ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG VĂN CƯỜNG (Chủ biên) NGUYỄN HUY THUẦN GIÁO TRÌNH NGUYÊN LÝ KỸ THUẬT DI TRUYỀN (Dành cho sinh viên đại học ngành Cơng nghệ Sinh học) NHÀ XUẤT BẢN NƠNG NGHIỆP Hà Nội – 2017 MỤC LỤC ục lục���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������iii M Lời nói đầu����������������������������������������������������������������������������������������������������������������v Chương 1 TÁCH CHIẾT AXIT NUCLEIC 1.1 Tách chiết axit nucleic ��������������������������������������������������������������������������������������������������������� 1.2 Xác định nồng độ axit nucleic�������������������������������������������������������������������������������������������� 1.3 Điện di gel ��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 1.4 Lai phân tử��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 13 Chương 2 CẮT VÀ NỐI DNA 19 2.1 Cắt DNA enzyme giới hạn�������������������������������������������������������������������������������������� 19 2.2 Nối dna ligase������������������������������������������������������������������������������������������������������������26 2.3 Biến đổi đầu phân tử DNA ����������������������������������������������������������������������������������������������� 33 Chương 3 CÁC HỆ THỐNG VECTOR 39 3.1 Vector plasmid��������������������������������������������������������������������������������������������������������������������39 3.2 Vector dựa thực khuẩn thể lambda�������������������������������������������������������������������������47 3.3 Vector dựa thực khuẩn thể m13 ������������������������������������������������������������������������������55 3.4 Cosmid���������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������56 3.5 Vector biểu hiện������������������������������������������������������������������������������������������������������������������58 3.6 Vector dùng cho tế bào nhân chuẩn��������������������������������������������������������������������������������60 3.7 Siêu vector: YAC BAC���������������������������������������������������������������������������������������������������65 ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền iii trường đại học nông lâm thái nguyên Chương 4 KỸ THUẬT PCR 67 4.1 Nguyên lý����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 67 4.2 Các điều kiện phản ứng ��������������������������������������������������������������������������������������������� 71 4.3 Các thành phần phản ứng������������������������������������������������������������������������������ 74 4.4 Các dạng PCR cải biên�������������������������������������������������������������������������������������������������������77 Chương 5 TÁCH DÒNG GENE 83 5.1 Thư viện hệ gene �����������������������������������������������������������������������������������������������������������������83 5.2 Thư viện cDNA �������������������������������������������������������������������������������������������������������������������89 5.3 Chọn lọc dịng����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������97 Chương 6 GIẢI TRÌNH TỰ, PHÂN TÍCH GENE VÀ HỆ GENE 107 6.1 Giải trình tự gene������������������������������������������������������������������������������������������������������������� 107 6.2 Giải trình tự hệ gene�������������������������������������������������������������������������������������������������������� 114 6.3 Xác định gene thành phần hệ gene ��������������������������������������������������������������������120 6.4 Ứng dụng giải trình tự gene hệ gene nghiên cứu Metagenomics�������������122 Chương 7 PHÂN TÍCH BIẾN DỊ DI TRUYỀN 125 7.1 Phân loại biến dị���������������������������������������������������������������������������������������������������������������125 7.2 Nghiên cứu biến dị�����������������������������������������������������������������������������������������������������������127 Chương 8 BIỂU HIỆN PROTEIN TÁI TỔ HỢP 139 8.1 Các nhân tố ảnh hưởng đến biểu gene ����������������������������������������������������������� 140 8.2 Biểu gene vi khuẩn������������������������������������������������������������������������������������������������144 8.3 Biểu tế bào chủ nhân chuẩn ������������������������������������������������������������������������������� 152 8.4 Gắn chuỗi tín hiệu ���������������������������������������������������������������������������������������������156 8.5 Gây đột biến in vitro��������������������������������������������������������������������������������������������������������158 Chương 9 PHÂN TÍCH BIỂU HIỆN GENE 163 9.1 Phân tích phiên mã ���������������������������������������������������������������������������������������������������������� 163 9.2 So sánh transcriptome����������������������������������������������������������������������������������������������������� 171 9.3 Nghiên cứu promoter ������������������������������������������������������������������������������������������������������ 178 9.4 Phân tích dịch mã ������������������������������������������������������������������������������������������������������������ 185 THUẬT NGỮ CHUYÊN NGÀNH 189 Tài liệu tham khảo��������������������������������������������������������������������������������������������� 201 iv MỤC LỤC LỜI NÓI ĐẦU C uốn sách “Nguyên lý Kỹ thuật di truyền” biên soạn cho sinh viên hệ đại học ngành Công nghệ Sinh học Theo khung chương trình đào tạo ngành Cơng nghệ Sinh học số trường đại học, nhóm tác giả đặt sách vào trục dọc gồm ba học phần có tính chất nối tiếp liên tục, bao gồm Di truyền học đại cương, Sinh học phân tử Kỹ thuật di truyền Với tư sở tham khảo số sách Kỹ thuật di truyền giới, nhóm tác giả đưa nội dung giáo trình thẳng vào khối kiến thức mang tính chất tảng tư nguyên lý thao tác với axit nucleic công nghệ DNA tái tổ hợp Giáo trình gồm chương với nội dung sau: • Chương 1: Tách chiết axit nucleic • Chương 2: Cắt nối DNA • Chương 3: Các hệ thống vector • Chương 4: Kỹ thuật PCR • Chương 5: Tách dịng gene • Chương 6: Giải trình tự, phân tích gene hệ gene • Chương 7: Phân tích biến dị di truyền • Chương 8: Biểu protein tái tổ hợp • Chương 9: Phân tích biểu gene TS Dương Văn Cường chủ biên, biên soạn chương 1–5, 7–9 hiệu đính TS Nguyễn Huy Thuần tham gia biên soạn chương phần Thuật ngữ chuyên ngành ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền v trường đại học nông lâm thái nguyên Giáo trình sử dụng làm tài liệu tham khảo cho nhà nghiên cứu, giáo viên phổ thông trung học giảng dạy môn Sinh học, sinh viên, học viên cao học ngành liên quan đến Công nghệ Sinh học, bao gồm: Cử nhân Sinh học, Sư phạm Sinh học, Y dược, Nông nghiệp, Lâm nghiệp… Lần đầu xuất giáo trình khơng tránh khỏi thiếu sót Nhóm tác giả chân thành cảm ơn mong muốn nhận góp ý độc giả để sách hoàn thiện lần tái Ý kiến đóng góp xin gửi địa thư điện tử duongvc@gmail.com Các tác giả vi ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền Chương 1 TÁCH CHIẾT AXIT NUCLEIC Đ ể bắt đầu thí nghiệm kỹ thuật di truyền, việc phải thu vật liệu di truyền, DNA RNA, để làm nguyên liệu Các kỹ thuật đại làm cho công việc trở nên đơn giản so với trước Trong chương này, trước hết xem xét nguyên lý tảng phương pháp tách chiết tinh axit nucleic Tiếp theo, ta tìm hiểu phương án dùng để tách riêng loại DNA Sau tách chiết, cần phải đánh giá chất lượng DNA thu theo tiêu chí hàm lượng, độ tinh khiết độ nguyên vẹn Các tiêu chí đánh giá phương pháp đo quang phổ kết hợp với điện di Phần cuối chương mô tả tượng DNA gồm biến tính hồi tính, đồng thời thảo luận nguyên lý tượng ứng dụng phản ứng lai phân tử 1.1 TÁCH CHIẾT AXIT NUCLEIC Bước hầu hết thí nghiệm kỹ thuật di truyền thu nhận axit nucleic (DNA RNA) từ tế bào Quá trình bao gồm bốn bước sau: • Phá vỡ tế bào • Loại bỏ thành phần khác tế bào • Thu nhận axit nucleic • Tinh Ngồi việc làm để phân tách DNA RNA khỏi nhau, nhà nghiên cứu phải phân biệt hai loại DNA phổ biến cần tách chiết cho loại không lẫn vào loại kia, hệ gene plasmid DNA hệ gene bao gồm toàn DNA tế bào bao gồm ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền trường đại học nông lâm thái nguyên DNA nhiễm sắc thể nhân, DNA bào quan ti thể, lạp thể Đặc điểm DNA hệ gene kích thước lớn Plasmid yếu tố di truyền nhân có vi khuẩn Chúng phân tử DNA dạng vịng, mạch kép với kích thước nhỏ nhiều so với DNA hệ gene Chúng có khả tự chép độc lập mà không phụ thuộc vào chép DNA nhân Trong thực nghiệm, tách chiết plasmid công việc tiến hành hàng ngày phịng thí nghiệm sinh học phân tử DNA phage toàn hệ gene phage xâm nhiễm vi khuẩn Trong nghiên cứu virus điều cần thiết tách chiết riêng rẽ hệ gene nhỏ bé virus khỏi lượng DNA khổng lồ vật chủ 1.1.1 PHÁ VỠ TẾ BÀO VÀ MƠ Mặc dù có nhiều phương pháp tách chiết axit nucleic chúng có chung nguyên lý Đầu tiên, người ta cần có vật liệu khởi đầu Chất lượng vật liệu khởi đầu có ý nghĩa định tới thành công hay thất bại thí nghiệm Dạng vật liệu khởi đầu thường gặp dịch nuôi cấy tế bào vi khuẩn hay tế bào nhân chuẩn Sinh khối tế bào thu nhận tách riêng khỏi môi trường nuôi cấy cách dễ dàng ly tâm Dạng vật liệu khởi đầu thứ hai mẫu mô phức tạp sinh vật bậc cao Đối với dạng trước hết mẫu cần đồng hóa Cho dù loại vật liệu tốt nên thu mẫu nhanh chóng, bảo quản nhiệt độ thấp cần sử dụng Tiếp theo, tế bào cần phá vỡ để giải phóng thành phần nội bào Các phương pháp phá vỡ tế bào phân chia thành nhóm học hóa học Tùy thuộc loại tế bào mà phương pháp phù hợp lựa chọn Đối với vi khuẩn, thành tế bào chúng bị làm yếu lysozyme, acid ethylenediamine tetraacetic (EDTA) kết hợp hai Lysozyme enzyme có lịng trắng trứng nước mắt có tác dụng phân hủy hợp chất polymer cấu tạo nên thành tế bào vi khuẩn EDTA có tác dụng loại bỏ ion Mg2+ nhân tố thiết yếu việc trì tính ổn định tổng thể vỏ tế bào vi khuẩn Một vai trò EDTA ức chế hoạt động DNase để bảo vệ DNA khỏi phân huỷ enzyme Trong số điều kiện, xử lý tế bào vi khuẩn lysozyme EDTA đủ để phá vỡ lớp vỏ chúng, thông thường loại chất tẩy rửa sodium dodecyl sulphate (SDS) bổ sung Chất tẩy rửa có tác dụng hồ tan lớp lipid màng Tế bào thực vật có thành (vách) cấu tạo từ cellulose nên có cấu trúc vững vi khuẩn chúng cần xử lý lực học Quy trình phổ biến áp dụng trường hợp cần tách axit nucleic từ mô thực vật nghiền nitrogen lỏng Tế bào động vật khơng có thành tế bào nên cần xử lý chất tẩy nhẹ Sau phá vỡ tế bào ta thu hỗn hợp thành phần nội bào bao gồm DNA, RNA, protein, lipid đường Cần lưu ý việc phá vỡ tế bào cách đột ngột thường làm cho DNA nhiễm sắc thể bị đứt gãy Riêng trường hợp nhiễm sắc thể vi khuẩn có dạng vịng tự nhiên bị đứt gãy thành đoạn mạch thẳng ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền trường đại học nơng lâm thái ngun Nếu mục đích thí nghiệm cần có DNA lớn, chí ngun vẹn, cần áp dụng biện pháp ly giải tế bào nhẹ nhàng Tuy nhiên, thật may mắn plasmid vi khuẩn thu nhận dễ dàng dạng vòng nguyên vẹn điều kiện ly giải tế bào tiêu chuẩn Bước quy trình có nhiệm vụ phân tách loại axit nucleic cần thiết khỏi thành phần khác 1.1.2 LOẠI BỎ CÁC THÀNH PHẦN KHÁC 1.1.2.1 Xử lý enzyme Việc loại bỏ RNA khỏi mẫu DNA thực tương đối đơn giản cách xử lý với ribonuclease (RNase) Bởi RNase loại enzyme bền nhiệt nên dễ để đảm bảo dung dịch không bị lẫn DNase, enzyme không bền nhiệt có tác dụng phân hủy DNA, cách xử lý với nhiệt độ cao trước sử dụng Ngược lại, việc loại bỏ DNA khỏi mẫu RNA khó khăn cần có enzyme DNase hồn tồn khơng bị lẫn RNase RNase có nhiều đầu ngón tay người dễ nhiễm vào dung dịch bám vào dụng cụ thí nghiệm Hiện nay, nhà nghiên cứu mua enzyme RNase tinh khiết không lẫn DNase ngược lại, DNase tinh khiết khơng lẫn RNase, cơng việc thí nghiệm dễ dàng Tạp nhiễm protein loại bỏ loại enzyme phân giải protein, ví dụ Proteinase K Những bước xử lý áp dụng tùy theo yêu cầu thí nghiệm Trong số quy trình tách chiết bỏ qua hay số bước kể tạp nhiễm thành phần khác không ảnh hưởng đến mục tiêu cụ thể mà mẫu sử dụng, tạp nhiễm đằng bị loại bỏ tiến hành bước quy trình 1.1.2.2 Phân tách Phenol-Chloroform Việc loại bỏ protein có ý nghĩa quan trọng tế bào có nhiều loại enzyme phân hủy axit nucleic Một vấn đề có protein có khả bám vào DNA gây ảnh hưởng không tốt DNA sử dụng làm mẫu cho thí nghiệm Phương pháp cổ điển đến sử dụng rộng rãi để loại bỏ protein tách chiết phenol lỏng Một cách khác ưu chuộng tách chiết với hỗn hợp phenol chloroform Hình 1.1 Tách chiết DNA phenol Chương 1 TÁCH CHIẾT AXIT NUCLEIC trường đại học nông lâm thái nguyên Phenol chloroform không tan nước, bổ sung vào dịch nuôi tế bào làm cho dịch chia thành lớp (pha) Hỗn hợp ly tâm tốc độ cao để phân tách lớp hình 1.1 Protein bị kết tủa nằm pha Nếu dung dịch có pH trung tính DNA RNA hịa tan nằm pha lỏng phía Ngược lại, điều kiện pH acid DNA nằm lại pha hữu tạo điều kiện dễ dàng cho nhà nghiên cứu thu nhận RNA nằm pha lỏng Tính chất tự nhiên phenol tính acid, sử dụng phenol với nước hay với dung dịch đệm acid cung cấp điều kiện phù hợp với mục đích tách chiết DNA Lưu ý: Phenol chất độc hấp thụ qua da, tiến hành thí nghiệm phải đeo găng tay bảo vệ Phenol chloroform chất độc bay tác động lên hệ thần kinh thơng qua hơ hấp, thao tác phải thực tủ hút khí độc 1.1.3 CÔ ĐẶC DỊCH CHIẾT Kết thúc bước chiết phenol thu mẫu axit nucleic protein bị loại bỏ Tuy nhiên, nồng độ axit nucleic thu thấp cịn cịn sót lại phenol-chloroform mẫu Sự có mặt phenol làm biến tính enzyme bước Để giải hai vấn đề này, axit nucleic cần kết tủa tinh Việc thực chất alcohol, phổ biến cồn isopropanol, với có mặt cation hóa trị (Na+, K+, hay NH4+) Axit nucleic bị kết tủa thu lại ly tâm Một số muối lẫn dung dịch kết tủa theo loại bỏ cách rửa với cồn 70% Có nhiều quy trình kết tủa DNA alcohol khác phụ thuộc vào chất axit nucleic cần kết tủa DNA có khối lượng phân tử thấp khó kết tủa nhiều Đây điểm cần lưu ý cần tách chiết phân đoạn DNA nhỏ Hình 1.2 Kết tủa DNA cồn 1.1.4 TINH SẠCH QUA CỘT Một số thí nghiệm giải trình tự gene cần nguồn DNA có độ tinh khiết cao Tinh qua cột cách làm phổ biến để đáp ứng yêu cầu Có hai loại cột tinh sử dụng thường xuyên bao gồm: ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền trường đại học nông lâm thái nguyên Sau điện di gel hai chiều thu mơ hình chấm Có thể so sánh mơ hình mẫu khác để xác định protein có chủng mà không chủng khác, hay protein biểu khác biệt theo biến đổi điều kiện môi trường hay pha phát triển Cần thực đối chứng cẩn thận nhằm tạo so sánh đáng tin cậy Cũng cần ý protein tồn vị trí khác gel 2D, ví dụ kết biến đổi sau dịch mã khác 9.4.4 PROTEOMICS Không tập trung vào số giới hạn chấm định gel 2D, bạn muốn xác định hồ sơ tồn protein sinh vật quan tâm tạo ra, điều kiện xác định Sự khác biệt tương tự so sánh nghiên cứu gene giải trình tự hệ gene Hồ sơ biểu protein gọi proteome (tương ứng với genome), nghiên cứu phổ protein tạo gọi proteomics Cần nhấn mạnh hệ gene sinh vật thực thể cố định (chỉ biến đổi chút ít), hồ sơ biểu protein khác theo yếu tố điều kiện phát triển hay biệt hóa tế bào Cách thường dùng để xác định proteome cố gắng xác định toàn chấm gel protein 2D Cách tốt để xác định mô tả protein, dạng tinh theo truyền thống hay chấm gel 2D, giải trình tự Kỹ thuật giải trình tự protein có tiến rõ rệt nên sử dụng kỹ thuật vi giải trình tự để thu trình tự protein từ chấm riêng biệt Tuy nhiên, cách nặng nề phải xác định toàn chấm gel protein 2D May mắn biết trình tự hệ gene, sử dụng phương pháp nhanh Ví dụ, tách protein từ gel ly giải chúng enzyme thủy phân protein Những enzyme cắt protein vị trí đặc hiệu xác định dựa trình tự amino acid Điều tạo tập hợp peptide Có thể dễ dàng xác định khối lượng phân tử xác peptide hỗn hợp phương pháp khối phổ Từ trình tự hệ gene, tiên đốn trình tự tồn protein tiềm tàng, từ thơng tin tiên đốn kích thước tồn peptide tạo từ protein (khi biết tính đặc hiệu cắt protease) Sau dùng máy tính để so sánh kích thước peptide thu với peptide tồn từ protein tiên đốn—và xác định protein Dẫu vậy, phương pháp tốn thời gian phải thu hồi chấm từ gel tay Với proteomics quy mơ lớn, sử dụng thiết bị tự động với khả nhận biết chấm gel, cắt riêng chấm thực khối phổ Điều mang lại cách xác định protein hiệu cao xác định tồn proteome Nếu khơng biết trình tự hệ gene, dạng khối phổ khác có khả xác định phần trình tự amino acid protein Sau sử dụng thơng tin để tiên đốn phần trình tự DNA gene tương ứng Từ kết tiên đốn thiết kế mẫu dò axit nucleic nhằm thu gene từ thư viện gene (xem chương 5) 188 ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền THUẬT NGỮ CHUYÊN NGÀNH A Avidin: protein có lực mạnh với biotin sử dụng hệ thống phát mẫu dò đánh dấu biotin B Bản đồ giới hạn (restriction map): dùng để xác định vị trí điểm khác phân tử DNA vốn nhận biết enzyme giới hạn Bản đồ vật lý (physical map): đồ hệ gene plasmid khoảng cách hai điểm riêng biệt Ví dụ, điểm nhận biết enzyme giới hạn người ta gọi đồ giới hạn Bắn gene (gene shooting): phương pháp chuyển gene lạ vào tế bào nhờ sử dụng “viên đạn” bao bọc DNA di chuyển với tốc độ cao Bắt cặp (annealing): bắt cặp đoạn nucleotide với trình tự bổ sung phân tử DNA mạch đơn đơn trình lai (hybridization) Bất hoạt gene (gene replacement, gene knockout): bất hoạt gene nằm nhiễm sắc thể thông qua kỹ thuật tái tổ hợp đồng dạng Beta-galactosidase (β-Galactosidase): enzyme phân cắt lactose thành glucose galactose Bước trình lên men lactose Beta-lactamase (β-Lactamase): enzyme thủy phân liên kết β-lactam nhân phân tử penicillins cephalosporins, liên quan tới tính kháng penicillin Biến nạp (transformation): việc đưa gene ngoại lai vào tế bào vi khuẩn khả biến Trong số trường hợp, có nghĩa chuyển hố tế bào động vật thành dạng giống khối u, bất động ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền 189 trường đại học nông lâm thái nguyên Biotin: thuộc loại vitamin B, tan nước, dùng để gắn với dUTP sử dụng làm tác nhân đánh dấu DNA phi phóng xạ BLAST: thuật tốn sử dụng để nghiên cứu tính tương đồng phân tử DNA protein với C Capsid: có chất protein, cấu trúc vỏ bao bọc lấy DNA RNA virus thể thực khuẩn Cassette: trình tự DNA bao gồm thành phần: promoter – vị trí gắn ribosome (ribosome binding site) – trình tự nhận biết cho enzyme giới hạn – trình tự kết thúc (hoặc vật chủ sinh vật nhân chuẩn ta có, promoter – trình tự nhận biết cho enzyme giới hạn – trình tự polyadenyl hóa) Trình tự DNA chèn vào vector biểu (expression vector) Khi tách dòng, gene ngoại lai chèn vào trình tự nhận biết enzyme giới hạn Do đó, nằm điều khiển tín hiệu biểu thao tác di truyền cách dễ dàng Cảm ứng (induction): (1) gia tăng sinh tổng hợp sản phẩm gene tế bào nhờ việc bổ sung chất đặc hiệu vào môi trường nuôi cấy thay đổi điều kiện nhiệt độ; (2) việc áp dụng biện pháp xử lý với tế bào ly giải để làm vỡ tế bào, kết thể thực khuẩn xâm nhập vào chu trình ly giải; (3) sử dụng để tác động số yếu tố gây đột biến tia X hoá chất Cải biến (modification): phương thức làm biến đổi cấu trúc DNA (thường methyl hố số nhóm chức đặc hiệu) giúp bảo vệ phân tử khỏi tác động phân cắt enzyme giới hạn Cây phát sinh di truyền phân tử (phylogenetic tree): phân loại cho biết mối quan hệ tiến hoá loài loài dựa tương đồng trình tự axit nucleic amino acid so sánh Chaperone: protein gây ảnh hưởng tới cấu trúc cuộn xoắn protein khác chí tác động đến tập hợp cấu trúc phức tạp mà có liên quan Chimera: (1) phân tử DNA tái tổ hợp tạo từ mảnh DNA nhiều thể (2) sản phẩm q trình tách dịng sử dụng tế bào phơi gốc: lồi động vật tạo nên từ hỗn hợp tế bào có kiểu gene khác Chloramphenicol acetyltransferase (CAT): enzyme xúc tác cho acetyl hóa chloramphenicol, gây biến đổi tính chất nên giúp sinh vật kháng lại với kháng sinh Chromatin: tổ hợp DNA protein, gọi chất nhiễm sắc Cistron: vùng DNA cụ thể mang thơng tin mã hố cho đoạn polypeptide Contig: trình tự DNA tạo nên từ số đoạn DNA ngắn vốn có đầu tận trùng lặp phát trình giải trình tự gene theo phương pháp shotgun 190 ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền trường đại học nơng lâm thái ngun Cosmid: dạng plasmid có chứa vị trí cos thể thực khuẩn λ Sau đưa vào cosmid đoạn gene kích thước lớn, tái tổ hợp trở thành đối tượng thao tác kỹ thuật đóng gói in vitro Cơng nghệ sinh học (biotechnology): việc sử dụng trình sinh học, sinh vật hệ thống sinh vật để tạo sản phẩm phục vụ đời sống người Cổ di truyền học người (archaeogenetics): việc phân tích liệu DNA để nghiên cứu mối liên hệ loài người khứ D Dịch chiết tế bào (cell extract): sản phẩm có chứa xác dịch nội mơ, thu sau phá vỡ tế bào tác nhân vật lý hóa học Dịch chiết (cleared lysate): dịch chiết tế bào thu sau đem ly tâm để loại bỏ chất lơ lửng, xác tế bào DNA tổ tiên (ancient DNA): gọi DNA cổ, vật liệu di truyền DNA bảo tồn mẫu hoá thạch mẫu vật khảo cổ Domain: vùng phân tử protein có cấu trúc đặc trưng, domain phân tử protein nối với trình tự amino acid Dịng (clone): quần thể tế bào giống hệt chúng mangcùng loại phân tử DNA tái tổ hợp Đ Đa hình độ dài đoạn giới hạn (restriction-fragment length polymorphism (RFLP)): sai khác kích thước đoạn DNA (bị cắt enzyme giới hạn) chủng khác lồi Do đó, kỹ thuật sử dụng để đánh giá đa dạng di truyền chủng để xác định vị trí gene cụ thể Đánh dấu phóng xạ (radiolabling): phương pháp đánh dấu phân tử cách sử dụng chất phóng xạ phát chúng phim nhạy cảm với tia X Đầu (blunt end): đầu phân tử DNA mạch kép có nucleotide tận Đầu tận 3’ (3’ terminus): hai đầu tận chuỗi polynucleotide, mang nhóm hydroxyl gắn với nguyên tử carbon vị trí 3’ (C-3’) phân tử đường Đầu tận 5’ (5’ terminus): hai đầu tận chuỗi polynucleotide, mang nhóm phosphate gắn với nguyên tử carbon vị trí 5’ (C-5’) phân tử đường Đầu tương thích (adaptor): đoạn nucleotide (oligonucleotide) chuỗi kép, tổng hợp nhân tạo, sử dụng để gắn đầu so le (sticky end) với phân tử đầu (blunt-ended molecule) Điểm đa tách dòng (multiple cloning site): đoạn ngắn vector mang trình tự nucleotide đặc trưng đích nhận biết số enzyme giới hạn, điểm để chèn gene vào vector tạo tái tổ hợp THUẬT NGỮ CHUYÊN NGÀNH 191 trường đại học nông lâm thái nguyên Điểm khởi đầu chép (origin of replication): vị trí nhiễm sắc thể plasmid mà bắt đầu diễn tái Thơng thường, sử dụng để tính vùng liền kề cần thiết cho khởi đầu tái Điện di (electrophoresis): phân tách đoạn DNA với (có thể RNA protein) cách đặt chúng gel agarose acrylamide với hiệu điện thích hợp Lực điện trường di chuyển phân tử tạo thành băng, dải kích thước khác Điều hoà phản ứng (response regulator (RR)): phận hệ thống điều hoà hai thành phần vốn gắn với DNA điều khiển bật/tắt phiên mã gene Đoạn Okazaki (okazaki fragment): đoạn DNA ngắn sinh trình tái sợi theo (bổ sung với sợi khuôn) Đọc sửa (proofreading): khả phân tử DNA polymerase cho phép kiểm tra xác trình tự DNA tổng hợp Đồng dạng (orthologue): khái niệm gene enzyme có trình tự chức tương đương nhau, tiến hoá từ tổ tiên chung Đột biến dịch khung (frameshift mutation): đột biến gây chèn nucleotide dẫn đến thay đổi khung đọc trình tổng hợp protein Đột biến điểm (point mutation): thay (chèn) nucleotide xảy phân tử DNA Đột biến tự dưỡng (auxotroph): thể vi sinh vật bị đột biến Nó mọc mơi trường có bổ sung thêm chất dinh dưỡng tương ứng với thành phần bị khuyết mạng lưới trao đổi chất, gene bị đột biến nên vi sinh vật không tự tổng hợp chất cần cung cấp Đột biến vô nghĩa (nonsense mutation): thay nucleotide để tạo mã kết thúc (stop codon) bên trình tự mã hố, làm ngừng dịch mã sớm so với gene bố mẹ (chưa bị đột biến) E Endonuclease giới hạn (restriction endonuclease): enzyme nhận biết DNA vị trí đặc hiệu cắt Hầu hết enzyme giới hạn thuộc loại II, có khả cắt bên điểm nhận biết Exon: trình tự mã hố cho gene cụ thể, thuật ngữ sử dụng để phân biệt với intron trình tự vơ nghĩa (khơng mã hoá) G Gene cấu trúc (structural genes): gene mã hoá cho enzyme cụ thể (hoặc protein), khác với gene điều hồ Gene thị (reporter gene): gene mã hoá cho sản phẩm mà nhận biết cách dễ dàng (ví dụ β-galactosidase); nghiên cứu vùng điều hồ DNA trở nên dễ dàng dung hợp với gene điều hồ 192 ©2017 Ngun lý kỹ thuật di truyền trường đại học nông lâm thái nguyên Genome: toàn vật chất di truyền sinh vật Giải trình tự shotgun (shotgun sequencing): kỹ thuật xác định trình tự genome cách giải trình tự đoạn ngẫu nhiên sử dụng máy tính để ráp nối đoạn với dựa việc nhận biết đầu trùng lặp Giải trình tự theo phương pháp Sanger (Sanger sequencing): phương pháp cho phép xác định trình tự gene nhờ sử dụng dideoxynucleotide làm chất ức chế Gyrase: loại enzyme topoisomerase đặc biệt, có tác dụng xúc tác đưa sợi siêu xoắn âm để tạo sợi kép DNA H Helicase: enzyme tháo xoắn DNA, ví dụ tham gia vào chuyển plasmid tiếp hợp Hệ gen học so sánh (comparative genomics): phương pháp nghiên cứu sử dụng thông tin thu từ nghiên cứu hệ gene để suy luận vị trí chức gene hệ gene cịn lại Hệ thống dịch mã vơ bào (cell-free translation system): dịch chiết tế bào có chứa thành phần cần thiết cho sinh tổng hợp protein (ví dụ, tiểu đơn vị ribosome, tRNA, amino acid, enzymes cofactor) có khả dịch mã có mặt phân tử mRNA Hiện tượng đa hình (polymorphism): tồn phát triển song song nhiều dạng khác đặc tính định quần thể (ví dụ kiểu hình tóc, da tộc người) Trước đây, khái niệm hay áp dụng cho tính trạng kiểu hình thường sử dụng sinh học phân tử đa hình đoạn cắt giới hạn đa hình trình tự Hợp chất trao đổi thứ cấp (secondary metabolite): chất sản xuất thực vật, vi sinh vật, v.v kháng sinh, chất đối kháng diệt nấm, virus, ung thư, vv Nó tổng hợp từ tiền chất chất trao đổi sơ cấp Hộp Pribnow (Pribnow box): trình tự bảo thủ nằm promoter, nằm vị trí -10 tính từ điểm khởi đầu phiên mã (có vị trí quy ước 0) Hộp T (T box): vùng điều khiển mRNA có chức phát có mặt tRNA khơng vận chuyển (amino acid) I IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside): dẫn xuất đường lactose, chất tác động lên phiên mã operon lac Do đó, IPTG sử dụng để kích thích biểu protein gene mã hóa (cho protein này) nằm điều khiển operon lac K Kẹp tóc (hairpin): đoạn DNA RNA có chứa trình tự lặp lại đảo ngược ngắn, tạo nên cấu trúc sợi kép giống kẹp tóc THUẬT NGỮ CHUN NGÀNH 193 trường đại học nơng lâm thái nguyên Khung đọc mở (open reading frame): trình tự axit nucleic có khung đọc khơng chứa mã kết thúc, có tiềm dịch mã thành polypeptide Kiểu gene (genotype): toàn trạng thái gene, allen sinh vật Kiểu hình (phenotype): đặc điểm (tính trạng) thể bên ngồi sinh vật, quan sát Kinase: enzyme phosphoryl hóa Kỹ thuật đóng gói in vitro: kỹ thuật tạo tập hợp thể thực khuẩn hoàn chỉnh cách trộn phân tử DNA với hỗn dịch chiết tế bào có chứa phân tử đầu đuôi thể thực khuẩn với enzyme xúc tác đóng gói cần thiết Kỵ nước (hydrophobic): tính chất chất hóa học khơng tan, không tương tác với nước L LacI: chất ức chế operon lac Lây nhiễm (transfection): việc đưa DNA thể thực khuẩn vào vi khuẩn khả biến Liệu pháp phage (phage therapy): phương pháp sử dụng thể thực khuẩn để điều trị nhiễm khuẩn Ligase: có chức hàn (gắn) lỗ thủng (nick) sợi đơn chuỗi sợi kép DNA Enzyme sử dụng thao tác di truyền để tạo DNA tái tổ hợp Luciferase: lớp enzyme oxy hóa xúc tác tạo thành ánh sáng huỳnh quang sinh học Enzyme sử dụng làm tác nhân thị (reporter) phản ứng sinh hoá để phát chất cụ thể M Mã kết thúc (stop codon): trình tự ba (codon) khơng mã cho tRNA nào, tín hiệu kết thúc vùng dịch mã Mã khởi đầu (start codon): ví dụ AUG GUG nằm vị trí khởi đầu tổng hợp protein Mật độ Buoyant (Buoyant density): loại mật độ phân tử hoăc tiểu phần tạo đặt dung dich muối đường Mẫu dò (probe): phân tử DNA RNA sử dụng để lai với trình tự đích Đánh dấu mẫu dị (thường với chất phóng xạ phi phóng xạ) cho phép nhận biết trình tự đích Motif: đoạn amino acid nucleotide ngắn, có trình tự bảo thủ phân tử protein gene khác mã hoá chức tương tự Mồi (primer): đoạn ngắn DNA tổng hợp nhân tạo, có trình tự bổ sung với mạch DNA cần nhân bản, sử dụng để tổng hợp đoạn gene định phản ứng PCR N Nalidixic acid: kháng sinh tác động lên enzyme DNA gyrase 194 ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền trường đại học nông lâm thái nguyên Nguyên tắc bổ sung (complementary): cách tổ chức xếp hai mạch đơn polynucleotide có nucleotide đối thành cặp tạo nên sợi kép Nhân tố sigma (δ-factor, sigma factor): thành phần gắn kết lỏng lẻo với RNA polymerase, liên quan tới tính đặc hiệu promoter Nhận diện trình tự đa locus (multilocus sequence typing (MLST)): khác biệt chủng phân tích trình tự số gene từ phần khác nhiễm sắc thể Nhiễm sắc thể (chromosome): cấu trúc tạo nên từ DNA protein, mang hệ gene nhân sinh vật nhân chuẩn Trong đó, sinh vật nhân sơ (tiền nhân) nhiễm sắc thể sợi DNA, khơng có chứa protein Nhiễm sắc thể vi khuẩn nhân tạo (artificial chromosome): vector tách dịng chế tạo dựa plasmid F, sử dụng để tách dòng đoạn DNA tương đối lớn vi khuẩn Escherichia coli Nuôi cấy kiểu batch (batch culture): kiểu nuôi cấy vi khuẩn sử dụng mơi trường dạng lỏng bình kín mà khơng có bổ sung chiết yếu tố suốt q trình ni O Operator: điều hòa gen đoạn DNA xem vị trí đích, gắn bám protein ức chế gây ngừng biểu gene liên quan Operator thương tìm thấy nằm gần trùng lặp với promoter Operon: nhóm gene liên tục phiên mã thành mRNA từ promoter chung đối tượng cảm ứng ức chế đồng P PCR định lượng (quantitative PCR real-time PCR): kỹ thuật PCR cho phép xác định khuếch đại sản phẩm phản ứng xảy ra, hữu ích để định lượng sản phẩm phản ứng PCR Chú ý không nhầm lẫn phản ứng với PCR sử dụng enzyme phiên mã ngược hay RT-PCR PCR phiên mã ngược (RT-PCR (reverse-transcript PCR)): kỹ thuật PCR cho phép khuếch đại DNA từ khuôn mRNA Phản ứng chuỗi trùng hợp (polymerase chain reaction): hay phản ứng nhân gene nhân tạo, khuếch đại số lượng đoạn DNA gene cụ thể có mặt nucleotide, mồi, đệm xúc tác enzyme chịu nhiệt đặc hiệu (Taq polymerase) Phản ứng tiến hành theo chu kỳ lặp lại nhiều lần bao gồm bước: biến tính, gắn mồi kéo dài Phản ứng quang hoạt hóa (photoreactivation): tượng xạ tia cực tím gây nên hình thành dimer pyrimidine DNA Khi có mặt ánh sáng khả kiến xảy phản ứng nghịch (loại bỏ dimer) tác động enzyme photolyase Phiên mã (transcription): tổng hợp RNA sử dụng DNA làm khuôn Phiên mã ngược (reverse transcription): sinh tổng hợp DNA sử dụng RNA làm khuôn THUẬT NGỮ CHUYÊN NGÀNH 195 trường đại học nông lâm thái nguyên Phương pháp điện di protein sử dụng SDS (SDS-PAGE, SDS polyacrylamide-gel electrophoresis): phương pháp điện di protein sử dụng gel polyacrylamide protein phân tách dựa theo khối lượng phân tử có mặt sodium dodecyl sulphate (SDS) Pilin: tiểu đơn vị cấu trúc lông vi khuẩn (pili) Plasmid: yếu tố di truyền nhiễm sắc thể, có khả tự tái tồn song song với nhiễm sắc thể vật chủ Plasmid giãn xoắn (relaxed plasmid): (1) cấu trúc vòng mở sau mạch bị cắt, (2) plasmid tái với số lượng lớn mà không bị gắn với tái nhiễm sắc thể Plasmid kích cỡ µm: loại plasmid tìm thấy nấm men Saccharomyces cerevisiae sử dụng làm tảng cho việc thiết kế vector tách dòng Plasmid phổ vật chủ rộng (broad host range plasmid): loại plasmid nhân (tái bản) nhiều loại vật chủ Polynucleotide kinase: enzyme chuyển nhóm phosphate từ ATP tới vị trí đầu tận 5’-OH phân tử DNA RNA Primase: enzyme RNA polymerase đặc biệt, có chức tạo đoạn primer ngắn cần thiết cho sinh tổng hợp DNA Promoter: vùng DNA gắn với RNA polymerase để khởi đầu phiên mã Protein bám sợi đơn: (SSB, single-strand DNA-binding protein): làm bền chuỗi đơn DNA, ví dụ suốt q trình chép Proteome: tồn loại protein khác có tế bào Q Quá trình tạo đột biến (mutagenesis): việc xử lý sinh vật tác nhân vật lý, hoá học để tạo thay đổi cấu trúc vật chất di truyền R RecA: protein quan trọng tham gia vào tái tổ hợp đồng dạng (homologous recombination) sửa chữa DNA RecBCD: enzyme phức hợp tham gia tái tổ hợp đồng dạng Replicase: enzyme thuộc loại RNA polymerase điều khiển phiên mã số virus có vật chất di truyền RNA Ribonuclease: enzyme phân giải RNA Riboswitch: vùng mRNA tham gia chức điều hịa ảnh hưởng tới biểu gene thông qua phiên mã dịch mã Rifampicin: kháng sinh tương tác với RNA polymerase RNA điều hòa (regulatory RNA): RNA tham gia điều hòa biểu gene, thay đổi cấu hình phân tử mRNA tác động phân tử RNA nhỏ (small RNA) 196 ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền trường đại học nông lâm thái nguyên RNA đối mã (antisense RNA): phân tử RNA có trình tự bổ sung với trình tự phân tử mRNA bình thường tế bào Nó sử dụng để ngăn chặn dịch mã phân tử mRNA tế bào chuyển gene RNA polymerase: xúc tác cho sinh tổng hợp RNA cách sử dụng DNA làm khuôn RNaseH: loại RNase đặc thù cắt sợi lai RNA-DNA, tham gia tái plasmid giống ColE1 S Sàng lọc tổ hợp (combinatorial screening): kỹ thuật làm giảm số lần PCR phân tích khác thực cách kết hợp mẫu theo trình tự Do mẫu cho kết cụ thể nhận biết mà không cần phải kiểm tra mẫu khác Sắc ký lực (affinity chromatography): phương pháp sắc ký sử dụng phối tử (ligand) gắn với protein cần tinh (trong hỗn hợp) theo cách đặc hiệu, qua đó, rửa trơi thành phần không cần thiết mà giữ lại protein đích Sinh học hệ thống (systems biology): chuyên ngành sinh học phân tử có nhiệm vụ nghiên cứu tổ hợp cấu trúc genome, biểu gene hoạt tính trao đổi chất mối liên hệ tới tính thống hoạt động tế bào Southern blot: chuyển mảnh, đoạn DNA từ gel agarose acrylamide lên màng Sự đột biến: thay thế, biến đổi vật liệu di truyền, dẫn tới xuất đặc tính so với chủng dại Sự giãn xoắn (relaxation): chuyển trạng thái phân tử RNA dạng vòng, siêu xoắn thành dạng vòng mở Sự tái (replication): sinh tổng hợp phân tử DNA, sử dụng phân tử DNA mẹ làm mạch khn Sự tái tổ hợp (recombination): (1) sản xuất chủng thông qua kết hợp vật liệu di truyền từ cá thể bố mẹ khác biệt, (2) phát sinh phân tử DNA thông qua cắt, ghép nối phân tử bố mẹ ban đầu, điều xảy tự nhiên tế bào (in vivo) nhân tạo (in vitro) Sự tương thích (compatibility): khả có hai loại plasmid khác tồn tế bào Sự ức chế (repression): (1) làm giảm phiên mã gene thương tác động protein ức chế (2) áp dụng cho ức chế tự nhiên tượng tiếp hợp xảy nhiều plasmid Sửa chữa hậu tái (post-replication repair): trình sửa chữa DNA bao gồm trao đổi đoạn bị sai hỏng đoạn lành lặn T Tách dòng DNA bổ sung (complementary DNA cloning): kỹ thuật tách dịng có mRNA thực phiên mã ngược tạo DNA trước chèn vào vector THUẬT NGỮ CHUYÊN NGÀNH 197 trường đại học nông lâm thái nguyên Tách dòng shotgun (shotgun cloning): kỹ thuật thuật chèn đoạn gene ngẫu nhiên vào vector Tải nạp (transduction): chuyển gene từ vi khuẩn tới vi khuẩn khác nhờ thể thực khuẩn làm trung gian vận chuyển Tế bào khả biến (competent): dạng tế bào vi khuẩn, xạ khuẩn nấm, v.v xử lý thích hợp để gia tăng khả hấp thụ DNA từ bên Tế bào tái tổ hợp tần suất cao (hfr (high frequency of recombination cell)): loại vi khuẩn có chứa plasmid tiếp hợp bên DNA hệ gen nó, ví dụ nhân tố F Plasmid tiếp hợp cài vào DNA hệ gen thông qua tượng tái tổ hợp đồng dạng Các dịng tế bào hfr có khả truyền gene NST sang tế bào không chứa plasmid tiếp hợp (dòng F-) hiệu Tế bào trần (protoplast): dạng tế bào khơng có thành, vách Nó sử dụng để chuyển gene dung hợp tế bào trần Thể đột biến (mutant): tế bào (hoặc virus) có thay đổi cấu trúc máy di truyền so với chủng dại Thể tái tổ hợp (recombinant): sản phẩm tái tổ hợp, ví dụ, chuyển gene lạ vào vi khuẩn E coli ta thu E coli tái tổ hợp tách dịng gene vào plasmid có plasmid tái tổ hợp Thể thực khuẩn (bacteriophage): loại virus thường xâm nhiễm vi khuẩn Phân tử DNA thể thực khuẩn thường sử dụng làm vector tách dòng Thể tiếp hợp (transconjugant): tế bào tiếp nhận DNA theo phương pháp chuyển gene tiếp hợp Tin sinh học (bioinformatics): khoa học sử dụng máy tính phần mềm chuyên dung để nghiên cứu đặc tính hệ gen tương tác hệ thống trao đổi chất sinh vật Topoisomerase: lớp enzyme tác động làm thay đổi cấu dạng DNA, ví dụ chúng làm thay đổi mức độ siêu xoắn chuỗi DNA Tổng hợp gene nhân tạo (synthetic gene): việc tạo nên gene theo cách nhân tạo từ chuỗi đoạn nucleotide chồng lấn Transposase: xúc tác cho khởi đầu chuyển vị trí gene Trình tự lặp lại ngẫu nhiên có số lượng thay đổi (variable-number tandem repeat (VNTR)): trình tự lặp lại ngắn từ 50–100 bp, với số lần đơn vị lặp lại biến đổi, sử dụng để phân loại chủng lồi V Vector: plasmid bacteriophage Nó có khả dung hợp với đoạn DNA ngoại lai để tạo phân tử tái tổ hợp nhân tế bào chủ Vector BacMam: biến thể vector baculovirus Nó mang promoter có xuất xứ từ động vật nên vector sử dụng để biểu gene tách dịng từ động vật 198 ©2017 Ngun lý kỹ thuật di truyền trường đại học nông lâm thái nguyên Vector liên hợp (shuttle vector): vector tách dịng tái hai loài sinh vật riêng rẽ mà số chúng Escherichia coli Vị trí gắn ribosome (ribosome-binding site (RBS) đoạn Shine–Dalgarno): vùng phân tử mRNA mà ribosome bắt đầu gắn vào Virus adeno (adenovirus): loại virus có mặt động vật, số chủng virus sử dụng để tách dòng gene tế bào động vật Virus baculo: loại virus sử dụng làm vector tách dòng để sản xuất protein tái tổ hợp tế bào côn trùng Virus caulimo: hai nhóm virus có chứa vật liệu di truyền DNA, chúng lây nhiễm thực vật, số dòng virus sử dụng làm nguồn cung cấp vector tách dòng thực vật bậc cao Virus kết hợp với Adeno (adeno-associated virus, AAV): loại virus vốn khơng có mối liên quan với virus adeno mặt di truyền lại thường tìm thấy mơ bị nhiễm bệnh, AAV sử dụng số loại protein tổng hợp virus adeno để kết thúc chu trình nhân vật liệu di truyền Virus khảm súp lơ (CaMV): loại virus caulimo sử dụng làm vector tác dịng cho số lồi thực vật bậc cao Virus khảm súp lơ nguồn cung cấp promoter mạnh cho thiết kế vector dùng nghiên cứu di truyền thực vật Ư Ưa nước (hydrophilic): tính chất chất hoá học dễ tan, tương tác tốt với nước W Western blot: kỹ thuật chuyển protein từ gel acrylamide lên màng nitrocellulose, thường sử dụng để phát kháng thể X X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactoside): chất sinh màu enzyme β-galactosidase, thường sử dụng tách dòng gene để chọn lọc khuẩn lạc tái tổ hợp mong muốn THUẬT NGỮ CHUYÊN NGÀNH 199 TÀI LIỆU THAM KHẢO Richard J Reece (2004) Analysis of Genes and Genomes John Wiley & Sons Ltd Primrose S.B and Twyman R.M (2006) Principles of Gene Manipulation and Genomics Blackwell Publishing Christopher Howe (2007) Gene Cloning and Manipulation Cambridge University Press Brown, T.A (2010) Gene cloning and DNA analysis: An introduction Wiley-Blackwell Daniel L Hartl and Elizabeth W Jones (2011) Genetics: Analysis of Genes and Genomes Jones & Bartlett Learning Jeremy W Dale, Malcolm von Schantz and Nick Plant (2012) From Genes to Genomes: Concepts and Applications of DNA Technology Wiley-Blackwell Harvey Lodish cộng (2016) Sinh học phân tử tế bào Tập 2: Di truyền học sinh học phân tử Biên dịch: Nguyễn Xuân Hưng cộng Nhà xuất Trẻ ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền 201 GIÁO TRÌNH NGUYÊN LÝ KỸ THUẬT DI TRUYỀN Chịu trách nhiệm xuất Giám đốc - Tổng Biên tập: TS LÊ QUANG KHÔI Biên tập sửa in: LÊ LÂN – NGUYỄN THỊ THU HÀ Trình bày, bìa: NGUYỄN THỊ ÁNH TUYẾT NHÀ XUẤT BẢN NƠNG NGHIỆP 167/6 Phương Mai - Đống Đa - Hà Nội ĐT: (04) 38523887, (04) 38521940 - Fax: (04) 35760748 Website: http://www.nxbnongnghiep.com.vn E-mail: nxbnn@yahoo.com.vn CHI NHÁNH NHÀ XUẤT BẢN NÔNG NGHIỆP 58 Nguyễn Bỉnh Khiêm - Q.I - Tp Hồ Chí Minh ĐT: (08) 38299521, 38297157 - Fax: (08) 39101036 63 − 630 − / 110 − 17 NN − 2017 In 115 bản, khổ 19 × 27cm Xưởng in Nhà xuất Nông nghiệp Địa chỉ: Số 6, ngõ 167 phố Phương Mai - Đống Đa - Hà Nội Xác nhận đăng ký xuất số 1537-2017/CXBIPH/1-110/NN ngày 17/5/2017 Quyết định XB số: 47/QĐ-NXBNN ngày 30/5/2017 ISBN 978-604-60-2539-9 In xong nộp lưu chiểu Quý II/2017 ... vi ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền Chương 1 TÁCH CHIẾT AXIT NUCLEIC Đ ể bắt đầu thí nghiệm kỹ thuật di truyền, việc phải thu vật liệu di truyền, DNA RNA, để làm nguyên liệu Các kỹ thuật đại... BAC���������������������������������������������������������������������������������������������������65 ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền iii trường đại học nông lâm thái nguyên Chương 4 KỸ THUẬT PCR 67 4.1 Nguyên lý �����������������������������������������������������������������������������������������������������������������������������... soạn chương phần Thuật ngữ chuyên ngành ©2017 Nguyên lý kỹ thuật di truyền v trường đại học nơng lâm thái ngun Giáo trình sử dụng làm tài liệu tham khảo cho nhà nghiên cứu, giáo viên phổ thông