GIỚI THIỆU
Tính cấp thiết của luận án
Rau xanh, đặc biệt là rau cải, đóng vai trò quan trọng trong chế độ dinh dưỡng hàng ngày của con người Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), mỗi năm có khoảng 2,7 triệu ca tử vong trên toàn cầu liên quan đến việc thiếu rau xanh trong khẩu phần ăn (Lê Hồng Phúc, 2010) Việt Nam có truyền thống trồng rau cải lâu đời, góp phần vào việc nâng cao sức khỏe cộng đồng (Lê Thị Khánh).
Rau họ Cải (Brassicaceae) như bắp cải, súp lơ, su hào và củ cải là một trong những loại rau phổ biến nhất tại Việt Nam Năm 2017, cả nước trồng rau cải trên diện tích 919,9 ha, đạt năng suất 176,1 tạ/ha và sản lượng 16.194,9 tấn Tại Đồng bằng sông Cửu Long, diện tích trồng rau cải là 264,8 ha với năng suất 169,3 tạ/ha, sản lượng đạt 4.482,3 tấn Riêng tỉnh Vĩnh Long, thành phố Cần Thơ và Hậu Giang có diện tích trồng rau cải lần lượt là 29,7 ha, 9,8 ha và 16,5 ha, với năng suất và sản lượng đạt 192,1 tạ/ha (570,6 tấn), 124,9 tạ/ha (122,4 tấn) và 39,8 tạ/ha (sản lượng chưa được nêu).
65,6 tấn, tương ứng (Niên giám thống kê ngành nông nghiệp và phát triển nông thôn, 2018)
Sâu kéo màng (Hellula undalis) thuộc bộ Cánh Vảy (Lepidoptera), là dịch hại quan trọng trên cây họ cải, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, cũng như một số nước ôn đới Ngài H undalis đẻ trứng trên đọt cải non, sâu non tấn công gần đỉnh sinh trưởng, gây hư chồi ngọn và có thể gây thiệt hại lên đến 100% năng suất ở nhiều quốc gia như Hawaii, Ấn Độ, Malaysia, Philippines, Đài Loan, Ai Cập, Iraq và Nhật Bản Tại Việt Nam, sâu này làm giảm năng suất và phẩm chất rau cải trong vụ Thu Đông.
SKM, hay H undalis, là một loài côn trùng gây hại nghiêm trọng trên các giống cải ở Đông Nam Á, đặc biệt tại ĐBSCL, nơi chúng tấn công nhiều loại cải như cải bắp, cải bẹ dún và cải thìa Trưởng thành cái đẻ trứng trên đọt cải non, khiến ấu trùng ăn phá làm chết đọt, có thể gây mất 100% năng suất Hơn nữa, ấu trùng H undalis tạo lớp tơ không thấm nước, làm giảm hiệu quả của thuốc trừ sâu Nông dân thường phải phun thuốc với liều lượng cao hơn khuyến cáo; 95% nông dân ở Sóc Trăng sử dụng thuốc hóa học, nhưng chỉ 45% cho rằng biện pháp này hiệu quả Để phát triển nông nghiệp bền vững và thân thiện với môi trường, cần nghiên cứu và áp dụng các biện pháp quản lý sâu hại an toàn, không để lại dư lượng.
Hóa chất tín hiệu (semiochemical) là các hợp chất hóa học, chủ yếu là hữu cơ, có vai trò truyền đạt thông tin giữa các sinh vật trong tự nhiên Nghiên cứu và ứng dụng hóa chất tín hiệu giúp điều chỉnh hành vi của côn trùng và tương tác trong mối quan hệ giữa cây trồng, loài gây hại và thiên địch, từ đó bảo vệ cây trồng khỏi các loài gây hại Phương pháp này đang phát triển mạnh mẽ và được coi là công cụ hiệu quả thay thế cho thuốc bảo vệ thực vật hóa học trong chiến lược quản lý dịch hại tổng hợp (IPM) Hàng năm, hàng chục triệu mồi pheromone được sản xuất để khảo sát diễn biến mật số quần thể và bẫy tập hợp trên diện tích hơn 10 triệu hecta.
1 triệu hecta được áp dụng kỹ thuật quấy rối sự bắt cặp và bẫy tập hợp (Witzgall et al., 2010)
Pheromone giới tính là hóa chất tín hiệu do côn trùng tiết ra để thu hút cá thể khác giới cùng loài, với nguồn gốc tự nhiên và tính chuyên biệt cao Việc sử dụng pheromone giới tính trong quản lý côn trùng gây hại được coi là giải pháp an toàn, bền vững và không độc hại, góp phần vào chiến lược quản lý dịch hại tổng hợp (IPM) Hàng năm, hàng chục triệu mồi pheromone được sản xuất, ứng dụng cho việc khảo sát mật số quần thể và bẫy tập hợp trên diện tích hơn 10 triệu hecta, trong đó hơn 1 triệu hecta áp dụng kỹ thuật quấy rối sự bắt cặp.
Pheromone giới tính của H undalis được xác định là hợp chất
(11E,13E)-11,13-hexadecadienal (E11,E13-16:Ald) là một hợp chất quan trọng được nghiên cứu bởi Sugie và cộng sự vào năm 2003 Theo báo cáo của Kalbfleisch (2006), tại Philippines, việc sử dụng bẫy với mồi là ngài cái chưa bắt cặp đã cho thấy hiệu quả hấp dẫn cao hơn khoảng 5,5 lần đối với ngài đực.
Trong nghiên cứu về hiệu quả hấp dẫn của pheromone, bẫy được đặt với mồi là ngài cái chưa bắt cặp cho thấy hiệu quả cao gấp 25 lần so với bẫy sử dụng hợp chất E11,E13-16:Ald tại tỉnh Hậu Giang Điều này chỉ ra rằng ngoài pheromone chính, còn tồn tại các thành phần pheromone khác của ngài H undalis chưa được xác định Hơn nữa, việc kết hợp các hydrocarbon như (3Z,6Z,9Z)-3,6,9-docosatriene (Z3,Z6,Z9-22:H) và (3Z,6Z,9Z)-3,6,9-tricosatriene (Z3,Z6,Z9-23:H) vào thành phần pheromone giới tính đã nâng cao hiệu quả hấp dẫn đối với hai loài ngài thuộc họ Crambidae, trong đó có ngài sâu đục trái cà.
Leucinodes orbonalis Guenenée (Vang et al., 2018) và ngài sâu đục dây khoai lang Omphisa anastomosalis Guenenée (Trần Văn Hiếu và Lê Văn Vàng,
Theo nghiên cứu của Tripathi et al (2009) và Pinheriro et al (2013), tinh dầu thiết yếu từ sả được coi là thuốc trừ sâu sinh học hiệu quả trong quản lý côn trùng gây hại Tinh dầu sả và tỏi có khả năng xua đuổi ruồi và muỗi Nguyễn Minh Luân (2015) cũng đã chỉ ra rằng hợp chất (E)-10-pentadecenal, cùng với dầu sả và dầu tỏi, có hiệu quả quấy rối đối với ngài sâu đục củ khoai lang Nacoleia sp.
Đề tài nghiên cứu "Khảo sát tình hình gây hại, đặc điểm sinh học và hóa chất tín hiệu trong quản lý sâu kéo màng, Hellula undalis (Lepidoptera)" nhằm phân tích ảnh hưởng của loài sâu này đến nông nghiệp, xác định các đặc điểm sinh học quan trọng và tìm hiểu vai trò của hóa chất tín hiệu trong việc kiểm soát sự phát triển của chúng Nghiên cứu sẽ cung cấp thông tin cần thiết để xây dựng các biện pháp quản lý hiệu quả hơn, góp phần bảo vệ mùa màng và nâng cao năng suất nông nghiệp.
Nghiên cứu về "Crambidae hại cải tại Đồng bằng sông Cửu Long" nhằm giới thiệu biện pháp an toàn và thân thiện với môi trường để quản lý sự gây hại của loài H undalis tại khu vực ĐBSCL.
Mục tiêu nghiên cứu
Quản lý hiệu quả H undalis gây hại rau cải tại ĐBSCL bằng hóa chất tín hiệu
1.2.2 Mục tiêu cụ thể Đánh giá khả năng gây hại của H undalis hại rau cải tại 3 tỉnh Vĩnh
Long, Cần Thơ và Hậu Giang
Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích ảnh hưởng của một số giống rau cải và nhiệt độ đến sự phát triển của ngài H undalis, cũng như khả năng nhân nuôi phạm vi hẹp của đối tượng này Đồng thời, nghiên cứu cũng đánh giá sự đa dạng di truyền của quần thể ngài H undalis được thu thập tại vùng Đồng bằng sông Cửu Long (ĐBSCL).
Nghiên cứu cấu trúc hóa học pheromone giới tính của H undalis
Nghiên cứu quy trình tổng hợp hợp chất E11,E13-16:Ald nhằm đánh giá khả năng hấp dẫn của mồi pheromone giới tính tổng hợp đối với ngài H undalis trong điều kiện ngoài đồng Đồng thời, nghiên cứu cũng đánh giá hiệu quả của tinh dầu sả và tỏi trong việc quấy rối sự bắt cặp và đẻ trứng của ngài H undalis cả trong nhà lưới và ngoài đồng Kết quả nghiên cứu sẽ hỗ trợ ứng dụng hóa chất tín hiệu trong quản lý sự gây hại của H undalis đối với rau cải.
Nội dung nghiên cứu
Điều tra và khảo sát tình hình gây hại của sâu kéo màng gây hại rau cải tại tỉnh Vĩnh Long, Cần Thơ và Hậu Giang
Khảo sát ảnh hướng của giống cải, nhiệt độ lên sự phát triển của sâu kéo màng và khả năng nhân nuôi phạm vi hẹp của đối tượng này
Xác định sự đa dạng di truyền của quần thể sâu kéo màng được thu thập tại Đồng bằng sông Cửu Long bằng dấu phân tử ISSR
Xác định thành phần hóa học của pheromone giới tính của sâu kéo màng hại rau cải
Tổng hợp thành phần pheromone giới tính chính, hợp chất E11,E13- 16:Ald
Xác định khả năng hấp dẫn của mồi pheromone giới tính tổng hợp đối với sâu kéo màng ở điều kiện ngoài đồng
Nghiên cứu đã khảo sát tác động của một số hóa chất tín hiệu đến khả năng bắt cặp và đẻ trứng của sâu kéo màng Việc ứng dụng các hóa chất tín hiệu này có thể giúp quản lý hiệu quả sự gây hại của sâu kéo màng trong nông nghiệp.
Đối tượng và phạm vi nghiên cứu
Sâu kéo màng (H undalis), rau cải họ Brassicaceae
Nghiên cứu này tập trung vào tình hình gây hại, đặc điểm sinh học và ảnh hưởng của thức ăn cùng nhiệt độ đến sự phát triển và đa dạng di truyền của SKM tại ĐBSCL Thời gian nghiên cứu diễn ra từ tháng 11/2014 đến tháng 2/2018, đồng thời cũng xem xét hóa chất tín hiệu và hiệu quả của chúng đối với SKM trong khu vực này.
Giới hạn của nghiên cứu
Pheromone giới tính đã được xác định cấu trúc hóa học tại phòng thí nghiệm Sinh thái học Hóa chất của trường Đại học Nông nghiệp và Công nghệ Tokyo, Nhật Bản Quá trình tổng hợp pheromone này được thực hiện tại phòng thí nghiệm Phòng trừ Sinh học thuộc Bộ môn Bảo vệ Thực vật và được sử dụng cho các thí nghiệm trong luận án.
Tinh dầu sả và tinh dầu tỏi là những sản phẩm hữu ích được cung cấp bởi cửa hàng hóa chất và vật tư Nông nghiệp Cần Thơ Việc sử dụng tinh dầu này không chỉ mang lại lợi ích cho sức khỏe mà còn có nhiều ứng dụng trong đời sống hàng ngày.
Đánh giá hiệu quả của pheromone giới tính, tinh dầu sả, tinh dầu tỏi và hợp chất E10-15:Ald ngoài đồng chủ yếu dựa vào mật số ngài H undalis đực trong bẫy để đánh giá pheromone, cũng như số trứng của ngài H undalis cái để đánh giá tinh dầu sả, tinh dầu tỏi và hợp chất E10-15:Ald Tuy nhiên, việc xác định hiệu quả kinh tế còn gặp khó khăn do nhiều yếu tố chi phối.
Những điểm mới của luận án
Researchers have identified a new sex pheromone component, (Z)-11-tetradecenyl acetate, in the moth species H undalis, along with the role of the unsaturated hydrocarbon (Z,Z,Z)-tricosatriene in enhancing the attractiveness of the sex pheromone These findings present promising applications for the sex pheromone of H undalis.
Nghiên cứu này nhằm xác định đặc điểm sinh học và tính đa dạng di truyền của ngài H undalis, đồng thời phân tích ảnh hưởng của điều kiện nuôi nhân, bao gồm thức ăn và nhiệt độ, đến khả năng phát triển, tỷ lệ gia tăng và hệ số nhân của loài này qua ba thế hệ nuôi.
- Tổng hợp hợp chất (E,E)-11,13-hexadecadienal (E11,E13-16:Ald), thành phần pheromone giới tính của ngài H undalis bằng con đường tổng hợp thông qua phản ứng Wittig
- Đánh giá được hiệu quả của pheromone giới tính tổng hợp, tinh dầu sả và tinh dầu tỏi đối với H undalis.
Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của luận án
Luận án này cung cấp kiến thức khoa học quan trọng về tình hình gây hại, đặc điểm sinh học, tính đa dạng di truyền, hóa chất tín hiệu và biện pháp quản lý đối với ngài H undalis, một loài gây hại đáng kể trên cây cải tại ĐBSCL Kết quả nghiên cứu không chỉ có ý nghĩa trong các lĩnh vực côn trùng nông nghiệp và quản lý dịch hại mà còn đóng góp cho sinh thái học hóa chất tại khu vực này Đặc biệt, việc xác định thành phần pheromone giới tính mới (hợp chất Z11-14:OAc) và ảnh hưởng của hợp chất T23 lên sự hấp dẫn của pheromone giới tính đối với ngài H undalis là những đóng góp mới mẻ cho lĩnh vực hóa chất sinh thái học.
Sâu kéo màng là một trong những loài côn trùng gây hại nghiêm trọng cho cây cải ở Đồng bằng sông Cửu Long Chúng có thói quen nhả tơ không thấm nước để bao phủ đọt cải, từ đó gây hại bên trong Để bảo vệ mùa màng, nông dân thường phải sử dụng thuốc trừ sâu hóa học với nồng độ và tần suất cao Tuy nhiên, hiệu quả của các loại thuốc hóa học này trong việc phòng trị sâu bệnh thường không đạt yêu cầu.
Nghiên cứu trong luận án đã cung cấp thông tin quan trọng cho việc phát triển chiến lược quản lý hiệu quả dịch hại ở Đồng bằng sông Cửu Long, nhằm đảm bảo an toàn, giảm thiểu việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học và đáp ứng các yêu cầu của canh tác nông nghiệp bền vững.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Vật liệu nghiên cứu
Thời gian thực hiện nghiên cứu kéo dài từ tháng 11/2014 đến tháng 2/2018, với các thí nghiệm được tiến hành tại nhiều địa điểm khác nhau Các thí nghiệm trong phòng thí nghiệm được thực hiện tại Bộ môn Bảo vệ Thực vật và phòng thí nghiệm Di truyền, Bộ môn Di truyền và chọn giống cây trồng, Khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ; phòng thí nghiệm Khoa học nông nghiệp, Trường Đại học Cửu Long; và Phòng thí nghiệm Sinh thái học Hóa chất, Trường Đại học Nông nghiệp và Công nghệ Tokyo - Nhật Bản Ngoài ra, các thí nghiệm ngoài đồng cũng được thực hiện trên ruộng rau cải của nông dân tại huyện Long Hồ, Trà Ôn, Bình Minh (Vĩnh Long), Quận Cái Răng (Thành phố Cần Thơ) và Châu Thành A (Hậu Giang).
3.1.1 Vật liệu, dụng cụ và thiết bị
Vật liệu, dụng cụ và thiết bị dùng trong nghiên cứu bao gồm:
Các thiết bị quan trọng trong phòng thí nghiệm bao gồm tủ sấy, hệ thống cô quay, máy khuấy từ gia nhiệt, máy chạy PCR, máy điện di, máy chụp hình gel, máy ủ nước nóng WB/OB 7-45, máy ly tâm Mikro 22R và máy PCR GenAmp PCR system 2007, cùng với máy cộng hưởng từ hạt nhân Jeol Alpha 300 Fourier transform spectrometer Những thiết bị này đóng vai trò quan trọng trong việc thực hiện các thí nghiệm và phân tích khoa học chính xác.
Nihondenshi, Tokyo, Japan), máy sắc ký khí - khối phổ (GC HP 6890 series -
HP 5973 Mass Selective Detector), hệ thống sắc ký khí – điện râu đầu (GC HP
6890 series – Electroantennogram detector), máy nghiền, máy lắc, máy ly tâm, cân điện tử, kính phóng đại, kính hiển vi quang học, tủ lạnh 4 o C, tủ đông -
Trong nghiên cứu và thí nghiệm, các dụng cụ quan trọng bao gồm máy che, bẫy dính, bình cầu, bình tam giác, đĩa petri, kim mũi giáo, vợt lược, lọ thủy tinh nhỏ có nắp teflon, beaker, pipette Pasteur, phễu ly trích, micropipette, cột thủy tinh, cột sắc ký mở, nhiệt ẩm kế, giấy sắc ký lớp mỏng, ống đong nhựa, eppendorf, kẹp inox, kéo và giấy thấm Những dụng cụ này đóng vai trò thiết yếu trong việc tiến hành các thí nghiệm và phân tích khoa học.
Bài viết này đề cập đến các vật liệu cần thiết cho thí nghiệm, bao gồm tuýp cao su ngoại nhập với đường kính ngoài 0,8 cm và septum cao su từ Aldrich, ống cao su non dùng để ghép cà chua, microsyringe có dung tích 25 μl, băng keo màu, thước dây, giấy nhôm và vợt bắt côn trùng.
(E)-2-Pentenal, 11-bromo-undecan-1-ol, Dimethoxymethane (DMM), n-hexane và Pyridinium chlorochromate (PCC) là sản phẩm của Công ty
Aldrich (USA), Triphenylphosphine (PPh3), p-toluenesulfonic acid monohydrate, silver nitrate (AgNO3), and lithium bromide (LiBr) are products from Wako Pure Chemical Corporation (Japan) Chromatography plates, silica gel, tetrahydrofuran (THF), and dichloromethane (CH2Cl2) are sourced from Merk Sodium sulfate (Na2SO4), calcium chloride (CaCl2), n-hexane (used for sample extraction), and benzene are products from China Additionally, 98% lemongrass essential oil is purchased from Can Tho Technical Equipment and Technology Company.
Hợp chất (Z,Z,Z)-3,6,9)-tricosatriene (T23) được mua từ Công Ty Shin-Etsu (Nhật Bản), trong khi các hợp chất (Z)-14-tetradecenyl acetate (Z11-14:OAc) và (E)-11-hexadecenal (E11-16:Ald) được cung cấp bởi phòng thí nghiệm Hóa chất Sinh thái, Trường Đại học Nông nghiệp và Công nghệ Tokyo (TUAT) Hợp chất (E)-10-pentadecenal (E10-15:Ald) được lấy từ Phòng thí nghiệm Phòng trừ sinh học, Bộ môn Bảo vệ thực vật, Khoa Nông nghiệp và Sinh học ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ Ngoài ra, tinh dầu sả và dầu tỏi được mua từ Công ty Thiết bị Kỹ thuật và Công nghệ Cần Thơ.
Hóa chất ly trích DNA: CTAB buffer, chloroform, phenol, RNAse, ethanol 70% và 100%, β-mercaptoethanol, Isopropanol, Chloroform: isoamyalcohol (24:1), TE
Hóa chất trong PCR và điện di: PCR buffer, Taq polymerase, dNTP, MgCl2, mồi (primer) và agarose tinh khiết, H2O PCR, loading dye, ethidium bromide, thang chuẩn DNA
3.1.3 Nguồn SKM Ấu trùng của H undalis được thu thập trên các ruộng cải thuộc các tỉnh ở ĐBSCL, rồi chuyển về Trường Đại học Cửu Long Trong phòng thí nghiệm, ấu trùng được tách ra nuôi riêng trong từng hộp nhựa trong (đường kính 5,0 cm, cao 5,5 cm) ở điều kiện tự nhiên của phòng (T o C: 30,2; H% = 68,1) bằng lá cải tươi để làm thức ăn cho đến khi hóa nhộng Lá cải trong hộp được thay mới mỗi ngày/lần Nhộng được chuyển sang hộp nhựa mới (5,0 cm x 5,5 cm) bên trong có đặt miếng bông gòn ướt để giữ ẩm cho đến khi vũ hóa Ngài H undalis vừa mới vũ hóa được phân biệt giới tính và nuôi bằng mật ong nguyên chất (tẩm mật ong vào miếng bông gòn đặt trong hộp)
3.1.4 Phiếu điều tra nông dân và khảo sát đồng ruộng
Phiếu điều tra được thiết kế để thu thập thông tin về tình hình canh tác rau cải, mức độ gây hại của H undalis và các biện pháp phòng trị mà nông hộ đang áp dụng.
Phiếu ghi nhận chỉ tiêu khảo sát trên đồng ruộng được sử dụng để theo dõi tình hình sâu hại, mức độ gây hại, tỷ lệ hại và diễn biến sự gây hại của H undalis trên từng loại rau cải tại địa phương (Phụ lục 2).
Nội dung và phương pháp nghiên cứu
Mục tiêu của nghiên cứu này là tìm hiểu hiện trạng canh tác rau cải, đánh giá tình hình gây hại của sâu kim tuyến (SKM) và các biện pháp phòng trị mà nông dân áp dụng để đối phó với loại sâu hại này.
Thời gian điều tra: tiến hành từ tháng 02 - 12/2016
Hình thức điều tra được thực hiện qua phỏng vấn 180 nông hộ trồng rau cải, mỗi hộ sử dụng một phiếu câu hỏi chuẩn (Phụ lục 1), với yêu cầu diện tích canh tác tối thiểu là 500 m² Người được phỏng vấn là người trực tiếp chăm sóc ruộng cải Địa điểm điều tra bao gồm 8 quận/huyện: Bình Minh, Bình Tân, Long Hồ (tỉnh Vĩnh Long); Phong Điền, Bình Thủy, Cái Răng (thành phố Cần Thơ); và Long Mỹ, Vị Thủy (tỉnh Hậu Giang), trong đó mỗi huyện/quận có số lượng nông hộ điều tra được phân bố tối thiểu là 20 hộ.
3.2.1.2 Khảo sát trên đồng ruộng
Sự khảo sát được tiến hành trên 25 ruộng cải tại 8 huyện là địa bàn điều tra nông dân (mỗi huyện chọn 3 ruộng, trừ huyện Long Hồ chọn 4 ruộng)
Ruộng cải khảo sát được lựa chọn dựa trên kết quả ghi nhận ở Mục 3.2.1.1
Thông tin về ruộng khảo sát được trình bày trong Bảng 3.1
Mục tiêu của nghiên cứu là khảo sát tình hình sâu hại, khả năng gây hại, tỷ lệ hại và diễn biến gây hại của sâu keo mùa thu (SKM) trên các loại rau cải trong điều kiện ngoài đồng trong vụ Đông Xuân tại các địa điểm điều tra nông dân.
Thời gian khảo sát: tiến hành từ tháng 12/2016 - 3/2017
Cách tiến hành: trên mỗi ruộng cải khảo sát, chọn 10 điểm cố định theo đường chéo góc (Hình 3.1), mỗi điểm tương đương 2 m 2 cải
Bảng 3.1: Thông tin các ruộng rau cải khảo sát tình hình côn trùng và SKM gây hại
STT Giống rau cải Diện tích (m 2 )
Ngày gieo Địa điểm ruộng điều tra
1 Cải ngọt 550 10/12/2016 Đông Bình, Bình Minh
2 Cải xanh 530 30/12/2016 Đông Bình, Bình Minh
3 Xà lách xoong 2500 25/01/2017 Thuận Tiến, Bình Minh
4 Cải ngọt 600 13/12/2016 Thành Lợi, Bình Tân
5 Cải bẹ dún 500 18/12/2016 Thành Lợi, Bình Tân
6 Tùa xại 500 26/12/2016 Mỹ Thuận, Bình Tân
7 Cải xanh 570 10/01/2017 Phước Hậu, Long Hồ
8 Cải bẹ dún 500 27/12/2016 Phước Hậu, Long Hồ
9 Cải ngọt 500 19/01/2017 Phú Quới, Long Hồ
10 Cải thìa 650 25/01/2017 Phước Hậu, Long Hồ
11 Cải xanh 500 17/12/2016 Nhơn Nghĩa, Phong Điền
12 Cải ngọt 550 26/01/2017 Trường Long, Phong Điền
13 Cải thìa 670 03/2/2017 Nhơn Nghĩa, Phong Điền
14 Cải xanh 900 15/12/2016 Bình Thường, Bình Thủy
15 Cải ngọt 550 02/3/2017 Long Tuyền, Bình Thủy
16 Cải củ 600 20/01/2017 Long Tuyền, Bình Thủy
17 Cải ngọt 1200 03/3/2017 Phú Thứ, Cái Răng
18 Cải bẹ dún 700 25/2/2017 Ba Láng, Cái Răng
19 Cải tùa xại 500 20/01/2017 Hưng Phú, Cái Răng
20 Cải xanh 500 12/12/2016 Vĩnh Viễn, Long Mỹ
21 Cải ngọt 600 25/12/2016 Vĩnh Thuận Đông, Long Mỹ
22 Cải củ 750 15/01/2017 Lương Tâm, Long Mỹ
23 Cải ngọt 500 8/01/2017 Nàng Mau, Vị Thủy
24 Cải bẹ dún 500 18/01/2017 Vị Thủy, Vị Thủy
25 Cải tùa xại 550 20/3/2017 Vị Bình, Vị Thủy
Chỉ tiêu ghi nhận: thành phần côn trùng gây hại và sự gây hại của
SKM 6 ngày/lần trong suốt vụ cải (tổng cộng gồm 5 lần ghi nhận chỉ tiêu)
Các loài côn trùng gây hại không thể nhận diện trực tiếp trên ruộng sẽ được thu thập mẫu và đưa vào các hộp nhỏ riêng biệt Những mẫu này sau đó sẽ được chuyển về phòng thí nghiệm để xác định chính xác.
Theo Phạm Kim Sơn (2006), mức độ phổ biến của một loài rau cải được xác định dựa trên tần suất xuất hiện của loài đó trên các ruộng rau cải được khảo sát.
(-): Rất ít phổ biến (0-5%) (+): Ít phổ biến (>5-25%) (++): Phổ biến (>25-50%) (+++): Rất phổ biến (>50%)
Tỷ lệ gây hại của SKM được tính theo công thức sau
Hình 3.1: Sơ đồ ghi nhận tình hình gây hại của SKM và côn trùng gây hại khác trên ruộng cải khảo sát
3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng của ký chủ đối với sự phát triển của SKM
Mục tiêu: Nghiên cứu ảnh hưởng của ký chủ (thức ăn) lên sự phát triển của H undalis
Thời gian: thí nghiệm thực hiện từ tháng 01 – 7/2015 Địa điểm: Phòng thí nghiệm trường ĐH Cửu Long
Thí nghiệm được thiết kế theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên với 5 nghiệm thức thức ăn từ 5 giống cải khác nhau: cải Ngọt (Brassica integrifolia), cải Xanh (Brassica juncea), cải Tùa xại (Brassica campetrus), cải Thìa (Brassica rapachinensis) và cải Bó xôi (Spinacia oleracea), với 30 lần lặp lại Mỗi lần lặp lại bao gồm một hộp nhựa trong có đường kính 5,0 cm và cao 5,5 cm, trong đó nuôi một ấu trùng H undalis vừa mới nở bằng lá của một giống cải thí nghiệm cho đến khi vũ hóa.
Để tiến hành nuôi trưởng thành H undalis, trước tiên cần vũ hóa chúng để tạo cặp, giao phối và đẻ trứng trong lồng lưới kích thước 45 cm x 50 cm x 50 cm Trong lồng, đặt 2 chậu cải ngọt từ 10 - 15 ngày tuổi và miếng bông gòn thấm mật ong Sau khi trưởng thành cái đẻ trứng, lá cải chứa trứng được chuyển vào hộp nhựa có miếng bông gòn ướt để giữ ẩm và đặt trong điều kiện phòng thí nghiệm Ngay khi trứng nở, ấu trùng sẽ được chuyển sang hộp nhựa có chứa lá cải từ một nghiệm thức, và lá cải này được thu từ các chậu cải trồng trong nhà lưới cùng ngày tuổi, được thay mới hàng ngày Khi ấu trùng hóa nhộng, nhộng sẽ được chuyển sang hộp nhựa mới và giữ cho đến khi vũ hóa.
Hình 3.2 minh họa hộp nhựa chứa lá cải xanh tươi để nuôi ấu trùng (A) và lồng lưới dành cho việc nuôi trưởng thành H undalis (B) Để khảo sát khả năng đẻ trứng, mười cặp trưởng thành vừa vũ hóa, mỗi cặp gồm một con đực và một con cái, được thả vào lồng lưới Chậu cải và miếng bông gòn tẩm mật ong trong lồng sẽ được thay mới hàng ngày cho đến khi trưởng thành cái qua đời.
Trong nghiên cứu về H undalis, chúng tôi ghi nhận kích thước và thời gian phát triển ở tất cả các giai đoạn, bao gồm cả giai đoạn trứng với hơn 100 mẫu trứng được quan sát Bên cạnh đó, chúng tôi cũng theo dõi số lượng trứng mà mỗi con cái trưởng thành đẻ ra hàng ngày.
3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triển của H undalis
Mục tiêu của nghiên cứu này là khám phá tác động của điều kiện nhiệt độ nuôi đến sự phát triển của H undalis Qua đó, chúng tôi nhằm xác định nhiệt độ nuôi phù hợp nhất để phát triển loài này, từ đó cung cấp nguồn giống cho các khảo sát và nghiên cứu tiếp theo.
Thời gian: thí nghiệm thực hiện từ tháng 8 – 12/2015 Địa điểm: Phòng thí nghiệm trường ĐH Cửu Long
Thí nghiệm được thiết kế theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên, bao gồm bốn nghiệm thức với các điều kiện nhiệt độ 16 o C, 20 o C, 25 o C và nhiệt độ phòng Mỗi nghiệm thức được lặp lại 30 lần, với mỗi lần lặp là một hộp nuôi sử dụng lá của giống cải được chọn dựa trên kết quả khảo sát ảnh hưởng của ký chủ.
Để tiến hành, lá cải chứa trứng của H undalis được đặt vào hộp nhựa có bông gòn ướt nhằm duy trì độ ẩm và được bảo quản trong tủ định ôn với nhiệt độ và độ ẩm phù hợp Khi trứng nở, ấu trùng sẽ được chuyển sang hộp nhựa có lá cải tươi làm thức ăn, và lá cải trong hộp cần được thay mới mỗi ngày Khi ấu trùng hóa nhộng, nhộng sẽ được chuyển sang hộp nhựa mới và được giữ cho đến khi vũ hóa.
Chỉ tiêu ghi nhận: thời gian phát triển ở từng giai đoạn và vòng đời của H undalis ở từng điều kiện nhiệt độ khảo sát
3.2.4 Khảo sát khả năng nhân nuôi trong phạm vi hẹp đối với H undalis từ giai đoạn thành trùng
Mục tiêu của nghiên cứu là ứng dụng nhân nuôi SKM từ giai đoạn thành trùng để xác định loại thức ăn và nhiệt độ tối ưu, đã được khảo sát, nhằm đánh giá khả năng sinh sản qua một thế hệ và hệ số gia tăng tự nhiên của quần thể SKM.
Thời gian: thí nghiệm thực hiện từ tháng 01 – 3/2016 Địa điểm: Phòng thí nghiệm trường ĐH Cửu Long
Cách tiến hành: sự khảo sát được tiến hành theo phương pháp của Wilson (1971) và được điều chỉnh cho phù hợp với điều kiện của Phòng thí nghiệm:
Bước đầu tiên trong quy trình nuôi thành trùng là chọn 15 cặp đang bắt cặp, mỗi cặp gồm một con đực và một con cái Các cặp này được đặt vào hộp nhựa có kích thước 5 x 5,5 cm, cung cấp thức ăn là mật ong nguyên chất và để ở nhiệt độ phòng để kích thích thành trùng cái đẻ trứng Sau khi thành trùng cái đã đẻ trứng, hàng ngày cần chuyển chúng sang hộp nuôi khác, nơi đã chuẩn bị sẵn miếng bông gòn thấm mật ong nguyên chất, cho đến khi thành trùng cái chết.
- Bước 2: ấu trùng vừa mới nở được chuyển vào hộp nhựa (kích thước
Mỗi hộp 5 x 5,5 cm chứa một ấu trùng và được đựng lá cải xanh bằng cọ mềm Trên hộp có ghi nhãn ngày ấu trùng nở Lá cải trong hộp được cung cấp dư lượng sâu ăn và được thay mới hàng ngày cho đến khi sâu hóa nhộng.
Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu điều tra được tổng hợp dưới dạng bảng hoặc đồ thị bằng phần mềm Microsoft Excel 2010 và phân tích thống kê bằng phần mềm SPSS 21.0
Khảo sát trên 25 ruộng rau cải cho thấy mức độ phổ biến, tần suất xuất hiện và tỷ lệ gây hại của SKM trên các ruộng này.
Kết quả khảo sát về ảnh hưởng của thức ăn, nhiệt độ, khả năng phát triển quần thể, hiệu lực của pheromone và các hóa chất tín hiệu đối với SKM đã được phân tích thống kê bằng phương pháp kiểm định Duncan, sử dụng phần mềm SPSS 21.0.
Cách trên theo hướng Bắc 6m Cách trên theo hướng Bắc 4m Cách trên theo hướng Bắc 2m Cách trái Tây 2m Túi treo dầu sả Cách phải Đông 2 m
Cách dưới theo hướng Nam 2m Cách dưới theo hướng Nam 4m Cách dưới theo hướng Nam 6m
