BÁO CÁO TIẾN ĐỘ VÀ KẾT QUẢ QUÁ TRÌNH THÍ NGHIỆM GÂY BỆNH THỰC NGHIỆM

BÁO CÁO TI N Đ VÀ K T QU C A Q TRÌNH THÍ NGHI M GÂY B NH TH C NGHI M I.Đối tượng nghiên cứu Bệnh liên cầu khuẩn Streptococcus agalactiae cá rô phi Bệnh Edwardsiella ictaluri cá tra II.Quá trình th c nghi m: Ngày 06-05-2016: Chuẩn ḅ b̉ đ̉ chứa cá sau vận chuỷn cá trại Theo dõi cá, thay nước b̉ nước bẩn Ngùn nước đảm bảo lượng oxy đầy đủ Kỉm tra ḱ sinh tr̀ng vi khuẩn t̀ đàn ć trước b́ tŕ gây bệnh tḥc nghiệm Chủn ḅ b̉: Ngày 07-05-2016 : Mỗi nhóm có b̉ cho thí nghiệm, t́t phải śt tr̀ng b̀ng Chlorine ǹng đ̣ 200ppm, sau đ́ r̉a b̀ng xà ph̀ng phơi khơ ngồi tr̀i đ̉ bay hết lượng Chlorine c̀n x́t lại Cho nước vào b̉ th̉ tích khoảng 30 - 45 L/b̉, kh̉ nước b̀ng Chlorine ǹng đ̣ 10ppm, sục kh́ cho bay Chlorine cung ćp lượng Oxy hòa tan vào nước giúp cá giảm stress sau thả vào nuôi tḥc nghiệm (chỉ sục kh́ đ́i với b̉ cá rơ phi cịn b̉ cá tra khơng) B́ trí b̉ phịng có máy lạnh nhiệt đ̣ 280C thích hợp cho vi khuẩn Edwardsiella ictaluri phát trỉn đ̉ có kết gây bệnh xác nh́t b̉ b́ trí phòng với nhiệt đ̣ ph̀ng đ̉ gây bệnh chủng Streptococcus agalactiae Streptococcus agalactiae phát trỉn t́t nhiệt đ̣ mơi trừng cao Mỗi bên b́ trí ṃt b̉ đ́i chứng (không tiêm vi khuẩn gây bệnh) B́ trí b̉ nhiệt đ̣ phịng B́ trí b̉ phịng có máy lạnh Ngày 19-05-2016: Kết thúc q trình gây bệnh tḥc nghiệm 2.Gây b nh th c nghi m: b̀ng phương ph́p tiêm Ngày 10-05-2016: Tiến hành gây bệnh tḥc nhiệm: Trước tiến hành gây bệnh tḥc nghiệm phải chuẩn ḅ huyền phù vi khuẩn (do thầy chuẩn ḅ trước), mật đ̣ 107 CFU/ml Gây mê cho cá nuôi Với ǹng đ̣ khoảng 0,2- 0,5 ppt vào nước Cho tổng ś cá gây bệnh vào nước có bỏ thúc mê, sau cá mê nhẹ, tiến hành tiêm gây bệnh tḥc nghiệm Chuẩn ḅ sẵn ṃt xơ nước sục khí mạnh đ̉ giải mê cho cá sau gây mê Giải mê Dung ḍch gây mê Gây mê Thao tác gây bệnh tḥc nghiệm:  Hút huyền phù vi khuẩn vào ́ng tiêm, tránh có bọt khí ́ng tiêm + Bắt ć lên đ̉ cá ǹm bện trái, hút ĺy vi khuẩn t̀ huyền phù dung ḍch pha, có th̉ tiêm vào ṿ tŕ th̉ cá:  Tiêm vào khoảng cách t̀ hậu mơn đến ṿ trí tim  Tiêm vào khoảng tim hậu môn nhiên tiêm bên hông xoang bụng gần quan đừng bên Yêu cầu kĩ thuật thao tác này: - Tiêm ṃt lượng v̀a đủ so với trọng lượng cá + 0,1ml đ́i với cá tra + 0,1ml đ́i với cá rô phi - Tiêm vào tḥt cá tránh tiêm vào ṇi tạng dẫn đến tình trạng chết sau tiêm Khi mũi kim đâm nghiêng vào lớp da thành bụng khoảng 20-300 nh́ch mũi kim ṃt chút tiêm vi khuẩn vào Thao tác giúp vi khuẩn dễ dàng xâm nhập vào th̉ cá mà không làm tổn thương ṇi tạng Thao tác t́t xác tỉ lệ gây nhiễm 100% Sau thả ć ćc thành viên nh́m phân công quan sát theo dõi ś cá thả nuôi bỉu bệnh đặc trưng cá, tỷ lệ chết, Ś cá thả vào dần thích nghi với điều kiện nuôi b̉, giảm stress sau ngày thả ni Hình nh c a q trình thí nghi m: B̉ cá rô phi thả 24 /b̉ đ̉ nhiệt đ̣ phòng B̉ cá tra thả 20 con/b̉ đ̉ phòng máy lạnh 24/24h III.Theo dõi bỉu hi n c a đàn cá sau gây b nh: 1.Tri u chứng cá b nh: -Chiều ngày thả cá, ć rô phi ć tra chưa ć bỉu bệnh 1.1-Triệu chứng cá tra: -Bỉu bên ngồi: có xút huyết vây, da, mịn vây, Cá có bỉu bệnh t̀ ngày thứ ba, bơi l̀ đ̀ xung quanh thành b̉ -Bệnh tích bên trong: thận trước, ĺch, gan ć đ́m trắng nhỏ bề mặt, thận trước sưng to Gan nhạt màu Có nhiều đ́m trắng Thận trước sưng to, ć nhiều đ́m trắng nhỏ Thận trước sưng to, có nhiều đ́m trắng Lách nhạt màu, có nhiều đ́m trắng Gan sưng ŕt to, có nhiều đ́m trắng 1.2-Triệu chứng cá rơ phi: -Bỉu bên ngoài: bỉu xút huyết góc vây hậu mơn, mịn vây, xút huyết bụng, sưng mắt, võng mạt m̀ đục Cá có bỉu bệnh t̀ ngày thứ Bỉu bên trong: gan nhạt màu, ĺch sưng to Ĺch sưng to Gan nhạt màu Ḍch tích xoang bụng cá rơ phi IV.Th c hi n mẫu mô chấm mẫu mô ph t c cá tra cá rô phi nhu m gram vi khủn:  Đ̉ tiến hành làm mẫu mô ch́m mô phếch, ć gây bệnh t̀ 2-4 ngày Chọn cá có bỉu bệnh: l̀ đ̀, t́ch đàn, bơi ḍa vào thành b̉, cá làm mẫu mơ phải cịn śng v̀a chết khơng d̀ng ć ướp đ́ cho kết khơng xác o Mơ chấm : Cắt ṃt phần mô gan, thận, lách não (đ́i với cá rô phi) ch́m lên phần đầu lame, ch́m nhỏ dần phần cúi lame, đ̉ khô ṭ nhiên o Mô ph t: Cắt ṃt phần mô gan, thận, lách não (đ́i với cá rô phi) ch́m lên phần đầu lame, kéo hết phần chiều dài lame, đ̉ khô ṭ nhiên o Đối với phần ổ m : dùng kéo cắt phần da bao bên đ̉ phần mủ tràn ra, phết phần mủ lên lame, đ̉ khơ ṭ nhiên Hình ảnh: ĺy não cá rơ phi làm mẫu mơ phết mơ ch́m Hình ảnh cắt ĺt gan ć rô phi đ̉ làm mẫu mô ch́m mơ phết Hình ảnh: mẫu mơ ch́m gan cá rơ phi Hình ảnh: mẫu mơ ch́m gan cá tra Hình ảnh: mẫu mơ phết thận cá tra Hình ảnh: mẫu phết mơ não cá rơ phi *lưu Ủ: tiến hành ĺy mẫu mô phết mô ch́m, cần tḥc với thao tác nhanh nhẹn, tránh làm cho mẫu tích nhiều ḍch, khó quan sát o Nhu m gram:  Qui trình nhụm Gram: (tiến hành nhụm mẫu mô ch́m, mô phết cá tra cá rơ phi mà nhóm tḥc hiện) NGUYÊN T C Đ̉ mẫu khô ṭ nhiên, hơ ć đ̣nh l̉a đèn c̀n (3-4 giây) ↓ Nhụm Crystal Violet (30 giây) ↓ R̉a mẫu lại b̀ng nước ćt (5 giây) ↓ Nhụm Lugol (60 giây) ↓ R̉a mẫu lại b̀ng nước ćt (5 giây) ↓ Tẩy b̀ng c̀n (15-30 giây) ↓ R̉a mẫu lại b̀ng nước ćt (5 giây ↓ Nhụm Safranine (60-80 giây) ↓ R̉a nước ćt (5 giây), đ̉ khô ṭ nhiên Quan śt kính hỉn vi, vật kính x100 (có dầu kính) Dụng cụ: nhóm ṭ chuẩn ḅ, mượn phịng tḥc hành Hình ảnh qui trình nhụm: Mẫu mơ ch́m Mẫu mô phết Đ̉ mẫu khô ṭ nhiên, sau đ́ hơ ć đ̣nh l̉a đèn c̀n Nhụm Crystal Violet, đ̉ yên 30 giây R̉a lại b̀ng nước ćt NhụmLugol, đ̉ yên 60 giây sau đ́ r̉a lại b̀ng nước ćt Tẩy b̀ng c̀n 15 giây sau đ́ r̉a lại b̀ng nước ćt Nhụm Safranine, đ̉ yên 60 giây, r̉a lại b̀ng nước ćt Đ̉ khô ṭ nhiên tiến hành quan śt kính hỉn vi.(vật kính x100) Lưu Ủ: Trong q trình nhụm gram, ta nên tiến hành nhụm riêng mẫu cá tra cá rô phi nh́t thao tác r̉a b̀ng nước ćt ŕt dễ tạp nhiễm vi khuẩn lẫn Mẫu sau nhụm gram Quan sát (vật kính: 100)  Kết quan śt được:  Trên cá rô phi: sau ngày gây bệnh tḥc nghiệm Mô lách cá rơ phi: có ṣ diện vi khuẩn Streptococcus agalactiae Mẫu mô lách sau ngày gây bệnh Mẫu mơ não, có ṣ diện vi khuẩn ŕt nhiều Đúng với đặc trưng bệnh t́n công hệ thần kinh trước, mẫu sau ngày gây bệnh tḥc nghiệm Mẫu mô não cá rô phi  Trên cá tra: quan sát sau ngày gây bệnh tḥc nghiệm Mẫu lách cá tra: có ŕt nhiều vi khuẩn diện Hầu dày đặt, mẫu tḥc sau ngày gây bệnh tḥc nghiệm Mẫu gan cá tra Thận trước cá tra V.Tỷ l cá ch t tích lũy sau ngày gây b nh th c nghi m:  B ng theo d̃i cá Rô phi ch t: b̉ thả 24 Ś cá chết t́ch lũy Tỉ lệ cá chết t́ch lũy(%) Ngày Ś cá chết 11/05/2016 1 4.17 12/05/2016 25 13/05/2016 33.33 14/05/2016 13 54.17 15/05/2016 14 58.33 16/05/2016 15 62.5 17/05/2016 15 62.5 18/05/2016 15 62.5  V đồ tḥ: Bỉu đ̀ th̉ ś cá chết, ś cá chết t́ch lũy, tỷ lệ cá chết t́ch lũy cá rô phi ngày gây bệnh tḥc nghiệm Nhận xét: sau ngày gây bệnh tḥc nghiệm cho cá rô phi, ś cá chết chiếm 62.5%, lượng cá rô phi chết không đ̀ng ngày, cho ta th́y tác hại vi khuẩn streptococcus agalactiae lên cá rô phi ŕt lớn  B ng theo dõi cá tra ch t: b̉ 20 Ngày Ś cá chết Ś cá chết t́ch lũy Tỉ lệ cá chết t́ch lũy(%) 11/05/2016 0 12/05/2016 1 13/05/2016 10 14/05/2016 10 50 15/05/2016 14 70 16/05/2016 15 75 17/05/2016 17 85 18/05/2016 17 85  V đồ tḥ: Bỉu đ̀ th̉ ś cá chết, ś cá chết t́ch lũy, tỉ lệ cá chết t́ch lũy cá tra ngày gây bệnh tḥc nghiệm Nhận xét: sau ngày gây bệnh tḥc nghiệm cho cá tra, th́y ś cá chết chiếm 85% cao so với cá rô phi, lượng cá chết t̀ng ngày không nhau, th́y r̀ng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây tổn th́t ŕt lớn đ́i với nhà nuôi cá tra VI.K t lu n nh n xét: - Trong khoảng th̀i gian ngày gây bệnh tḥc nghiệm cho cá rô phi( vi khuẩn áp dụng Streptococcus agalactiae) cá tra ( vi khuẩn áp dụng Edwardsiella ictaluri) , nh́m chúng em rút kinh nghiệm tḥc tế quan sát cá bệnh có bỉu đặc trưng, ćch kỉm tra cá bệnh, ph́t hình dạng, ś lượng vi khuẩn diện t̀ng mẫu mô ć rô phi ć tra, đ̀ng th̀i qua tuần tḥc tập cung ćp cho nhóm biết cách gây bệnh, cách nhụm gram quan sát kính hỉn vi - Đ́i với t̀ng đ́i tượng mà có loại vi khuẩn xâm nhập, gây bệnh khác nhau, với bỉu kh́c nhau, môi trừng phát trỉn bệnh t̀ng đ́i tượng không gíng - Trong phạm vi thí nghiệm, b̉ nhỏ, ś lượng cá vi khuẩn có khả t́n cơng làm cá chết ŕt nhiều, t̀ đ́ ta suy ṛng tḥc tế, loài vi khuẩn gây tổn th́t nghiêm trọng cho bạn nhà nuôi + Đ́i với cá tra ++ Bỉu bên ngoài: ć bơi l̀ đ̀, hay t́p mé b̉, cá gầy ́m t̀ng ngày ++ Bỉu bên trong( chủ yếu) : gan, thận, ĺch ć đ́m trắng nhỏ li ti, có thận trước sưng ŕt to ++ Vi khuẩn: diện dày đặc mẫu gan, thận , lách , bắt màu gram âm( đỏ), hình que + Đ́i với cá rơ phi ++ Bỉu bên ngồi: cá l̀ đ̀, vài bơi xoay v̀ng, ḿt đ̣nh hướng, vớt lên quan sát th́y mắt cá m̀ đục, sưng,… ++ Bỉu bên trong: ḍch xoang bụng, gan nhạt, thận, ĺch sưng to, ++ Vi khuẩn: diện dày đặc mẫu gan, não,…, liên cầu khuẩn hình chuỗi, bắt màu gram dương( tím) *Những kh́ khăn nh́m chúng em gặp phải trình tḥc tập: - Khi tiến hành ĺy mẫu mô, không đ́nh d́u, ghi lên lame, khó xác đ̣nh mẫu quan đ́i tượng - Khi tiêm liều gây bệnh cho cá, bạn tiêm không liều, không quy cách - Vết phết hay ch́m q dày, khơng th̉ tẩy hết màu, khó quan sát - Th̀i gian tẩy không theo quy đ̣nh, lâu hay ngắn - Ć đ̣nh mẫu đèn c̀n lâu làm biến dạng tế bào *Đây hai bệnh gây thiệt hại nặng nề cho bà nông dân năm gần đây, nuôi lồi ć dễ cảm nhiễm này( tra rơ phi) phải áp dụng biện pháp phòng tṛ bệnh tổng hợp đ̉ hạn chế mầm bệnh, cịn phải ni m̀a vụ: cá tra tránh nuôi vào mùa lạnh, cá rô phi hạn chế ni vào mùa nóng, vi khuẩn dễ phát trỉn mạnh gây thiệt hại không mong mún THÀNH VIÊN NHÓM: Phan Tḥ Ngọc Trinh Cao Hoài Vạn Phát Nguyễn Phương Kim Ngân Huỳnh Tḥ Như Ý Đoàn Tḥ Phượng H̀ng Trần Hữu Từng Tṛnh Minh Tân Phùng Qúc Tún Nguyễn Tḥ Hợi 13116736 13116547 13116499 13116797 13116052 13116769 13116629 13116756 13116410 ... áp d? ??ng Streptococcus agalactiae) cá tra ( vi khuẩn áp d? ??ng Edwardsiella ictaluri) , nh́m chúng em rút kinh nghiệm tḥc tế quan sát cá bệnh có bỉu đặc trưng, ćch kỉm tra cá bệnh, ph́t hình d? ??ng,... khơng đ́nh d? ?u, ghi lên lame, khó xác đ̣nh mẫu quan đ́i tượng - Khi tiêm liều gây bệnh cho cá, bạn tiêm không liều, không quy cách - Vết phết hay ch́m d? ?y, không th̉ tẩy hết màu, khó quan sát -... ↓ R̉a nước ćt (5 giây), đ̉ khơ ṭ nhiên Quan śt kính hỉn vi, vật kính x100 (có d? ??u kính) D? ??ng cụ: nhóm ṭ chuẩn ḅ, mượn phịng tḥc hành Hình ảnh qui trình nhụm: Mẫu mô ch́m Mẫu mô phết