NGHIÊN cứu QUÁ TRÌNH PHÁT TRIỂN một số GIỐNG nấm THUỘC CHI GANODERMA BẰNG CÔNG NGHỆ NHÂN GIỐNG DỊCH THỂ

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC – MƠI TRƯỜNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: SINH HỌC ỨNG DỤNG CHUYÊN NGÀNH: SINH HỌC ỨNG DỤNG ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU QUÁ TRÌNH PHÁT TRIỂN MỘT SỐ GIỐNG NẤM THUỘC CHI GANODERMA BẰNG CÔNG NGHỆ NHÂN GIỐNG DỊCH THỂ Người hướng dẫn Sinh viên thực Mã sinh viên Lớp : TS Trần Thị Phú : Nguyễn Thị Mỹ Hạnh : 1811507410102 : 18SU Đà Nẵng, tháng 06 năm 2022 NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN NHẬN XÉT CỦA DOANH NGHIỆP NHẬN XÉT CỦA NGƯỜI PHẢN BIỆN TÓM TẮT Tên đề tài: Nghiên cứu trình phát triển số giống nấm thuộc chi Ganoderma công nghệ nhân giống dịch thể Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Mỹ Hạnh Mã sinh viên: 1811507410102 Lớp: 18SU Trong đề tài nghiên cứu này, tơi tiến hành phân lập chín loại nấm thuộc chi Ganoderma thu hái tự nhiên bán đảo Sơn Trà, thành phố Đà Nẵng, gồm: Ganoderma lucidum – M1, Ganoderma sessile – M2, Ganoderma annulare – M3, Ganoderma applanatum – M4, Ganoderma lobatum – M5, Ganoderma tornatum – M6, Ganoderma australe – M7, Ganoderma mastoporum – M8, Ganoderma rotumdatum – M9 Sau khảo sát thành phần dinh dưỡng, pH, tỷ lệ cấy giống, tuổi giống trung gian, để xây dựng quy trình công nghệ nhân giống dịch thể nấm hai cấp trung gian (cấp cấp 2) Sau khảo sát ba tác nhân khử trùng mẫu: nước cất, cồn 70% bổ sung kháng sinh chloramphenicol vào thành phần môi trường dinh dưỡng phân lập Kết nghiên cứu cho thấy: năm mẫu nấm M2, M5, M6, M8, M9 bị nhiễm ba công thức kể tiến hành thí nghiệm năm lần lặp lại; bốn lồi M1, M3, M4, M7 có khả phân lập, chạy hệ sợi tốt môi trường dinh dưỡng PGA bổ sung chloramphenicol Hệ sợi mẫu nấm phân lập mọc đều, mảnh sợi, có màu trắng phân nhánh tốt Tiến hành nghiên cứu xây dựng quy trình cơng nghệ nhân giống dịch thể, kết xác định hai thành phần môi trường dinh dưỡng hai cấp trung gian, độ pH, tỷ lệ cấy giống tuổi giống trung gian thích hợp để cấy chuyển Dựng đường cong sinh trưởng bốn mẫu M1, M3, M4, M7 để xác định giai đoạn thích nghi, pha tăng sinh pha cân hai cấp giống trung gian NHIỆM VỤ LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật – Đại học Đà Nẵng, toàn thể quý thầy, Khoa Cơng nghệ Hóa học – Mơi trường tạo điều kiện cho em tham gia, học tập, nghiên cứu Trường Trong suốt bốn năm học tập trường, hết, em thầy, cô giáo môn Công nghệ sinh học giảng dạy, truyền đạt cho em kiến thức chuyên ngành quan trọng giúp cho em đường rèn luyện nghề nghiệp Khơng có thành công mà không gắn liền với hỗ trợ, giúp đỡ, hướng dẫn thầy, cô Trong trình làm đồ án, em nhận nhiều giúp đỡ, hỗ trợ từ Trung tâm Công nghệ Sinh học Đà Nẵng Em xin chân thành cảm ơn cô, trung tâm tạo điều kiện cho em có hội thực đề tài Đặc biệt cảm ơn người hỗ trợ trực tiếp em chị Nguyễn Dương Thúy Hà – kỹ sư Trung tâm Cảm ơn Chị đưa lời khuyên, bảo tận tình, truyền đạt cho em nhiều kinh nghiệm, sai sót q trình em làm hồn thành đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đến thành viên đề tài B2021-DN06-01: “Nghiên cứu thành phần loài nấm lớn thuộc ngành Basidiomycota nhân giống đặc hữu Sơn Trà, Đà Nẵng” Đồng thời, cảm ơn anh Nguyễn Hữu Vinh – cán kiểm lâm Hạt kiểm lâm Sơn Trà chúng em đồng hành ngày thu thập mẫu nấm bán đảo Sơn Trà Cám ơn tập thể 18SU đồng hành với suốt bốn năm học tập Trường Các bạn hỗ trợ, chia sẻ khó khăn quãng đời sinh viên Và cuối cùng, em vô tri ân đến cô Trần Thị Phú – người trực tiếp hướng dẫn tận tình theo dõi sát đầy trách nhiệm Cảm ơn Cơ truyền đạt, dìu dắt, em động viên em suốt q trình em hồn thành nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn! CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đồ án: “Nghiên cứu q trình phát triển số giống nấm thuộc chi Ganoderma cơng nghệ nhân giống dịch thể” cơng trình nghiên cứu riêng thân tôi, hướng dẫn TS Trần Thị Phú Tôi xin cam đoan tất số liệu cơng trình tơi nghiên cứu, kết trình bày đồ án trung thực Sinh viên thực Nguyễn Thị Mỹ Hạnh MỤC LỤC NHẬN XÉT CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN NHẬN XÉT CỦA DOANH NGHIỆP NHẬN XÉT CỦA NGƯỜI PHẢN BIỆN TÓM TẮT NHIỆM VỤ LỜI CẢM ƠN CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH SÁCH CÁC BẢNG DANH SÁCH CÁC HÌNH VẼ DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài 1.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất giống nấm dịch thể .4 1.3 Giới thiệu loại nấm nghiên cứu .5 1.3.1 Ganoderma lucidum (Mẫu 1) 1.3.2 Ganoderma sessile (Mẫu 2) 1.3.3 Ganoderma annulare (Mẫu 3) .6 1.3.4 Ganoderma applanatum (Mẫu 4) 1.3.5 Ganoderma lobatum (Mẫu 5) 1.3.6 Ganoderma tornatum (Mẫu 6) .7 1.3.7 Ganoderma australe (Mẫu 7) .7 1.3.8 Ganoderma mastoporum (Mẫu 8) .8 1.3.9 Ganoderma rotumdatum (Mẫu 9) CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng – Vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.2 Hóa chất vật liệu 12 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 13 2.2 Phương pháp nghiên cứu 13 2.2.1 Phương pháp phân lập giống nấm gốc .13 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu xây dựng quy trình công nghệ nhân giống nấm dạng dịch thể cấp .14 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 17 3.1 Kết phân lập giống gốc từ thể mẫu nấm 17 Xây dựng quy trình cơng nghệ nhân giống nấm dạng dịch thể cấp 23 3.2.1 Xây dựng quy trình cơng nghệ nhân giống nấm cấp (dung tích 200ml) 23 3.2 3.2.2 Xây dựng quy trình cơng nghệ nhân giống nấm dạng dịch thể cấp (dung tích 500 - 1000ml) .34 KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 Nghiên cứu trình phát triển số giống nấm thuộc chi Ganoderma công nghệ nhân giống dịch thể Nấm Ganoderma annulare – M3 Đặc điểm KLC Hệ sợi xuất Hệ sợi xuất Hệ sợi sau sau Hệ sợi xuất xuất ngày cấy ngày cấy sau ngày cấy sau giống, tốc độ giống, tốc độ giống, tốc độ phát ngày cấy phát triển phát triển triển nhanh, mật độ giống, nhanh, mật độ nhanh, mật độ dày đặc, kích khuẩn lạc thưa, khuẩn lạc thưa, khuẩn lạc thước trung bình, trịn, trơn có kích thước to, đồng đều, khuẩn lạc có gai nhẵn, nhỏ trung bình, có có gai li ti gai Nấm Ganoderma applanatum – M4 Đặc điểm KLC Hệ sợi xuất sau ngày cấy giống, tốc độ phát triển nhanh, mật độ thưa, khuẩn lạc to, đồng Hệ sợi xuất sau ngày cấy giống, tốc độ phát triển nhanh, mật độ dày đặc, kích thước khuẩn lạc trung bình, khuẩn lạc có gai Hệ sợi xuất sau ngày cấy giống, khuẩn lạc nhỏ li ti, trịn, trơn nhẵn khơng có gai Nấm Ganoderma australe – M7 Đặc điểm KLC Khuẩn lạc trịn, có gai, kích thước trung bình Hệ sợi xuất sau ngày cấy giống, tốc độ phát triển nhanh, mật độ dày đặc, kích thước khuẩn lạc trung bình, khuẩn lạc có gai Khuẩn lạc trịn, trơn nhẵn, kích thước nhỏ li ti Tỷ lệ giống cấy chuyển thích hợp nhân giống mẫu nấm thuộc chi Ganoderma trung gian cấp dạng dịch thể – 8% so với thể tích Lựa chọn tỷ lệ để tiến hành thí nghiệm Sinh viên: Nguyễn Thị Mỹ Hạnh Giảng viên hướng dẫn: TS Trần Thị Phú 29 Nghiên cứu trình phát triển số giống nấm thuộc chi Ganoderma công nghệ nhân giống dịch thể 3.2.1.4 Xây dựng đường cong sinh trưởng mẫu giống nấm trung gian cấp môi trường dịch thể Sử dụng môi trường dinh dưỡng theo CT2, cấy giống với tỷ lệ 8% thể tích, pH mơi trường dinh dưỡng pH = 6,5 Nuôi điều kiện 25 – 27℃ Chế độ ni: ni lắc tốc độ 150 vịng/phút Xác định sinh khối, hình thái sợi thời điểm nuôi cấy: 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ, 120 giờ, 144 giờ, 168 giờ; vẽ đường cong sinh trưởng giống môi trường nuôi dưỡng dạng dịch thể Đường cong sinh trưởng bốn mẫu nấm nghiên cứu thể hình 3.12 Đường cong sinh trưởng bốn mẫu giống thuộc chi Ganoderma môi trường dịch thể trung gian cấp 1.60 Sinh khối sợi (g/100ml) 1.40 1.35 1.30 1.40 1.20 1.10 1.20 1.00 0.84 0.76 0.80 0.70 0.64 0.58 0.45 0.30 0.40 0.38 0.21 0.20 0.20 0.00 0.73 0.72 0.59 0.60 0.80 0.78 0.74 0.78 0.62 0.49 0.31 0.15 0.00 24 M1 48 72 M3 96 M4 120 144 168 M7 192 Thời gian (h) Hình 3.12 Đường cong sinh trưởng mẫu giống thuộc chi Ganoderma trung gian cấp mơi trường ni dưỡng CT2 dạng dịch thể Nhìn vào đường cong sinh trưởng giống nấm cho thấy: _ Giai đoạn thích nghi giống ngắn, xuất phát từ thời điểm cấy giống 24 sau cấy Ở giai đoạn này, hình thái kích thước hệ sợi nấm khơng có thay đổi nhiều, sinh khối sợi thấp Riêng mẫu M3 M7, giai đoạn sau 24 sau cấy chưa thấy xuất khuẩn lạc (số liệu Bảng 3.4) _ Giai đoạn tăng sinh kéo dài từ sau 24 đến hết 168 kể từ cấy giống: giai đoạn phát triển tối đa giống Hình thái hệ sợi thể rõ sinh lực giống giai đoạn sinh trưởng mạnh mẽ: hệ sợi phát triển đồng đều, kích thước khuẩn lạc cầu tăng nhanh chóng, xung quanh khuẩn lạc cầu xuất nhiều tua gai Trong giai đoạn này, khuẩn lạc vừa tăng lên số lượng lẫn kích thước Sinh viên: Nguyễn Thị Mỹ Hạnh Giảng viên hướng dẫn: TS Trần Thị Phú 30 Nghiên cứu trình phát triển số giống nấm thuộc chi Ganoderma công nghệ nhân giống dịch thể Bảng 3.4 Sinh khối sợi nấm trung gian cấp môi trường dịch thể Thời gian Chỉ tiêu 24h 48h 72h 96h 120h 144h 168h Mẫu Ganoderma lucidum - M1 SKS(g/100ml) 0.2 0.58 0.64 0.70 0.74 0.78 0.80 Kích thước KLC (mm) Nhỏ ly ty