Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).

Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) và Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor).

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - LÊ KIỀU HƯNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI ĐẠI CÁN BIDOUP (MACROSOLEN BIDOUPENSIS) VÀ ĐẠI CÁN TAM SẮC (MACROSOLEN TRICOLOR) LUẬN ÁN TIẾN SĨ HĨA HỌC TP HỒ CHÍ MINH, 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - LÊ KIỀU HƯNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI ĐẠI CÁN BIDOUP (MACROSOLEN BIDOUPENSIS) VÀ ĐẠI CÁN TAM SẮC (MACROSOLEN TRICOLOR) CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỌC HỮU CƠ MÃ SỐ: 9440114 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS MAI ĐÌNH TRỊ TP HỒ CHÍ MINH, 2022 LỜI CẢM ƠN - -Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc nhất, tơi xin kính gửi lời cảm ơn đến PGS TS MAI ĐÌNH TRỊ Viện Cơng nghệ Hóa Học Đã tận tình hướng dẫn quan tâm thường xun đến suốt q trình thực cơng trình nghiên cứu tơi TS NGUYỄN TẤN PHÁT, PGS.TS HỒNG THỊ KIM DUNG, PGS.TS ĐẶNG CHÍ HIỀN Viện Cơng nghệ Hóa học Đã giúp đỡ, động viên, chia sẻ kinh nghiệm quý báu suốt trình học, nghiên cứu thực luận án TS ĐẶNG VĂN SƠN Viện Sinh hoc nhiệt đới Tp Hồ Chí Minh Đã định danh mẫu thực vật để thực luận án Q thầy cơng tác Viện Cơng nghệ Hóa học, Học viện Khoa học Công nghệ tận tình truyền đạt, hướng dẫn cho tơi kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt trình học Xin cám ơn Quỹ Phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 104.01-2018.48 hỗ trợ phần kinh phí để hồn thành đề tài Cuối xin cảm ơn gia đình động viên, tạo điều kiện từ vật chất đến tinh thần để học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án Xin chân thành cảm ơn TP Hồ Chí Minh, năm 2022 LÊ KIỀU HƯNG LỜI CAM ĐOAN Luận án Tiến sĩ Hóa học: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor)” thực hiện, số liệu, kết trung thực Tp Hồ Chí Minh, năm 2022 Nghiên cứu sinh Lê Kiều Hưng i MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis Tagane & V.S Dang) ……………………………………………………………………………… 1.1.1 Mơ tả thực vật lồi Đại cán Bidoup (M bidoupensis) 1.1.2 Các nghiên cứu loài Đại cán Bidoup (M bidoupensis) 1.2 Giới thiệu chung loài Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor (Lecomte) Dans) ………………………………………………………………………… ………3 1.2.1 Mơ tả thực vật lồi Đại cán tam sắc (M tricolor) 1.2.2 Các nghiên cứu loài Đại cán tam sắc (M tricolor) 1.3 Giới thiệu chung số loài chi Đại cán (Macrosolen) 1.3.1 Mô tả thực vật số loài chi Macrosolen 1.3.2 Các nghiên cứu số loài chi Macrosolen 12 1.4 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học 15 1.4.1 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào ung thư 15 1.4.2 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính kháng viêm 16 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 18 2.1 Mẫu nguyên liệu 18 2.2 Phương pháp phân lập 18 2.2.1 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 18 2.2.2 Sắc ký cột (CC) 19 2.3 Phương pháp xác định cấu trúc 19 2.3.1 Độ quay cực [α]D 19 2.3.3 Phương pháp phổ hồng ngoại (IR) 19 2.3.4 Phương pháp khối phổ (MS) 19 2.3.5 Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) 19 2.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 20 ii 2.4.1 Phương pháp thử hoạt tính ức chế sản sinh NO 21 2.5 Điều chế cao chiết 22 2.5.1 Điều chế cao chiết từ Đại cán Bidoup (M bidoupensis) 22 2.5.2 Điều chế cao chiết từ Đại cán tam sắc (M tricolor) 23 2.6 Phân lập hợp chất 24 2.6.1 Phân lập hợp chất từ Đại cán Bidoup (M bidoupensis) 24 2.6.1.1 Phân lập hợp chất từ cao n-hexane Đại cán Bidoup 24 2.6.1.2 Phân lập hợp chất từ cao ethyl acetate Đại cán Bidoup 24 2.6.1.3 Phân lập hợp chất từ cao nước Đại cán Bidoup 26 2.6.2 Phân lập hợp chất từ Đại cán tam sắc (M tricolor) 28 2.6.2.1 Phân lập hợp chất từ cao n-hexane Đại cán tam sắc 28 2.6.2.2 Phân lập hợp chất từ cao ethyl acetate Đại cán tam sắc 30 2.7 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ Đại cán Bidoup 31 2.7.1 24-Methylenecycloartanol (MB01) 31 2.7.2 (23Z)-Cycloart-23-ene-3,25-diol (MB02) 31 2.7.3 Mollic acid (MB16) 32 2.7.4 Macrobidoupoic acid A (MB17, chất mới) 32 2.7.5 Lupeol (MB05) 33 2.7.6 Betulin (MB06) 33 2.7.7 Betulinic acid (MB09) 33 2.7.8 Friedelin (MB03) 34 2.7.9 3-Friedelanol (MB10) 34 2.7.10 3-Hydroxyfriedelane-28-oic acid (MB11) 34 2.7.11 Glutinol (MB04) 35 2.7.12 Ursolic acid (MB12) 35 2.7.13 3-Hydroxyurs-11-ene-28,13-olide (MB13) 35 2.7.14 3-Cholesterol acetate (MB07) 36 2.7.15 3-hydroxystigmast-5-ene (MB08a) 3-hydroxystigmasta-5,22-diene (MB08b) 36 2.7.16 Quercetin (MB18) 36 2.7.17 Quercitrin (MB20) 37 iii 2.7.18 Isoquercitrin (MB22) 37 2.7.19 Astibin (MB21) 37 2.7.20 Rutin (MB24) 38 2.7.21 3,3′-di-O-methylellagic acid 4-O-β-D-xylopyranoside (MB19) 38 2.7.22 Aesculin (MB23) 39 2.7.23 Loliolide (MB14) 39 2.7.24 (+)-Syringaresinol (MB15) 39 2.8 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ Đại cán tam sắc …………………………………………………………………………………39 2.8.1 Macrotricolorin A (MT01, chất mới) 39 2.8.2 Bisdemethoxycurcumin (MT03) 40 2.8.3 Demethoxycurcumin (MT04) 40 2.8.4 Curcumin (MT05) 41 2.8.5 Gallic acid (MT08) 41 2.8.6 3,3’-di-O-methylellagic acid (MT09) 41 2.8.7 3,3’-di-O-methylellagic acid 4-O-β-D-xylopyranoside (MT11) 41 2.8.8 Kaempferol (MT10) 41 2.8.9 Vitexin (MT12) 42 2.8.10 Orientin (MT13) 42 2.8.11 Lupeol (MT02) 42 2.8.12 Stigmast-5-ene 3-O--D-glucopyranoside (MT06) 43 2.8.13 Stigmast-5-ene 3-O--D-(6'-O-margaroyl)glucopyranoside (MT07) 43 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Hoạt tính sinh học phân đoạn cao chiết 44 3.1.1 Hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn cao chiết 44 3.2 Hoạt tính kháng viêm phân đoạn cao chiết 46 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ loài Đại cán Bidoup 47 3.3.1 24-Methylenecycloartanol (MB01) 47 3.3.2 (23Z)-Cycloart-23-en-3,25-diol (MB02) 48 3.3.3 Mollic acid (MB16) 49 3.3.4 Macrobidoupoic acid A (MB17, chất mới) 50 3.3.5 Lupeol (MB05) 56 iv 3.3.6 Betulin (MB06) 57 3.3.7 Betulinic acid (MB09) 58 3.3.8 Friedelin (MB03) 60 3.3.9 3-Friedelanol (MB10) 60 3.3.10 3-Hydroxyfriedelane-28-oic acid (MB11) 61 3.3.11 Glutinol (MB04) 64 3.3.12 Ursolic acid (MB12) 64 3.3.13 3-Hydroxyurs-11-ene-28,13-olide (MB13) 65 3.3.14 3-Cholesterol acetate (MB07) 68 3.3.15 3-hydroxystigmast-5-ene (MB08a) 3-hydroxystigmasta-5,22-diene (MB08b) 68 3.3.16 Quercetin (MB18) 70 3.3.17 Quercitrin (MB20) 71 3.3.18 Isoquercitrin (MB22) 72 3.3.19 Astibin (MB21) 73 3.3.20 Rutin (MB24) 75 3.3.21 3,3’-di-O-methylellagic acid 4-O-β-D-xylopyranoside (MB19) 77 3.3.22 Aesculin (MB23) 78 3.3.23 Loliolide (MB14) 79 3.3.24 (+)-Syringaresinol (MB15) 80 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ loài Đại cán tam sắc 82 3.4.1 Macrotricolorin A (MT01, chất mới) 82 3.4.2 Bisdemethoxycurcumin (MT03) 84 3.4.3 Demethoxycurcumin (MT04) 85 3.4.4 Curcumin (MT05) 86 3.4.5 Gallic acid (MT08) 88 3.4.6 3,3’-di-O-methylellagic acid (MT09) 89 3.4.7 3,3’-di-O-methylellagic acid 4-O-β-D-xylopyranoside (MT11) 89 3.4.8 Kaempferol (MT10) 91 3.4.9 Vitexin (MT12) 92 3.4.10 Orientin (MT13) 93 3.4.11 Lupeol (MT02) 94 v 3.4.12 Stigmast-5-ene 3-O--D-glucopyranoside (MT06) 95 3.4.13 Stigmast-5-ene 3-O--D-(6'-O-margaroyl)glucopyranoside (MT07) 96 3.5 Hoạt tính sinh học hợp chất tinh khiết 98 3.5.1 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất tinh khiết 98 3.5.2 Hoạt tính kháng viêm hợp chất tinh khiết 99 3.6 Nhận xét chung 100 3.6.1 Nhận xét chung thành phần hóa học Đại cán Bidoup đặc trưng phổ nghiệm 100 3.6.2 Nhận xét chung thành phần hóa học Đại cán tam sắc đặc trưng phổ nghiệm 102 3.6.3 Nhận xét chung hoạt tính sinh học hợp chất 102 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 106 KẾT LUẬN 106 KIẾN NGHỊ 108 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 109 TÀI LIỆU THAM KHẢO 111 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC 123 vi DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu br s br d CC COSY CTCT CTPT d DAD dd ddd DEPT DMSO DPPH dq Glc HepG2 Tiếng Anh Tiếng Việt Mũi đơn rộng Broad doublet Column chromatography Correlation SpectroscopY Mũi đôi rộng Sắc ký cột Phổ tương tác Công Thức Cấu Tạo Công Thức Phân Tử Mũi đơi Đầu dị Diode Array Mũi đơi đơi Mũi đôi đôi đôi Broad singlet Doublet Diode Array Detector Doublet of doublet Doublet of doublets of doublets Detortionless Enhancement by Polarization Transfer Dimethyl Sulfoxide 1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl Doublet of quartet β-D-glucopyranosyl Human hepatocellular carcinoma Phổ DEPT Mũi đôi bốn Ung thư gan người Phổ tương tác dị nhân qua HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence nhiều nối High Performance Liquid HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography High Resolution Electrospray Ionisation Phổ khối lượng phun mù HR-ESI-MS Mass Spectrometry điện phân giải cao Heteronuclear Single Quantum Phổ tương tác dị nhân qua HSQC Correlation nối Liquid Chromatography Mass LC-MS Sắc ký lỏng ghép khối phổ Spectrometry IC50 Inhibitory Concentration 50% Nồng độ ức chế 50 % IR Infrared Phổ hồng ngoại isoPrOH Iso-propanol J Coupling constant Hằng số ghép m Multiplet Mũi đa MDA-MBUng thư vú người Triple-Negative Breast Cancer 231 MDA Malonyl Dialdehyd Me2CO Dimethyl ketone MeCOEt Ethyl methyl ketone MSD Mass spectrometry detector Đầu dò khối phổ MW Molecular Weight Trọng lượng phân tử Cao EtOAc từ Đại cán MBE Bidoup MBH Cao n-hexane từ Đại cán Bidoup 197 Phụ lục 30b: Phổ 13C-NMR hợp chất MT09 Phụ lục 30c: Phổ 1H-NMR hợp chất MT09 Expanded spectrum 198 Molecular formula Phụ prediction lục 31a: Phổ HR-ESI-MS hợp chất MT11 Page of Phụ lục 31b: Phổ 13C-NMR hợp chất MT11 199 Phụ lục 31c: Phổ MT04-DMSO-HMBC H-NMR hợp chất MT11 ppm 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 8.5 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 Phụ lục 31d: Phổ HMBC hợp chất MT11 2.5 ppm 200 MT04-DMSO-HSQC ppm 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 Phụ lục 31e: Phổ HSQC hợp chất MT11 Phụ lục 32a: Phổ 13C-NMR hợp chất MT10 ppm 201 Created with SCIEX OS 1.2 CENTER FOR RESEARCH AND TECHNOLOGY TRANSFER PHARMACEUTICAL CHEMISTRY LABORATORY 01, Mac Dinh Chi St., Dist 1, Ho Chi Minh City, Vietnam Phone: (84) 907 070 939 ANALYSIS REPORT Injection details Sample name Sample file name Acquisition date Operator MT16 SER wiff2 – PHAT 28/08/2019 10:35:54 AM CB21261708 Vial position Inject volume Acquisition method Instrument name 46 5.00 ESI _NEG_SCAN X500R QTOF Full mass spectrum Expanded spectrumPhụ lục 32b: Phổ H-NMR hợp chất MT10 Phụ lục 33a:formula Phổ HR-ESI-MS Molecular prediction hợp chất MT12 Page of 202 Phụ lục 33b: Phổ 13C-NMR hợp chất MT12 Phụ lục 33c: Phổ 1H-NMR hợp chất MT12 203 MT16-DMSO-HSQC ppm 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 ppm Phụ lục 33d: PhổMT16-DMSO-HMBC HMBC hợp chất MT12 ppm 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 13 12 11 10 Phụ lục 33e: Phổ HSQC hợp chất MT12 ppm Expanded spectrum 204 Molecular formula Phụprediction lục 34a: Phổ HR-ESI-MS hợp chất MT13 Page of Phụ lục 34b: Phổ 13C-NMR hợp chất MT13 205 Phụ lục 34c: PhổMT11-DMSO-HMBC H-NMR hợp chất MT13 ppm 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 14 13 12 11 10 Phụ lục 34d: Phổ HMBC hợp chất MT13 200 ppm 206 MT11-DMSO-HSQC ppm 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 Phụ lục 34e: Phổ HSQC hợp chất MT13 Phụ lục 35a: Phổ 1H-NMR hợp chất MT02 ppm 207 Phụ lục 36a: Phổ 13C-NMR hợp chất MT06 Phụ lục 36b: Phổ 1H-NMR hợp chất MT06 Acquisition date Operator Acquisition method Instrument name 28/08/2019 10:27:54 AM CB21261708 ESI _POS_SCAN X500R QTOF Full mass spectrum 208 Expanded spectrum Phụ lục 37a: Phổ HR-ESI-MS hợp chất MT07 Molecular formula prediction Page of Phụ lục 37b: Phổ 13C-NMR hợp chất MT07 209 MT14-CDCl3-HMBC Phụ lục 37c: Phổ H-NMR hợp chất MT07 ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 Phụ lục 37d: Phổ HMBC hợp chất MT07 0.5 ppm 210 MT14-CDCl3-HSQC ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 5.5 210 200 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 MT14-CDCl3-C13CPD&DEPT 1.0 0.5 ppm Phụ lục 37e: Phổ HSQC hợp chất MT07 DEPT90 DEPT135 5.0 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm CH&CH3 CH2 210 200 C13CPD 210 200 Phụ lục 37f: Phổ DEPT hợp chất MT07 MT14-CDCl3-COSYGP 211 Current NAME EXPNO PROCNO ppm F2 - Acq Date_ Time INSTRUM PROBHD PULPROG TD SOLVENT NS DS SWH FIDRES AQ RG DW DE TE D0 D1 D11 D12 D13 D16 IN0 1.0 1.5 2.0 2.5 ======== SFO1 NUC1 P0 P1 P17 PLW1 PLW10 3.0 3.5 ====== G GPNAM[1] GPZ1 P16 4.0 F1 - Acq TD SFO1 FIDRES SW FnMODE F2 - Pro SI SF WDW SSB LB GB PC 4.5 5.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 Phụ lục 37g: Phổ COSY hợp chất MT07 1.0 ppm F1 - Pro SI MC2 SF WDW SSB LB GB ... HƯNG LỜI CAM ĐOAN Luận án Tiến sĩ Hóa học: ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor)” thực hiện,... hoạt tính sinh học lồi M bidoupensis Vì vậy, đề tài ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài Đại cán Bidoup (Macrosolen bidoupensis) Đại cán tam sắc (Macrosolen tricolor)” cần... DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - LÊ KIỀU HƯNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LOÀI ĐẠI CÁN BIDOUP