ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ DỊCH CHIẾT THỰC VẬT LÊN SỰ SINH TRƯỞNG PHÁT TRIỂN VÀ HOẠT TÍNH ENZYME CỦA MỘT SỐ VI KHUẨN ĐẤT

B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I TR N TH ðÀO ðÁNH GIÁ NH HƯ NG C A M T S D CH CHI T TH!C V#T LÊN S! SINH TRƯ NG PHÁT TRI&N VÀ HO T TÍNH ENZYME UREASE C A M T S VI KHU-N ð.T LU#N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P Chuyên ngành: Công ngh: sinh h=c Mã s@: 60 42 80 NgưGi hưHng dJn khoa h=c: PGS.TS NGUYON T.T C NH TS NGUYON THÀNH TRUNG HÀ N I 2012 L I CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên c#u c%a riêng Các k)t qu+ nghiên c#u lu,n văn hoàn toàn trung th/c chưa t1ng cơng b3 b4t kỳ cơng trình Hà N8i, ngày tháng 10 năm 2012 Ngư=i cam ñoan Tr>n Th? ðào Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… i L I C M ƠN Trong trình h@c t,p, th/c t,p t3t nghiBp, tơi nh,n đưDc s/ giúp đG t,n tình c%a đồn thH, cá nhân ngồi trư=ng VIi lịng bi)t ơn sâu sLc, tơi xin gMi l=i c+m ơn chân thành ñ)n hai th>y giáo – PGS TS NguyQn T4t C+nh, gi+ng viên B8 môn Canh TácRKhoa Nông h@c TS NguyQn Thành Trung, gi+ng viên B8 môn Công nghB vi sinhRKhoa Công nghB sinh h@cRTrư=ng ðTi h@c Nơng nghiBp Hà N8i tTo điUu kiBn, hưIng dWn t,n tình giúp đG tơi su3t q trình th/c t,p hồn thành lu,n văn Tôi xin chân thành c+m ơn th>y cô giáo khoa Công nghB sinh h@c, th>y cô giáo; Cán b8 nghiên c#u c%a B8 môn Công nghB vi sinhR Trư=ng ðTi h@c Nơng nghiBp Hà N8i tTo điUu kiBn t3t nh4t cho tơi q trình h@c t,p th=i gian th/c t,p t3t nghiBp Tơi xin bày tZ lịng bi)t ơn đ)n gia đình, bTn bè ln bên cTnh đ8ng viên, giúp đG tơi q trình nghiên c#u, h@c t,p làm th/c t,p t3t nghiBp Xin chân thành c+m ơn! Hà N i, ngày tháng 10 năm 2012 H@c viên TrSn ThT ðào Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… ii MUC LUC Trang L_I CAM ðOAN i L_I CbM ƠN ii M C L C iii DANH M C BbNG vi DANH M C HÌNH vii DANH M C CÁC Te VIfT TgT ix I Mh ðiU 1.1 ðkt v4n ñU 1.2 Mlc đích, u c>u 1.2.1 Mlc đích 1.2.2 Yêu c>u 1.3 Ý nghĩa khoa h@c ý nghĩa th/c tiQn 1.3.1 Ý nghĩa khoa h@c 1.3.2 Ý nghĩa th/c tiQn II TsNG QUAN TÀI LIuU 2.1 Q trình chuyHn hóa đTm đ4t 2.1.1 Q trình c3 đ?nh nitơ ñ4t 2.1.2 Q trình amơn hóa 2.1.3 Quá trình nitrat hóa 2.2 GiIi thiBu vU vi sinh v,t ñ4t 2.2.1 Thành ph>n vi sinh v,t ñ4t 2.2.2 Vai trò c%a vi sinh v,t ñ4t 10 2.3 C4u trúc ch#c c%a enzyme urease 11 2.3.1 C4u trúc phân tM hoTt ñ8ng c%a enzyme urease 11 2.3.2 Vai trò c%a enzyme urease 14 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… iii 2.4 Các ch4t #c ch) hoTt ñ8ng enzyme urease 16 2.4.1 bnh hư~ng c%a hDp ch4t vô ñ)n kh+ hoTt ñ8ng c%a enzyme urease 16 2.4.2 M8t s3 ch4t h•u kìm hãm hoTt đ8ng enzyme urease 18 2.5 Vai trò c%a d?ch chi)t th/c v,t hoTt ñ8ng kháng khu€n 20 III V•T LIuU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C„U 24 3.1 V,t liBu 24 3.2 Môi trư=ng 24 3.3 N8i dung nghiên c#u 25 3.4 Phương pháp nghiên c#u 25 3.4.1 Phương pháp thu th,p mWu th/c v,t mlc tiêu 25 3.4.2 Phương pháp chi)t tách d?ch chi)t th/c v,t thô 25 3.4.3 Phương pháp l4y mWu xM lý mWu ñ4t 26 3.4.4 Phương pháp phân l,p vi khu€n amơn đ4t 27 3.4.5 Phương pháp làm thu>n, quan sát hình thái khu€n lTc (NguyQn Lân Dũng, 1972) 28 3.4.6 Phương pháp gi• gi3ng 28 3.4.7 Phương pháp làm tiêu b+n soi bào tM vi khu€n 29 3.4.8 Phương pháp chi)t tách DNA (Miniprep of bacteria genomic DNA (molecular Cell Physiology, 2002) 29 3.4.9 Phương pháp phân tích trình t/ isolate phân l,p ñưDc 30 3.4.10 Phương pháp ñánh giá tác ñ8ng c%a d?ch chi)t th/c v,t ñ)n sinh trư~ng, phát triHn c%a vi khu€n phân l,p ñưDc 31 3.4.11 Phương pháp ñánh giá tác đ8ng kìm hãm c%a d?ch chi)t th/c v,t thơ lên hoTt tính enzyme urease thương mTi 32 IV KfT QUb VÀ THbO LU•N 34 4.1 K)t qu+ thu th,p mWu th/c v,t mlc tiêu t1 Sa Pa – Lào Cai 34 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… iv 4.2 K)t qu+ phân l,p vi khu€n amơn hóa đ4t trˆng lúa vùng ñˆng bŠng sông Hˆng Gia Lâm – Hà N8i 40 4.3 K)t qu+ gi+i trình t/ 16s rDNA c%a isolate phân l,p đưDc 46 4.3.1 K)t qu+ nhân 16s rDNA c%a ch%ng phân l,p 46 4.3.2 K)t qu+ gi+i trình t/ 16s rDNA c%a ch%ng phân l,p ñưDc 47 4.4 K)t qu+ ñánh giá +nh hư~ng c%a d?ch chi)t th/c v,t ñ)n sinh trư~ng, phát triHn c%a vi khu€n phân l,p ñưDc 48 4.5 K)t qu+ ñánh giá +nh hư~ng c%a d?ch chi)t th/c v,t đ)n hoTt tính enzyme urease 51 4.5.1 K)t qu+ ñánh giá +nh hư~ng c%a d?ch chi)t th/c v,t chi)t bŠng nưIc c4t đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 52 4.5.2 ðánh giá +nh hư~ng c%a d?ch chi)t th/c v,t chi)t bŠng loTi dung mơi h•u khác đ)n hoTt tính enzyme urease 56 V KfT LU•N VÀ ð‹ NGHŒ 65 5.1 K)t lu,n 65 5.2 Ki)n ngh? 65 TÀI LIuU THAM KHbO 66 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… v DANH MUC B NG B+ng 2.1 Hàm lưDng ñTm b? m4t ~ dTng khác (Ledgard 2001) B+ng 2.2 S/ phân b3 c%a vi sinh v,t ñ4t xác ñ?nh theo chiUu sâu ñ4t (Lê Xuân Phương, 2008) 10 B+ng 2.3 HoTt đ8 kìm hãm c%a Quercetin glycoside c%a ñ3i vIi urease t1 ñ,u r/a (Jack bean) urease t1 Lactobusillus fermentum (Shabana, 2010) 18 B+ng 3.1 Thành ph>n ph+n #ng PCR cho nhân dòng gen 16s rRNA 30 B+ng 3.2 Trình t/ mˆi 16s rDNA sM dlng nhân dịng gen 31 B+ng 4.1 Danh mlc tên loài th/c v,t sM dlng làm v,t liBu nghiên c#u tTi Sa Pa (Ninh Th? Phíp, 2008) 35 B+ng 4.2 ðkc ñiHm th/c v,t h@c c%a loài sM dlng làm v,t liBu nghiên c#u (Ninh Th? Phíp, 2008) 35 B+ng 4.3 Mô t+ công dlng phân b3 c%a loài nghiên c#u (Ninh Th? Phíp, 2008) 38 B+ng 4.4 Hình thái khu€n lTc bào tM c%a vi khu€n amơn hóa đưDc phân l,p đ4t trˆng lúa vùng đˆng bŠng sơng Hˆng – Gia Lâm – Hà N8i 41 B+ng 4.5 K)t qu+ Blast trình t/ 16s rDNA c%a isolate R17 47 B+ng 4.6 Kh+ kìm hãm c%a mWu d?ch chi)t th/c v,t chi)t bŠng nưIc ñ)n sinh trư~ng, phát triHn c%a isolate phân l,p ñưDc 50 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vi DANH MUC HÌNH Trang Hình Các q trình chuyHn hóa ñTm ñ4t (Courtney Johnson, 2005) Hình Trung tâm hoTt đ8ng c%a urease d/a phân tích sinh lý quang ph• (Mobley et al., 1995) 12 Hình C4u trúc tinh thH trung tâm hoTt ñ8ng c%a enzyme urease (Mobley c ng s9, 1995) 13 Hình Cơ ch) hoTt đ8ng c%a enzyme urease (Mobley c ng s9, 1995) 14 Hình Các hDp ch4t vơ #c ch) hoTt ñ8ng c%a enzyme urease (Shabana, 2010) 17 Hình Các dTng c4u trúc c%a quercetin glycoside (Shabana, 2010) 19 Hình K)t qu+ kiHm tra mWu vi khu€n amơn hóa phân l,p đưDc mơi trư=ng Christene’s urê agar 45 Hình K)t qu+ nhân gen 16s rDNA vIi ckp mˆi 16sF1 16sR1 46 Hình K)t qu+ Blast trình t/ 16s rDNA c%a isolate R17 48 Hình 10a Kh+ #c ch) sinh trư~ng isolate R19 c%a mWu d?ch chi)t th/c v,t chi)t bŠng nưIc c4t 49 Hình 10b Kh+ #c ch) sinh trư~ng isolate R20 c%a mWu d?ch chi)t th/c v,t chi)t bŠng nưIc c4t 49 Hình 11a bnh hư~ng c%a d?ch chi)t dàng mê cơng d?ch chi)t Puˆng đìa đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 53 Hình 11b bnh hư~ng c%a d?ch chi)t đìa chlt d?ch chi)t đìa sài đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 54 Hình 11c bnh hư~ng c%a d?ch chi)t t>m gMi ký d?ch chi)t tùng diè đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 54 Hình 11d bnh hư~ng c%a d?ch chi)t xà đìa pi đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 55 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… vii Hình 12a bnh hư~ng c%a d?ch chi)t dàng mê cơng chi)t bŠng dung mơi h•u khác đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 58 Hình 12b bnh hư~ng c%a d?ch chi)t puˆng đìa chi)t bŠng dung mơi h•u khác đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 59 Hình 12c bnh hư~ng c%a d?ch chi)t đìa sài chi)t bŠng dung mơi h•u khác đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 60 Hình 12d bnh hư~ng c%a d?ch chi)t đìa chlt chi)t bŠng dung mơi h•u khác đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 61 Hình 12e bnh hư~ng c%a d?ch chi)t t>m gMi ký chi)t bŠng dung mơi h•u khác đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 62 Hình 12f bnh hư~ng c%a d?ch chi)t tùng diè chi)t bŠng dung mơi h•u khác đ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 63 Hình 12g bnh hư~ng c%a d?ch chi)t xà đìa pi chi)t bŠng dung mơi h•u khác ñ)n hoTt tính enzyme urease thương mTi 63 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… viii DANH MUC CÁC TX VI T TYT AHA: Acetohydroxamic acid CT: Công th#c DCD: Dicyandiamide DCTV: D?ch chi)t th/c v,t H pyroli: Helicobacter pyroli IC: Inhibitor concentration MT: Môi trư=ng LB: Luria Broth nBTPT: NR(nRbutyl) thiophosphoric triamide NCBI: National center for biotechnology information PCR: Ph+n #ng chu”i polymerase (polymerase chain reaction) SB: Sodium phosphate buffer WHO: World health organism Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… ix Hình 12a nh hưxng c•a dTch chiŠt dàng mê cơng chiŠt b•ng dung mơi hŽu khác đŠn hopt tính enzyme urease thương mpi Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nơng nghi p …………………… 58 Hình 12b nh hưxng c•a dTch chiŠt pu•ng đìa chiŠt b•ng dung mơi hŽu khác đŠn hopt tính enzyme urease thương mpi Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nơng nghi p …………………… 59 Hình 12c nh hưxng c•a dTch chiŠt đìa sài chiŠt b•ng dung mơi hŽu khác đŠn hopt tính enzyme urease thương mpi Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 60 Hình 12d nh hưxng c•a dTch chiŠt đìa chat chiŠt b•ng dung mơi hŽu khác đŠn hopt tính enzyme urease thương mpi Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 61 Hình 12e nh hưxng c•a dTch chiŠt tSm g–i ký chiŠt b•ng dung mơi hŽu khác đŠn hopt tính enzyme urease thương mpi Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nơng nghi p …………………… 62 Hình 12f nh hưxng c•a dTch chiŠt tùng diè chiŠt b•ng dung mơi hŽu khác đŠn hopt tính enzyme urease thương mpi Hình 12g nh hưxng c•a dTch chiŠt xà đìa pi chiŠt b•ng dung mơi hŽu khác ñŠn hopt tính enzyme urease thương mpi Ghi chú: 1: CT1: 20 pl SB + 30 pl d\ch chiUt th9c v t (DCTV) gKc + pl Urease 2: CT2: 20 pl SB + 30 pl DCTV pha loãng lNn + pl Urease 3: CT3: 20 pl SB + 30 pl buffer + pl pl nư^c deion 4: CT4: 20 pl SB + 30 pl DCTV gKc + pl nư^c deion 5: CT5: 20 pl SB + 30 pl nư^c deion + pl Urease Ms70: Methanol 70%, Ms85: Methanol 85% As70: Aceton 70%, Ts70: Acetonitrile 70% Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 63 K)t qu+ thí nghiBm cho th4y, ~ gi)ng s3 3: ch™ ch#a dung mơi h•u khác (methanol 70%, methanol 85%, aceton 70%, actonitrile 70%) gi)ng s3 4: ch™ ch#a d?ch chi)t đìa sài khơng làm +nh hư~ng đ)n s/ đ•i màu mơi trư=ng Các mWu th/c v,t đưDc chi)t bŠng dung mơi h•u cho d?ch chi)t màu xanh nhTt (màu c%a diBp llc) Khi th/c hiBn ph+n #ng ñĩa thTch, màu sLc d?ch chi)t khơng gây +nh hư~ng đ)n k)t qu+ ph+n #ng Nhìn chung, gi)ng s3 1, d?ch chi)t mWu th/c v,t khơng pha lỗng có kh+ kìm hãm cao hoTt tính enzyme urease, đưDc thH hiBn qua màu hˆng nhTt xu4t hiBn quanh gi)ng Trong đó, ~ gi)ng s3 2: d?ch chi)t mWu th/c v,t ñưDc pha lỗng l>n, kh+ kìm hãm c%a d?ch chi)t ñ3i vIi hoTt tính enzyme urease so vIi d?ch chi)t khơng pha lỗng Quan sát màu hˆng xu4t hiBn ~ gi)ng thTch cho th4y, mWu th/c v,t đưDc chi)t bŠng dung mơi acetonitrile thH hiBn kh+ kìm hãm hoTt tính enzyme urease t3t nh4t so vIi đưDc chi)t bŠng dung mơi: methanol 70%, methanol 85%, aceton 70% K)t qu+ đưDc thH hiBn thơng qua màu hˆng xu4t hiBn ~ gi)ng s3 (các mWu th/c v,t chi)t bŠng acetonitrile), màu hˆng xu4t hiBn quanh gi)ng r4t nhTt r4t nhZ Các mWu th/c v,t đưDc chi)t bŠng b3n loTi dung mơi khác (methanol 70%, methanol 85%, aceton 70% acetonitrile 70%) đUu có kh+ kìm hãm hoTt tính enzyme urease ~ công th#c (d?ch chi)t th/c v,t không pha lỗng) Trong đó, k)t qu+ bưIc đ>u cho th4y, d?ch chi)t bŠng acetonitrile 70% có kh+ kìm hãm hoTt tính enzyme urease t3t nh4t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 64 V K T LU#N V Ô NGH 5.1 KŠt lu|n R ðU tài ñã phân l,p ñưDc isolate có kh+ phân gi+i mTnh urê Trong ñó có isolate tr/c khu€n gram (+) isolate c>u khu€n R K)t qu+ bưIc ñ>u gi+i trình t/ 16s rDNA isolate R17 có m#c đ8 tương ñˆng cao (97%) vIi Staphylococcus saprophyticus Staphylococcus sp R Trong mWu th/c v,t mlc tiêu thu th,p ñưDc, d?ch chi)t mWu dàng mê công thH hiBn kh+ #c ch) sinh trư~ng c%a isolate R19 R20 Tuy nhiên, d?ch chi)t mWu thH hiBn kh+ #c ch) y)u đ3i vIi hoTt tính enzyme urease R D?ch chi)t xà đìa pi, đìa sài, tùng dìe, t>m gMi ký có kh+ kìm hãm mTnh hoTt đ8ng c%a urease R Các mWu d?ch chi)t th/c v,t chi)t bŠng dung môi acetonitrile thH hiBn kh+ #c ch) hoTt tính enzyme urease t3t nh4t 5.2 KiŠn nghT Ti)p tlc ti)n hành đ?nh danh phân tM xác đ?nh lồi c%a isolate phân l,p ñưDc R Xác ñ?nh thành ph>n ch4t d?ch chi)t th/c v,t thu th,p đưDc có tác dlng kìm hãm hoTt tính enzyme urease ñưDc sinh t1 mWu vi khu€n phân l,p Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 65 TÀI LI U THAM KH O A Tài li:u tiŠng Vi:t ð” Thanh Bình (2010) Nghiên c#u m8t s3 ch) ph€m chi)t xu4t t1 th/c v,t ñH làm gi+m s/ m4t ñTm sau bón cho lúa tTi Gia LâmRHà N8i, Lu n văn th c sĩ Nông nghi p, Trư=ng ðTi h@c Nông nghiBp, Hà N8i NguyQn Lân Dũng (1972) M8t s3 phương pháp nghiên c#u vi sinh v,t T,p Nxb Khoa h@c k thu,t Bùi H•u Ng@c (2010) Nghiên c#u +nh hư~ng c%a m8t s3 ch) ph€m có nguˆn g3c t1 th/c v,t đU xu4t liUu lưDng thích hDp làm gi+m lưDng đTm bón cho ngơ LVN 10 tTi huyBn n Mơ t™nh Ninh Bình Lu n văn th c sĩ Nông nghi p, Trư=ng ðTi h@c Nông nghiBp, Hà N8i Lương ð#c Ph€m (2009) Cơ s~ khoa h@c công nghB b+o vB môi trư=ng T,p Nhà xu4t b+n Giáo dlc Ninh Th? Phíp (2008) ðiUu tra, đánh giá nguˆn gen thu3c tLm c%a ngư=i dao ñZ ~ Sapa – Lào Cai đU xu4t hưIng sM dlng bUn v•ng Lê Xuân Phương (2010) Vi sinh v,t h@c môi tr=ng Ti h@c Bỏch Khoa NÔng NguyQn Xuõn Thành (2007), Vi sinh v,t h@c công nghiBp Nhà xu4t b+n Giáo dlc Vũ H•u m (1995) Phân bón cách bón phân ðTi h@c Nơng nghiBp I Hà N8i B Tài li:u tiŠng Anh Agarry OO, Olaleye MT and Bello Michael CO (2005) Comparative antimicrobial activities of aloe veragel African Journal Biotechnol (12):1413R1414 10 Ahmad M, Muhammad N, Ahmed M, Lodhi MA, Mahjabben, Jehan N, Khan Z, Ranjit R, Shaheen F, Choudhary MI (2008) Urease inhibitor from Datisca cannabina Journal Enzyme Inhibition Med Chem 23: 386R390 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 66 11 Andrews RK, Blakeley RL, Zerner B (1984) Urea and urease Inorganic Biochemistry 6: 245R283 12 Badjakov I, Nikolova M, Gevrenova R, Kondakova V, Todorovska E, Atanassov A (2008) Bioactive compounds in small fruits and their influence on human health Biotechnol EQ 22: 581R587 13 Bae EA, Han MJ, Kim NJ, Kim DH (1998) Anti Helicobacter pylori activity of herbal medicines Biological & Pharmaceutical Bulletin 21(9): 990R992 14 Baker JT, Borris RP and Carte B (1995) J Nat Prod 58: 1325R1357 15 Bast E (1986) Urease formation in purple sulfur bacteria (Chromatiaceae) grown on various nitrogen sources Arch Microbiol 146:199R203 16 Beaton JD (1978) Urea: its popularity grows as a dry of nitrogen Crops Soils 30:11R14 17 Benini S, Rypniewski WR, Wilson KS, Miletti S, Ciurli S & Mangani S (1999) A new proposal for urease mechanism based on the crystal structures of the native and inhibited enzyme from Bacillus pasteurii: Why urea hydrolysis costs two nickels Structure 7: 205–216 18 Biswas, Chattopadhyay KI, Banerjee RK and Bandyopadhyay U (2002) Biological activities and medicinal properties of neem (Azadirachta indica) Current Sci 82 (11):1336R1345 19 Bremmer JM & Mulvaney RL (1978) Urease activity in soils In: Soil enzymes (Ed R.G Burns) pp 149R196 Academic Press, New York 20 Brett PJ, DeShazer D, Woods DE (1998) Burkholderia thailandensis sp nov., a Burkholderia pseudomalleiRlike species Int J Syst Bacteriol 48: 317–320 21 Byrnes, Savant BH and Craswell ET (1983) Effect of urease inhibitor phenyl phosphorodiamidate on the efficiency of urea applied to rice Soil Sci Soc Am.J 47: 270R274 22 Castello MC, Phatak A, Chandra N and Sharon M (2002) Indian J Exp Biol 40(12): 1378R1381 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 67 23 Cellin L, Campli ED, Masulli M, Bartolomeo SD, Allocati N (1996) Inhibition of Helicobacter pylori by garlic extract (Allium sativum) FEMS Immunology and Medical Microbiology 13: 277R279 24 Christensen WB (1946) Urea decomposition as a means of differentiating Proteus and paracolon cultures from each other and from Salmonella and Shigella types Journal Bacteriol 52:461–466 25 Ciurli S, Benini S, Rypniewski WR, Wilson KS, Miletti S, & Mangani S (1999) Structural properties of the nickel ions in urease: Novel insight into the catalytic and inhibition mechanisms Coordination Chemistry Reviews, 190–192, 331–355 26 Cock IE (2009) Antimicrobial activity of Eucalyptus major and Eucalyptus baileyana, methanolic Extracts Journal Microbiol (1): 1R14 27 Conrad JP (1940) Hydrolysis of urea in soils by thermolabile catalysis Soil Science 49 (3): 253R263 28 Courtney Johnson (2005) Nitrogen Basics–The Nitrogen Cycle Nutrient Management Spear Program Department of Crop and Soil Sciences, College of Agriculture and Life Sciences, Cornell university 29 Danesh J, Scholar R, Peto R (1998) Risk factors for coronary heart disease and infection with Helicobacter pylori British Medical Journal 316: 1130R1132 30 De Boer, Kool HJ, Broberg A (2005) J Ethnopharmacol 96, 461R469 31 Di HJ, Cameron KC (2002) The use of a ni trification inhibitor, dicyandiamide (DCD) to decrease nitrate leaching and nitrous oxide emissions in a simulated grazed and irrigated a grassland Soil use and management 18: 395R403 32 Di HJ, Cameron KC (2003) Mitigation of nitrous oxide emissions in sprayR irrigated grazed grassland by treating the soil with dicyandiamide, a nitrification inhibitor Soil use and management 19: 284R290 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 68 33 Di HJ, Cameron KC (2004a) Effects of temperature and application rate of a nitrification inhibitor, dicyandiamide (DCD), on nitrification rate and microbial biomass in a grazed pasture soil Australian journal of soil research (in press) 34 Dixon EN, Blakeley RL, & Zerner B (1980) Jack bean urease (EC 3.5.1.5) I A simple dry ashing procedure for the microdetermination of trace metals in proteins The nickel content of urease Canadian Journal of Biochemistry, 58: 469–473 35 Doughari, Manzara S (2008) In vitro antibacterial activity of crude leaf extracts Mangifera indica African Journal Microbiol.Res 2: 067R072 36 Ogunleye DS and Ibitoye SF (2003) Tropical Journal Pharmacol Res 2: 239R241 37 Fenn LB and Hossner LR (1985) Ammonia volatilization from ammonium or ammonium forming nitrogen fertilizers Advances in Soil Sience 1: 123R169 38 Germanò P, Sanogo R, Guglielmo M, DePasquale R, Crisafi G, Bisignano G (1998) Effects of Pteleopsis suberosa extracts on experimental gastric ulcers and Helicobacter pylori growth Journal of Ethnopharmacology 59 (3): 167R172 39 Gound WD, Cook FD & Webster GR (1973) Factors affecting urea hydrolase in several Alberta soils Plants and Soil 58: 393R401 Gray JP, Herwig RP (1996) Phylogenetic analysis of the bacterial communities in marine sediments Appl Environ Microbiol 62 (11): 4049–59 40 Ha NC, Oh ST, Sung JY, Cha KA, Lee MH and Oh BH (2001) Supramolecular assembly and acid resistance of Helicobacter pylori urease Nature Structural Biology 8: 505–509 41 Hancock RD, Viola R (2005) Improving the nutritional value of crops through enhancement of LRascorbic acid (vitamin C) content: Rationale and biotechnological opportunities J Agric Food Chem 53: 5248R5257 42 Iwalokun BA, Ogunledun A, Ogbolu DO, Bamiro SB and Jimiomojola J (2004) In vitro antimicrobial properties of aqueous garlic extract against Multidrug resistant bacteria and candida species from Nigeria Journal of Medical Food (3): 327R333 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 69 44 Jabri E, Carr MB, Hausinger RP and Karplus PA (1995) The crystal structure of urease from Klebsiella aerogenes Science 268: 998–1004 44 Kareem SO, Akpan I and Ojo OP (2008) Antimicrobial activity of Calotropis proceraon selected pathogenic microorganisms African J Biomed.Res 11: 105R110 45 Khan RU, Durrani FR, Chand N and Anwar H (2010) Influence of feed supplementation with Cannabis sativaon quality of broilers carcass Pakistan Vet J 30 (1): 34R38 46 Kirimuhuzya C, Waako P, Joloba M and Odyek O (2009) The antimycobacterial activity of Lantana camaraa plant traditionally used to treat symptoms of tuberculosis in SouthRWestern Uganda African Health Sci (1): 40R45 47 Kumar AR, Subburathinam KM and Prabakar G (2007) Asian J Microbiol Biotechnol Environ Sci 9(1): 177R180 48 Mendall MA, Goggin PM, Molineaux N, Levy J, Toosy T, Strachan D, Camm AJ, Northfield TC (1994) Relation of Helicobacter pylori infection and coronary heart disease British Heart Journal 71: 37R439 49 Mamiya G, Takishima K, Masakuni M, Kayumi T, Ogawa K, & Sekita T (1985) Complete amino acid sequence of jack bean urease Proceedings of the Japan Academy, Series B, 61: 395–398 50 Mobley HLT, Island MD and Hausinger RP (1995) Molecular biology of microbial ureases Microbiological Reviews 59: 451–480 51 Mulvaney RL and Bremner JM (1981) Control of urea transformations in soils, p 153R196 In E A Paul and J N Ladd (ed.), Soil biochemistry, vol Marcel Dekker, Inc NewYork 52 Nazeer MS, Pasha TN, Shahid A and Zulfiqar A (2002) Effect of Yucca Saponin on Urease Activity and Development of Ascites in Broiler Chickens Int.J.Poul.Sci 1(6): 174R178 53 Nazia M and Tariq P (2006) Bactericidal activity of Black pepper, Bay leaf, Aniseed and Coriander against oral isolates Pakistan J Pharm Sci 19 (3): 214R218 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 70 54 Ohara A, Saito F, Matsuhisa T (2008) Screening of antibacterial activities of edible plants against Streptococcus mutans Food Sci Technol Res 14: 190R193 55 Ohsaki A, Takashima J, Chiba N, Kawamura M (1999) Microanalysis of a selective potent anti Helicobacter pylori compound in a Brazilian medicinal plant, Myroxylon peruiferum and the activity of analogues Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (8): 1109R1112 56 Overrein LN & More PG (1967) Factors affecting urea hydrolysis and ammonia volatilization Soil Science Society of America Proceedings 31 (1): 57R61 57 Pastene E, Troncoso M, Fifueroa G, Alarcon J, Speisky H (2009) Association between polymerization degree of apple peel polyphenols and inhibition of Helicobacter pylori urease J Agric Food Chem 57: 416R424 58 Pour BM, Srinivasan S, Jegathambigai RN and Suresh R (2010) A Comparative Study: Antimicrobial Activity of Methanol Extracts of Lantana camara Various Parts Pharmacognosy 1(6): 348R351 59 Sabahat S and Perween T (2005) Antibacterial activities of Mentha piperita, Pisum sativum and Momordica charantia PakistanJ Bot 37 (4): 997R 1001 60 Sahrawat KL (1980) Control of urea hydrolysis and nitrification in soil by chemicals prospects and problems Plant Soil 57:335R352 61 Sairam K, Hemalatha S, Kumar A, Srinivasan T, Ganesh J, Shanka M and Venkataraman S (2003) Evaluation of antidiarrhoeal activity in seed extracts of Mangifera indica J Ethnopharmacol 84 (1):11R15 62 Satoshi Matsubara and colleagues (2003) Suppression of Helicobacter pylori induced gastritis by green tea extract in Mongolian gerbils Biochemical and Biophysical Research Communications 310: 715–719 63 Shaban (2010) Screening of Edible Plants for Urease Inhibitors and Chemical Structures of the Inhibitors Doctor of Philosophy in Applied Life Sciences, Japan Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 71 64 Schmidt TM, Relman DA (1994) Phylogenetic identification of uncultured pathogens using ribosomal RNA sequences Methods Enzymol Methods in Enzymology 235: 205–22 65 Suzuki M, Miura S, Suematsu M, Fukumura D, Kurose I, Suzuki H, Kai A, Kudoh Y, Ohashi M, Tsuchiya M (1992) Helicobacter pylori associated ammonia production enhances neutrophil dependent gastric mucosal cell injury American Journal of Physiology 263: 719R725 66 Tamura K (2004) 2004091338 Japan Kokai Tokkyo Koho 67 Tisdale SL., Nelson WL & Beaton JD (1985) Soil fertility and fertilizers (4th edition), pp 161R169 Macmillan Publishing company, New York 68 Tougas G, Chen M, Hwang Pharm DP, Liu MM, Eggleston MMS (1999) Prevalence and impact of upper gastrointestinal symptoms in the Canadian population findings from the digestion study American Journal of Gastroenterology 94 (10): 2845R2854 69 Vagionas K, Ngassapa O, Runyoro D, Graikou K, Gortzi O, Chinou I (2007) Chemical analysis of edible aromatic plants growing in Tanzania Food Chem 105: 1711R1717 70 Vlietinck AJ, Van Hoof L, Totté J, Lasure A, Vanden Berghe D, Rwangabo PC and Mvukiyumwami J (1995) J Ethnopharmacol, 46, 31 71 Xiao ZP, Shi DH, Li HQ, Zhang LN, Xu C, zhu HL (2007) Polyphenols based on isoflavones as inhibitors of Helicobacter pylori urease Bioorg Med Chem 15: 3703R3710 72 Wang YC, Huang TL (2005) Screening of anti Helicobacter pylori herbs deriving from Taiwanese folk medicinal plants FEMS Immunology and Medical Microbiology 43(2): 295R300 73 Weisburg WG, Barns SM, Pelletier DA, Lane DJ (1991) 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study J Bacteriol 173 (2): 697–703 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 72 ... AHA: Acetohydroxamic acid CT: Công th#c DCD: Dicyandiamide DCTV: D?ch chi)t th/c v,t H pyroli: Helicobacter pyroli IC: Inhibitor concentration MT: Môi trư=ng LB: Luria Broth nBTPT: NR(nRbutyl)... đ? ?Dc kiHm sốt có thH dWn đ)n trˆng b? thiBt hTi b? ng8 đ8c amơn hokc ñ8 pH cao Hơn n•a, ~ loTi ñ4t b+ n, hiBu qu+ sM dlng phân b? ?n urê th4p urê b? bay vào khí quyHn (gi+m m4t 50% so vIi lưDng b? ?n... ăn u3ng khó tiêu… cho đ)n bBnh nan y khó ch•a bBnh tim mTch, gan, th,n, th>n kinh… Trong m8t s3 cơng trình cơng b3 g>n th3ng kê đ? ?Dc 64 loTi bBnh ch#ng ñã ñ? ?Dc ñiUu tr? b? ?ng thu3c theo cách c•