Thủy Tiên TS Hoàng Tuấn Thành TS Hoàng Tuấn Thành CN Đỗ Thế Anh CN Đỗ Thế Anh Số TT Nội dung tham gia Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* Xây dựng thuyết minh Bài báo Thu thập liệu, đánh chấp nhận đăng, giá phân tích mẫu báo cáo tổng hợp Báo cáo tổng kết đề tài Xây dựng thuyết minh Thuyết minh khoa Thu thập liệu, đánh học, báo cáo đánh giá sinh trưởng giá sinh trưởng Xây dựng thuyết minh Thuyết minh khoa Phân tích đánh giá số học, báo cáo tổng liệu kết đề tài Báo cáo tổng kết Thu thập mẫu Thu nhận 50 mẫu Phân tích mẫu đánh máu cá thể (30 giá số tiêu liên ngan Xám, 10 quan ngan lai, 10 ngan pháp) - Lý thay đổi ( có): Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) - Lý thay đổi (nếu có): Ghi chú* Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa TT điểm ) điểm ) 1 hội thảo, 20 người tham dự hội thảo, 20 người tham dự Đạt 100% - Lý thay đổi (nếu có): Ghi chú* Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Thời gian (Bắt đầu, kết thúc Các nội dung, công việc - tháng … năm) chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Theo kế Thực tế đạt hoạch Xây dựng thuyết minh chi tiết đề 01-02/2021 01-02/2021 tài Thuyết minh Thuyết minh chi chi tiết đề tài tiết đề tài Nội dung 1: Đánh giá đặc điểm 01-05/2021 ngoại hình, suất sinh 50 trưởng giống ngan Xám 01-05/2021 60 (120%) Nội dung 2: Đánh giá đa dạng di 6-11/2021 truyền giống ngan Xám dựa 50 mẫu vào trình tự nucleotide vùng cytochrome b ty thể Báo cáo tổng kết đề tài 10-11/2021 Báo cáo tổng kết đề tài 6-11/2021 50 mẫu (100%) - Lý thay đổi (nếu có): Người, quan thực ThS Nguyễn Thị Lan Anh, PVCNNB; CN Nguyễn Thị Thủy Tiên, TS Hoàng Tuấn Thành, TT VIGOVA CN Nguyễn Thị Thủy Tiên, TT VIGOVA CN Đỗ Thế Anh, PVCNNB 11-12/2021 ThS Nguyễn Báo cáo tổng kết Thị Lan Anh, đề tài PVCNNB; TS Hoàng Tuấn Thành, TT VIGOVA III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Theo kế hoạch Số lượng Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Yêu cầu khoa học Số cần đạt Tên sản phẩm TT Ghi Theo kế hoạch Thực tế đạt 01 01 (100%) 01 01 (100%) Báo cáo đặc điểm ngoại hình số tiêu sinh trưởng đàn ngan Xám hệ thứ Báo cáo kết phân tích đa dạng di truyền giống ngan Xám - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học Số lượng, nơi cần đạt công bố Theo Thực tế (Tạp chí, nhà xuất kế hoạch đạt bản) Bài báo khoa học 01, Tạp chí KHKT “Đa dạng di truyền ngan Xám dựa vào trình tự nucleotide vùng gen cytochrome b ty thể” - Lý thay đổi (nếu có): 01 01 Chăn ni (kèm (100%) giấy xác nhận) d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Tiến sỹ Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Thời gian Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) Kết sơ 2 Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: (Nêu rõ danh mục công nghệ mức độ nắm vững, làm chủ, so sánh với trình độ công nghệ so với khu vực giới…) - Các báo cáo đặc điểm ngoại hình, khả sản xuất ngan Xám số liệu khoa học kết phân tích DNA, từ làm tư liệu cho nghiên cứu giảng dạy b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) - Chọn đàn giống ngan Xám sở giữ giống Từ đó, đàn ngan Xám phát triển có suất chất lượng cao nhằm góp phần phát triển chăn ni bền vững vùng nông thôn, tạo việc làm nâng cao thu nhập cho người chăn nuôi - Ngan Xám giống ngan có chất lượng thịt trứng thơm ngon người dân ưa chuộng Do việc cung cấp sản phẩm chất lượng cao từ giống ngan Xám vào thị trường giúp nâng cao chất lượng bữa ăn người dân, đồng thời làm tăng sản phẩm tiêu dùng cho xã hội Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra nhiệm vụ: Số Nội dung TT I Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Báo cáo tiến độ Nội dung 1: Đánh giá đặc điểm 12/2020-7/2021 Đánh giá suất sinh ngoại hình, suất sinh trưởng 60 ngan Xám từ 0- trưởng giống ngan Xám 20 tuần tuổi Nội dung 2: Đánh giá đa dạng di Khuếch đại thành công gen truyền giống ngan Xám dựa mục tiêu Cytb với kích thước vào trình tự nucleotide vùng khoảng 546bp cytochrome b ty thể II Báo cáo giám định Lần … III Nghiệm thu sở …… Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) Nguyễn Thị Lan Anh MỤC LỤC MỤC LỤC I DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT III DANH MỤC CÁC BẢNG IV DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ V MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu CHƯƠNG – TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 Đặc điểm sinh trưởng số giống ngan nước 1.2 Đa dạng di truyền giống ngan nước CHƯƠNG - NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu 2.2 Thời gian địa điểm 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nội dung 1: Đánh giá số tiêu liên quan đến đặc điểm ngoại hình, sinh trưởng giống ngan Xám 2.3.2 Nội dung 2: Đánh giá đa dạng di truyền giống ngan Xám dựa vào trình tự nucleotide vùng cytochrome b ty thể 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 12 3.1 Đánh giá số tiêu liên quan đến đặc điểm ngoại hình, sinh trưởng giống ngan Xám 12 3.1.1 Đặc điểm ngoại hình giống ngan Xám 12 3.1.2 Tỷ lệ nuôi sống 15 3.1.3 Khối lượng thể qua giai đoạn tuổi 16 3.1.4 Tiêu tốn thức ăn 17 3.2 Đánh giá đa dạng di truyền giống ngan Xám dựa vào trình tự nucleotide vùng cytochrome b ty thể 18 I Thức ăn đóng vai trị quan trọng để có sản phẩm an tồn Vì vậy, thức ăn sử dụng cho ngan phải xuất phát từ sở sản xuất thức ăn có uy tín Tăng cường sử dụng nguồn thức ăn địa phương để hạ giá thành sản phẩm, nguồn thức ăn phải đảm bảo vệ sinh Khơng sử dụng thức ăn có chất kích thích tăng trọng, có hố chất cấm có thức ăn Thức ăn cung cấp phụ thuộc vào nhu cầu dinh dưỡng Ngan giai đoạn Bảng Thành phần dinh dưỡng thức ăn Ngan xám giai đoạn tuổi ST Chỉ tiêu ĐVT 0-8 9-21 T tuần tuổi tuần tuổi Protein thô % 20 17.5 Độ ẩm % 13 13 Canxi % 13 1-2,4 P tổng số % 0,8-1,5 0,6-1,5 Xơ thô % 0,6-1,1 Lysine tổng số % 0,9 Methionine+Cystein % 0,9 0,7 Kcal/kg 2875 3000 tổng số Năng lượng trao đổi Chăm sóc ni dưỡng Q trình ni ngan tn thủ theo quy trình chăm sóc ni dưỡng nghiêm ngặt cho giai đoạn nuôi 32 - Giai đoạn ngan con: + Nhiệt độ chuồng nuôi: Trước đưa ngan xuống chuồng ni chuồng ni phải sưởi ấm, chuồng ni phải đảm bảo khơng có gió lùa Khi ngan máy ấp nở với điều kiện nhiệt độ 37oC chuyển xuống chuồng nuôi để đảm bảo cho ngan khoẻ mạnh nhiệt độ chuồng nuôi - ngày tuổi phải đạt 28 – 32oC từ ngày tuổi thứ trở ngày giảm 1oC đạt 25oC Nhiệt độ chuồng nuôi đo độ cao đầu Mỗi quây ngan nhốt từ 50 - 100 phù hợp Khi ngan lại bình thường tản qy hoặc chuồng nhiệt độ chuồng nuôi đảm bảo Khi ngan tản xa nguồn nhiệt, há mỏ thở nhiều chứng tỏ nhiệt độ chuồng cao Khi ngan túm tụm lại chỗ gần nguồn nhiệt chồng đống lên nhiệt độ chuồng ni q thấp Khi ngan nằm chụm lại chỗ phía quây hoặc phía chuồng chuồng ni bị gió lùa Sử dụng bóng điện, chụp sưởi để sưởi ấm cho, ngan Trung bình 200w cho 75 ngan 140 ngan cần chụp sưởi + Ẩm độ khơng khí: Ẩm độ thích hợp cho ngan 60 - 70 %, song nước ta ẩm độ khơng khí cao có lên tới 100% Ẩm độ cao nguy hiểm cho ngan con, chuồng ướt làm cho ngan cảm nhiễm bệnh dễ dàng, ẩm độ cao thời tiết nóng ngày trời nồm cần phải dãn cho mật độ thưa đồng thời cần phải đảo chất độn chuồng cho thêm chất độn chuồng khô hàng ngày để giữ cho ngan ấm chân lông + Chiếu sáng: Từ tuần thứ đến tuần thứ thắp sáng ngày đêm cho ngan, sau thời gian thắp sáng 16 - 18 giờ/ngày, ban ngày sử dụng ánh sáng tự nhiên Cường độ ánh sáng cho giai đoạn là: - 10 ngày tuổi w/m2; 11 - 28 ngày tuổi 1,5w/m2 + Nước uống: Ngan cho uống tự với nguồn nước sạch, đảm bảo vệ sinh 33 - Giai đoạn hậu bị: + Chiếu sáng: sử dụng chiếu sáng tự nhiên + Nước uống: Ngan cho uống tự với nguồn nước sạch, đảm bảo vệ sinh + Thức ăn: Ngan cho ăn tự Công tác thú y Vệ sinh thú y phòng bệnh khâu quan trọng khơng thể thiếu q trình chăn ni ngan đảm bảo an toàn cho người sản xuất đem lại hiệu kinh tế cao cho trình đầu tư chăn nuôi Thực tế sản xuất cho thấy giống thức ăn giải tốt vệ sinh thú y phịng bệnh định thành bại nhà chăn nuôi Lịch phịng bệnh tiêm vaccin cho ngan trình bày Bảng Bảng Lịch phòng bệnh tiêm vaccine cho ngan Ngày tuổi Vaccin , thuốc kháng sinh cách dùng 1-3 - 10 18 - 25 28 - 46 56 - 60 70 - 120 - Phòng chống nhiễm trùng rốn , bệnh đường ruột chống stress loại kháng sinh Ampi-Coli Tetracycline, Streptomycin, Neotesol - Bổ sung vitamin B1, Bcomlex, ADE Phòng Vắc xin viêm gan siêu vi trùng : uống hoặc nhỏ hoặc tiêm - Tiêm phòng vaccin dịch tả lần (tiêm da cổ hoặc cánh) - Tiêm phòng vắc xin H5N1 lần - Bổ sung vitamin kháng sinh phòng bệnh chống stress sau tiêm phòng - Phòng bệnh E Coli , tụ huyết trùng , phó thương hàn loại kháng sinh, Sulphamide bổ sung vitamin - Tiêm phòng Vắc xin viêm gan siêu vi trùng lần - Tiêm phòng vaccin dịch tả lần Tiêm phòng vắc xin H5N1 lần Phòng bệnh kháng sinh , bổ sung vitamin theo định kỳ - tháng/lần liều trình - ngày 34 Phụ lục 2: Các biểu mẫu theo dõi quản lý đàn ngan Biểu mẫu Theo dõi khối lượng ngan Xám SỐ LIỆU CÂN NGAN (nở ngày ) TT Ngày cân Tuần tuổi Số hiệu Sex P (g) TT 31 32 33 34 35 36 37 38 39 10 40 11 41 12 42 13 43 14 44 15 45 16 46 17 47 18 48 19 49 20 50 21 51 22 52 23 53 24 54 25 55 26 56 27 57 28 58 29 59 30 60 35 Ngày cân Tuần tuổi Số hiệu Sex P (g) Biểu mẫu Biểu mẫu quản lý đàn ngan THEO DÕI ĐẦU CON Đối tượng: Tháng Ô: năm 2021 Tổng đàn: Ngày Tổng Thức ăn (kg) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 36 Hao Loại Ghi Phụ lục Tổng hợp kết trích DNA Stt µg/mL 260/280 Stt µg/mL 260/280 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 97.25 1.73 58.01 1.87 71.89 2.25 51.22 1.88 143.10 2.13 65.38 1.85 92.85 2.12 69.88 1.80 167.10 2.23 34.62 1.77 79.94 2.36 67.35 1.80 87.68 2.33 54.56 1.79 204.10 1.81 40.69 1.72 79.14 2.32 49.26 1.81 102.30 2.31 52.68 1.72 78.86 2.47 117.60 1.82 101.50 2.28 56.51 1.12 89.47 2.39 36.36 1.70 131.30 2.14 48.01 1.71 91.72 2.31 64.72 1.76 110.20 2.29 67.71 1.80 84.01 1.83 71.63 1.81 80.43 1.81 58.47 1.75 47.21 1.87 62.82 1.80 108.90 1.82 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 61.33 1.79 94.37 1.84 85.25 1.80 97.25 1.73 71.89 2.25 143.10 2.13 92.85 2.12 167.10 2.23 79.94 2.36 87.68 2.33 204.10 1.81 37 41 BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA GIỐNG NGAN XÁM DỰA VÀO VÙNG CYTOCHROME b TRÊN TY THỂ ĐẶT VẤN ĐỀ Ngan thuộc nhóm thủy cầm ni phổ biến Việt Nam xếp sau vịt Theo số liệu Cục Chăn nuôi (01/01/2021) nước có khoảng 15,93 triệu ngan tăng khoảng 22,7% so với năm 2016 hay 10,8% so với năm 2019 (Phạm Thùy Linh ctv, 2019) Cũng nhiều quốc gia châu Á khác, ngan đóng vai trò quan trọng việc cung cấp nguồn thực phẩm, thịt thơm ngon lượng thấp (Kameshpandian ctv, 2016) Những tiến di truyền phân tử mở hội nghiên cứu đa dạng di truyền nội hay ngoại quần thể vật nuôi (Kameshpandian ctv, 2016), gen cytochrome b ty thể có tính bảo tồn cao lồi gia cầm thủy cầm sử dụng rộng rãi (Nelson ctv, 2004; Devos ctv, 2010; Sun ctv, 2012) Mã hóa protein gen cytochrome b chứa hai vị trí mã hóa protein liên quan đến tiến hóa nhanh chậm thể trình tự vùng thay đổi nhiều hay vùng bảo tồn gen Nó sử dụng rộng rãi để nghiên cứu thay đổi loài hay cùng loài gia cầm thủy cầm (He ctv, 2008; Mwacharo ctv, 2011; Thomson ctv, 2014; Award ctv, 2015) Tuy nhiên, cịn q hiểu biết cấu trúc di truyền lịch sử hóa ngan (Alyethodi ctv, 2010; Veeramani ctv, 2014) Vì thế, mục tiêu nghiên cứu nhằm phân tích đa dạng di truyền, nhận biết khác biệt di truyền nhóm ngan Xám dựa vào vùng gen cytochrome b ty thể làm sở liệu ban đầu cho việc nghiên cứu nguồn gốc quan hệ di truyền ngan Xám Tây Ngun ni Đồng Nai theo dịng mẹ VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu hóa chất Mẫu: Đàn ngan Xám Lâm Đồng đưa nuôi bảo tồn gia trại Đồng Nai Từ đàn ngan nguyên liệu thu trứng, ấp nở lấy mẫu máu ngan Xám hệ nuôi Đồng Nai ký hiệu NX Sử dụng mẫu ngan nhập từ Pháp ngan lai (không rõ nguồn gốc bố, mẹ) nhận diện ký hiệu NP-T NL ni cùng địa bàn làm nguồn tham chiếu (Hình 1) Ký hiệu gồm ký tự số, ký tự nhóm giống số cá thể mẫu Hình Hình ảnh nhóm ngan lấy mẫu 41 Hóa chất: Phản ứng khuếch đại PCR thực hóa chất kit MyTaqTM Mix 2X (Bioline-Anh) Hóa chất điện di bao gồm Agarose 1,5% (Bioline), GelRed 0,6X (TBR), ladder 100bp (Thermo Scientific–Mỹ), dung dịch đệm TBE 0,5X (Việt Nam) 2.2 Thời gian địa điểm Thời gian: từ tháng 5/2021 đến tháng 11/2021 Địa điểm: Phịng thí nghiệm Cơng nghệ Sinh học – Phân viện Chăn nuôi Nam Bộ 2.3 Phương pháp Thiết kế mồi: Cặp mồi thiết kế phần mềm Primer3 dựa mạch khn có mã số truy cập NC_010965.1 (Carina moschata, genbank: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) Trình tự (5’-3’) mồi xi CACCCTAACCCGATTCTTC mồi ngược GATGCAAGTTGGCCGATGA, kích thước khoảng 546bp nằm gen Cytb mtDNA từ vị trí 15236 đến 15782 Khuếch đại đoạn gen PCR: Kích thước sản phẩm khuếch đại 546bp thuộc vùng gen cytochrome b ty thể Phản ứng PCR (50µl) chứa thành phần: 25 µl MyTaqTM Mix 2X, 1,2µl primer, 3,5µl DNA khn mẫu 19.1µl H2O Chu trình nhiệt thực theo bước: (1) 94oC phút; (2) 94oC 30 giây; (3) 56oC 40 giây; (4) 72oC 30 giây; (5) lặp lại 35 chu kỳ từ bước đến 4; (6) 72oC phút (7) giữ nhiệt độ 4oC 10 phút máy MasterCycler Pro S (Eppendorf, Đức) Các sản phẩm khuếch đại điện di gel agarose 1,5% (30 phút, 100V), quan sát chụp hình ảnh điện di máy GelDoc It2 (UVP, USA) với thang chuẩn 100bp 2.4 Xử lý số liệu So sánh trình tự vùng Cytb ty thể phần mềm MEGA X BioEdit để phân tích trình tự nuleotide Sử dụng phần mềm MEGA X để đánh giá khoảng cách di truyền với mơ hình Maximum Composite Likelihood phân tích bootstrap 1.000 (lặp lại 1.000 lần), phương pháp Maximum likelihood phân tích bootstrap 1.000 (lặp lại 1.000 lần) sử dụng để xây dựng phát sinh loài Dữ liệu cá thể ngan NC010965.1 (Ref; Nam Mỹ), AF059098.1 (Châu Mỹ), KX985733.1 (Ấn Độ), EU755254.1 (Trung Quốc) sử dụng tham chiếu nội chứng, MH676102.1 (Vịt) hay AB022118.1 (Gà) tham chiếu ngoại chứng cho xây dựng di truyền KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết khuếch đại đoạn gen Cytb mục tiêu với kích thước 546bp Phản ứng PCR khuếch đại vùng gen kích thước 546bp vùng gen Cytb cho 50 mẫu cá thể nhóm ngan: ngan Xám, ngan Pháp ngan lai (Hình 2) Hình Sản phẩm PCR sau điện di gel agarose 1,5% L: Ladder 100bp, NX: Ngan xám; NL: Ngan lai; NP-T: Ngan Pháp thuần; (-): đối chứng âm 42 Từ kết Hình cho thấy xuất 01 band sản phẩm giếng, rõ nét với kích thước phù hợp với kích thước mong đợi (546bp) đưa lý thuyết thiết kế cặp mồi Sau đó, sản phẩm PCR gửi giải trình tự cho bước phân tích 3.2 Những biến đổi trình tự vùng cytochrome b Từ 50 mẫu sản phẩm PCR giải trình tự, loại bỏ 01 mẫu chất lượng kém, lại 49 mẫu (29 mẫu ngan Xám) với đoạn trình tự khoảng 506 bp sử dụng cho phân tích đa hình nucleotide đánh giá đa dạng di truyền Kết cho thấy: Trung bình loại nucleotide Adenine (A)=25,62%; Thymine (T)=24,63%; Cytosine (C)=34,49%; Guanine (G)=15,26% Các nucleotide loại G+C chiếm trung bình khoảng 49,75% Kết nghiên cứu cùng xu hướng với kết nghiên cứu Kameshpandian ctv (2016) ngan Ấn Độ vùng gen Cytb với kích thước 940bp cho thấy tỷ lệ G+C 50%, tỷ lệ C cao G (tương ứng 34 16%), tỷ lệ A T cân Tỷ lệ nucleotide nghiên cứu tương tự nghiên cứu khác đa dạng nucleotide vùng Cytb dê (Pakpahan ctv, 2016), cừu (Sofla ctv, 2017), gà (Amadu ctv, 2016), bò (Kim ctv, 2013; Hartatik ctv, 2019) cho thấy thành phần nucleotide A+T gen Cytb cao thành phần nucleotide C+G Chỉ số đa dạng nucleotide nghiên cứu π=0,01837±0,0000228, cao so với kết Sun ctv (2012) nghiên cứu ngan Trung Quốc cho thấy đa dạng nucliotide trung bình nhóm giống ngan địa 0,00081, nhóm ngan Yuyao vùng Zhejiang thấp (0,00076) so với ngan Fuzhou vùng Fujian (0,00139) Các vị trí đa hình nucleotide 49 trình tự phân tích Hình tổng cộng 58 vị trí đa hình nucleotide phát 43 Hình Vị trí đa hình nucleotide vùng Cytb khuếch đại Trình tự dùng làm mạch khn (NX010965.1) Thêm vào đó, nhận diện kiểu thay nucleotide vị trí đa hình phân tích tổng hợp Bảng Bảng Kiểu thay nucleotide vị trí đa hình vùng gen Cytb ty thể Ngan Loại đa Vị trí đa hình hình 3, 33, 42, 129, 245, 325, C/T 335, 409, 429, 504 77, 78, 95, 137, 152, 155, T/C 285, 347, 422 8, 62, 80, 89, 138, 146, G/A 242, 261, 310, 425, 438, 459, 501 119, 158, 191, 203, 267, A/G 393, 493, 494 T/G 151, 502 G/T 447 A/T 252 T/A 464 G/C 342 Thêm A 244, 309, 500 Thêm T 408 Thêm G 478 Thêm C 421, 488 Thêm 341 G/C Thêm 348, 463 T/C A/G/Mất 243 A Mất A 505 44 Kết từ Bảng cho thấy 58 vị trí đa hình có 46 vị trí đột biến thay nucleotide, có vị trí đa hình đơn nucleotide (342, 493) 44 vị trí đa hình đa nucleotide Có 10 vị trí thêm nucleotide, đó: thêm A (244; 309; 500); thêm T (408); thêm G (478); thêm C (421; 488); thêm G/C (341); thêm T/C (348; 463) Và 02 vị trí nucleotide, đó: A/G/mất A (243) A (505) Tiếp tục phân tích liệu nhận diện haplotype nhóm Ngan khảo sát kết tổng hợp Bảng Bảng Phân tích haplotype mẫu cá thể ngan Haplotype Số cá Cá thể Chỉ số đa dạng thể haplotype (Hd) NX-Tr6, NX-Xa12, NX-Xa13, NXXa14, NX-Xa16, NX-Xa18, NXXTr26, NX-XTr29, NX-XTr30, NXXTr31, NX-Tr33, NX-De36, NXHap1 30 0,618±0,118 DTr37, NX-DTr39, NP-T43, NP-T45, NP-T48, NP-T51, NP-T52, NP-T55, NL-57, NL-58, NL-59, NL-60, NL-61, NL-63, NL-64, NL-65, NL-66, NL-67 Hap2 NX-Tr1 Hap3 NX-Tr2 Hap4 NX-Tr4 Hap5 NX-Tr7 Hap6 NX-Tr8 Hap7 NX-Tr9 Hap8 NX-Xa11 Hap9 NX-Xa19 Hap10 NX-XTr25, NX-DTr40, NX-DTr41 Hap11 NX-XTr27 Hap12 NX-XTr28 Hap13 NX-XTr32 Hap14 NX-Tr34 Hap15 NP-T47 Hap16 NP-T49 Hap17 NP-T50 Hap18 NP-T54 Có tổng cộng 18 haplotype nhận biết 49 cá thể ngan nghiên cứu với số đa dạng Hd=0,0618, haplotype trội Các cá thể nhóm ngan xám diện chủ yếu Hap1 (NX-Tr6, NX-Xa12,NX-Xa13, NX-Xa14, NX-Xa16, NX-Xa18, NX-XTr26, NX-XTr29, NX-XTr30, NX-XTr31, NX-Tr33, NX-De36, NX-DTr37, NX-DTr39), Hap3 (NX-XTr25, NX-DTr40, NX-DTr41), đơn lẻ cá thể Hap2-Hap9 (tương ứng cá thể NX-Tr1, NX-Tr2, NX-Tr4, NX-Tr7, NX-Tr9, NX-Xa11 NX-Xa19) Hap11-Hap14 (tương ứng NX-XTr27, NX-XTr28, NX-XTr32 NX-Tr34) Có cá thể ngan Pháp diện Hap1(NP-T43, NP-T45, NP-T48, NP-T51, NP-T52, NP-T55) cá thể đơn lẻ Hap15-Hap18 (tương ứng NP-T47, NP-T49, NP-T50 NP-T54) 45 Trong đó, 10 cá thể ngan Pháp lai diện Hap1 (NL-57, NL-58, NL-59, NL-60, NL-61, NL-63, NL-64, NL-65, NL-66, NL-67) Kameshpandian ctv (2016), khảo sát 78 cá thể ngan từ nhóm giống địa ngan Ấn Độ cho thấy có 11 haplotype số đa dạng haplotype (Hd) dao động từ 0,4394-0,7190 Trong đó, Sun ctv (2012) nghiên cứu 31 cá thể thuộc hai nhóm ngan địa Trung Quốc cho thấy có haplotype nhận diện với số đa dạng Hd 0,301 Hầu hết nghiên cứu đến nhận định chung đa dạng di truyền vùng gen Cytb ngan thấp (He ctv, 2008; Sun ctv, 2012; Kameshpandian ctv, 2016) Tương tự, Stai Hughes (2003) nhận định ngan loài có đa dạng di truyền thấp 3.3 Khoảng cách mối quan hệ di truyền Ma trận khoảng cách di truyền phân tích trình bày Bảng cho thấy khoảng cách di truyền nhóm ngan Xám với ngan Pháp lớn (0,0103), sau ngan Xám ngan lai (0,0095) thấp ngan lai ngan Pháp (0,0014) Điều cho thấy mối quan hệ di truyền ngan Xám ngan lai gần lai nghiên cứu xuất phát ngan mái Xám Bảng Khoảng cách di truyền nhóm NX NP-T NL NX 0,0155 0,0048 0,0044 NPT 0,0103 0,0026 0.0009 NL 0,0095 0,0014 0,0000 Phần liệu đường chéo giá trị khoảng cách di truyền, phần liệu đường chéo chênh lệch khoảng cách di truyền nhóm Dữ liệu in đậm nằm đường chéo giá trị khoảng cách di truyền nội nhóm Cây quan hệ di truyền xây dựng dựa mơ hình Tamura–Nei phương pháp Maximum Likelihood với giá trị bootstrap lặp lại 1.000 lần Sự phân hóa di truyền nhóm giống thể Hình Dựa vào quan hệ di truyền thấy nhóm ngan nói chung có quan hệ di truyền tách biệt so với gà hay cùng nguồn gốc tổ tiên ban đầu với vịt Các nhóm giống ngan nghiên cứu tách thành hai nhánh, nhánh lớn tập trung hầu hết cá thể ngan Xám, ngan Pháp toàn cá thể ngan lai Và nhánh lớn này, số cá thể ngan Xám với kiểu lông xám trắng, đen trắng hay xám cùng với vài cá thể ngan Pháp tách thành nhóm phụ nhỏ Ở nhánh khác (nhỏ hơn) tập trung số cá thể ngan Xám kiểu lông trắng nhánh phân chia thành nhóm phụ nhỏ Nhìn chung, đa phần ngan Xám, ngan Pháp ngan lai có quan hệ gần với ngan châu Mỹ Ấn Độ Theo số nghiên cứu cho thấy ngan (Cairina moschata) hóa từ vịt vùng Trung Nam Mỹ (Stah, 2008) hoặc từ ngỗng vùng châu Phi (Donne-Gouss ctv, 2002) sau du nhập nơi giới 46 Hình Cây quan hệ di truyền nhóm ngan Số nhánh giá trị bootstrap, thang tỉ lệ biểu thị khoảng cách di truyền KẾT LUẬN Tính đa dạng di truyền ngan Xám vùng gen Cytb cao so với ngan Pháp hay ngan lai, có quan hệ di truyền theo hệ mẹ gần gũi với nhóm ngan châu Mỹ Ấn Độ Đa dạng di truyền thấp thể nhóm ngan lai việc tách nhánh hoặc nhóm phụ ngan Xám có kiểu lơng trắng cần nghiên cứu để làm sáng tỏ TÀI LIỆU THAM KHẢO Alyethodi R.R., Kumar S., Panda B.K., Singh P., Jaiswal G and Choudhary P (2010) Molecular genetic characterization of Moti native duck using RAPD markers J Appl Anim Res., 37: 19-23 Amadu M.J., Suhaili S., Umar A.S and Zubair R.U (2016) Genetic diversity of indigenous chicken form the East coast of peninsular Malaysia inferred from control region of mitochondrial Am J Innovative Res Appl Sci., 2(6): 282-88 Award A., Khalil S.R and Abd-Elhakim Y.M (2015) Molecular phylogeny of some avian species using Cytochrome b gene sequence analysis Iran J Vet Res., 16: 218–22 Cục Chăn nuôi (2021) Thống kê chăn nuôi 2021 http://channuoivietnam.com/thong-ke-chan-nuoi Devos A., Lino Cardenas C.L., Glowacki F., Engels A., LoGuidice J.M., Chevalier D., Allorge D., Broly F and Cauffiez C (2010) Genetic polymorphism of CYP2U1, a cytochrome P450 involved in fatty acids hydroxylation Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 83: 105-10 Donne-Gouss C., Laudet V and Hanni C (2002) A molecular phylogeny of anseriformes based on mitochondrial DNA analysis Mol Phyl Evo., 23: 339-56 47 Hartatic T., Hariyono D.N.H and Adinata Y (2019) Genetic diversity and phylogenetic analysis of two Indonesian local cattle breeds based on cytochrome b gene sequences Biodiversitas, 20: 17-22 He D.Q., Zhu Q., Chen S.Y., Wang H.Y., Liu Y.P and Yao Y.G (2008) A homogenous nature of native Chinese duck matrilineal pool BMC Evol Biol., 8: 298 Kameshpandian P., Thomas S and Nagarajan M (2016) Genetic diversity and relationship of Indian Muscovy duck populations Mitochondrial DNA, PART A: 1-5 10 Phạm Thùy Linh, Nguyễn Thị Nga, Tạ Thị Hương Giang, Hoàng Thị Hồng Nhung Trần Thị Phương Thúy (2018) Đánh giá khả sinh sản tổ hợp ngan lai F1(Ngan Trâu x ngan R41) trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy Phương Tạp chí KHCN Đại học Hùng Vương 14(1): 12-18 11 Mwacharo J.M., Bjornstad G., Mobegi V., Nomura K., Hanada H., Amano T., Jianlin H and Hanotte O (2011) Mitochondrial DNA reveals multiple introductions of domestic chicken in East Africa Mol Phylogenet Evol., 58: 374-82 12 Nelson D.R., Zeldin D.C., Hoffman S., Maltais L.J., Wain H.M and Nebert D.W (2004) Comparison of cytochrome P450 (CYP) genes from the mouse and human genomes, including nomenclature recommendations for genes, pseudogenes and alternative-splice variants Pharmacogenetics, 14: 1-18 13 Pakpahan S., Artama W.T., Widayanti R and Supata I.G (2016) Genetic characteristics and relationship in different Goat populations of Indonesia based on cytochrome b gene sequences Asian J Anim Sci., 10(1): 2938 14 Sofia S.S., Seyedabadi H.R., Aliabad A.J and Sharifi R.S (2017) Genetic diversity and molecular phylogeny of Iranian sheep based on cytochrome b gene sequences Iranian J App Anim Sci., 7(2): 283-87 15 Stah P.W (2008) Animal domestication in South America In: The Handbook of South American Archaeology (Ed by Silvermann H & Isbell W.H.), Pp: 121–130 New York, NY: Springer New York 16 Stai S.M and Hughes C.R (2003) Characterization of microsatellite loci in wild and domestic Muscovy ducks (Cairina moschata) Anim Genet, 34: 387-89 17 Sun J., Huang J., Zhao X., Zhong H., Zhu Q and Liu Y (2012) Limited genetic diversity of Chinese Muscovy Duck (Cairina moschata) revealed by partial sequences of mitochondrial DNA cytochrome b Gene Information technology and agricultural engineering AISC 134 Berlin Heidelberg: SpringerVerlag; Pp: 279-82 18 Thomson C.E., Gilbert J.D.J and Brooke M.L (2014) Cytochrome b divergence between avian sister species is linked to generation length and body mass PLoS One, 9(2): 1-6 (e85006) 19 Veeramani P., Prabakaran R., Sivaselvam S.N., Sivakumar T., Selvan S.T and Karthickeyan S.M.K (2014) Analysis of genetic distance for indigenous and exotic duck breeds J Poult Sci Tech., 2: 84-86 48 ... hiểu biết cấu trúc di truyền lịch sử hóa ngan cịn q (Alyethodi ctv, 2010; Veeramani ctv, 2014) Do đó, đề tài ? ?B? ?ớc đầu đánh giá khả sinh trưởng đa dạng di truyền giống ngan Xám dựa vào vùng cytochrome. .. NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ B? ?ỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG VÀ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA GIỐNG NGAN XÁM DỰA VÀO VÙNG CYTOCHROME b TRÊN TY THỂ (Đã chỉnh sửa theo kết luận... hình, suất sinh trưởng 60 ngan Xám từ 0- trưởng giống ngan Xám 20 tuần tuổi Nội dung 2: Đánh giá đa dạng di Khuếch đại thành công gen truyền giống ngan Xám dựa mục tiêu Cytb với kích thước vào trình