Xác định đột biến EGFR-T790M gây kháng thuốc ức chế tyrosine kinase thế hệ thứ nhất ở bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ bằng kỹ thuật scorpions ARMS real-time PCR

Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến EGFR-T790M gây đề kháng EGFR-TKIs thế hệ thứ nhất ở bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ. Đối tượng và phương pháp: 66 bệnh nhân được xác định kháng thuốc EGFR-TKIs thế hệ thứ nhất theo tiêu chuẩn của Hội ung thư học lâm sàng Hoa Kỳ, được xét nghiệm tìm đột biến EGFR-T790M thứ phát bằng kỹ thuật ScorpionARMS real-time PCR với bệnh phẩm mô ung thư tại thời điểm kháng thuốc.

TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN EGFR-T790M GÂY KHÁNG THUỐC ỨC CHẾ TYROSINE KINASE THẾ HỆ THỨ NHẤT Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI KHÔNG TẾ BÀO NHỎ BẰNG KỸ THUẬT SCORPIONS ARMS REAL-TIME PCR Trần Khánh Chi*, Trần Vân Khánh*, Lê Hồn* TĨM TẮT Mục tiêu: Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến EGFR-T790M gây đề kháng EGFR-TKIs hệ thứ bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ Đối tượng phương pháp: 66 bệnh nhân xác định kháng thuốc EGFR-TKIs hệ thứ theo tiêu chuẩn Hội ung thư học lâm sàng Hoa Kỳ, xét nghiệm tìm đột biến EGFR-T790M thứ phát kỹ thuật ScorpionARMS real-time PCR với bệnh phẩm mô ung thư thời điểm kháng thuốc Kết quả: 36/66 (54,5%) bệnh nhân có xuất đột biến EGFRT790M thứ phát Kết luận: đột biến EGFRT790M nguyên phổ biến gây nên tình trạng kháng thuốc EGFR-TKIs hệ thứ bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ Từ khóa: Ung thư phổi, Điều trị đích, EGFR, T790M SUMMARY IDENTIFICATION OF EGFR- T790M MUTATION ASSOCIATED WITH ACQUIRED RESISTANCE TO FIRSTGENERATION TYROSINE KINASE INHIBITORS IN NON-SMALL-CELL *Trường Đại học Y Hà Nội Chịu trách nhiệm chính: Trần Khánh Chi Email: trankhanhchi@hmu.edu.vn Ngày nhận bài: 25.11.2021 Ngày phản biện khoa học: 27.11.2021 Ngày duyệt bài: 30.11.2021 LUNG CANCER PATIENTS BY SCORPION-ARMS REAL-TIME PCR Objective: Determine of the rate of EGFRT790M mutations causing first generation EGFR-TKIs resistance in non-small cell lung cancer patients Materials and methods: 66 patients identified as resistant to first-generation EGFR-TKIs according to the American Society of Clinical Oncology's criteria, were tested for secondary EGFR-T790M mutations by ScorpionARMS real-time PCR technique with cancer tissue specimens at the time of drug resistance Results: 36/66 (54.5%) patients had a secondary EGFR-T790M mutation Conclusion: EGFRT790M mutation is a common cause of resistance to first-generation EGFR-TKIs in nonsmall cell lung cancer patients Keywords: Lung cancer, Targeted treatment, EGFR, T790M I ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư phổi (UTP) nguyên nhân gây tử vong hàng đầu ung thư toàn giới [1] Điều trị đích thuốc ức chế tyrosine kinase (Tyrosine kinase inhibitorsTKIs) EGFR chứng minh lựa chọn hiệu cho bệnh nhân UTP khơng tế bào nhỏ có đột biến gen EGFR [2] Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu giới ghi nhận sau khoảng 10- 16 tháng điều trị với thuốc EGFR-TKIs, hầu hết bệnh nhân (BN) xuất tình trạng khơng đáp ứng với thuốc điều trị, tổn thương ung 35 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC thư tiến triển [3] Nhiều nguyên nhân gây kháng thuốc xác định xuất đột biến phân tử EGFR; khuếch đại tăng cường biểu gen khác; chuyển dạng tế bào ung thư, đột biến EGFRT790M xác định nguyên nhân phổ biến [4] Cho đến nay, nhiều phương pháp sinh học phân tử khác phát đột biến EGFR-T790M thứ phát Tuy nhiên, kỹ thuật Scorpion-ARMS real-time PCR xem phương pháp thường quy để phát đột biến Chính vậy, thực nghiên cứu với mục tiêu xác định đột biến EGFR-T790M gây đề kháng EGFR-TKIs hệ thứ bệnh nhân ung thư phổi không tế bào nhỏ kỹ thuật Scorpion-ARMS real-time PCR II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Chọn mẫu thuận tiện, lựa chọn 66 bệnh nhân UTP bệnh viện (Bệnh viện Bạch Mai, Bệnh viện K Trung ương Bệnh viện Trung ương Quân đội 108) đảm bảo tiêu chuẩn sau đây: 1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn: Đáp ứng tiêu chuẩn Hội ung thư học lâm sàng Hoa Kỳ đưa để đánh giá tình trạng kháng EGFR- TKIs hệ thứ cho ung thư phổi không tế bào nhỏ [5]: - Được chẩn đoán xác định UTP không tế bào nhỏ kết mô bệnh học - Được xác định có đột biến gen EGFR nhạy cảm EGFR-TKIs - Được điều trị EGFR- TKIs hệ thứ (erlotinib gefitinib) - Được đánh giá có đáp ứng ổn định vịng tháng 36 - Tổn thương tiến triển xuất tổn thương điều trị với erlotinib gefitinib - Khơng có điều trị tồn thân khoảng thời gian kết thúc điều trị erlotinib gefitinib với bắt đầu điều trị 1.2 Tiêu chuẩn loại trừ - Bệnh nhân UTP điều trị thuốc EGFR- TKIs hệ thứ khơng xác định có đột biến gen EGFR nhạy cảm TKIs - Bệnh nhân không đánh giá ổn định bệnh đáp ứng điều trị sau tháng điều trị EGFR - TKIs hệ thứ - Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắt ngang chùm ca bệnh Các bước tiến hành: - Các bệnh nhân nghi ngờ kháng thuốc lấy bệnh phẩm ung thư (tái sinh thiết) phương pháp sau: sinh thiết u nguyên phát, sinh thiết tổn thương thứ phát (phổi, gan, xương), sinh thiết hạch ngoại vi, hút dịch nghi ngờ di (màng phổi, màng tim) - Phân tích mơ bệnh học khối tế bào khoa Giải phẫu bệnh, thuộc bệnh viện tham gia nghiên cứu Khẳng định tổn thương ung thư mẫu bệnh phẩm tái sinh thiết - Xác định đột biến EGFR- T790M kỹ thuật Scorpions ARMS real- time PCR sử dụng Kit cobas® EGFR Mutation test Roche Trung tâm Nghiên cứu Gen & Protein, Trường Đại học Y Hà Nội TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Hình 1: Phân tích đột biến EGFR kỹ thuật Scorpions ARMS real-time PCR trước sau điều trị EGFR-TKIs III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Phân tích kết từ 66 bệnh nhân đảm bảo tiêu chuẩn kháng thuốc EGFR- TKIs hệ thứ nhất, thu kết sau: 3.1 Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu Bảng 1: Một số đặc điểm chung nhóm nghiên cứu Đặc điểm Số lượng Tỷ lệ % Tuổi trung bình: 60,6 ± 10,7 tuổi (dao động từ 26-80 tuổi) Nam 34 51,5 Giới tính Nữ 32 48,5 LREA (exon 19) 36 54,5 Loại đột biến EGFR L858R (exon 21) 29 44 trước điều trị G719S (exon 18) 1,5 Thời gian trung bình xuất kháng thuốc: 14,48 ± 3,9 (dao động 8- 26 tháng) Nhận xét: đặc điểm chung phù hợp với ghi nhận ung thư phổi có đột biến EGFR Thời gian xuất kháng thuốc EGFR-TKIs dao động từ 8-26 tháng, trung bình 14,48 ± 3,9 tháng 3.2 Kết phân tích đột biến EGFR-T790M kỹ thuật Scorpions ARMS realtime PCR 37 HỘI NGHỊ KHOA HỌC LẦN THỨ XXIV CỦA HỘI HÓA SINH Y HỌC HÀ NỘI VÀ CÁC TỈNH PHÍA BẮC Biểu đồ 1: Kết xác định đột biến EGFR-T790M Nhận xét: có 36/66 bệnh nhân (54,5%) xuất đột biến EGFR-T790M thứ phát gây kháng lại EGFR-TKIs hệ thứ IV BÀN LUẬN Nghiên cứu 66 BN UTP mang đột biến EGFR, ghi nhận tuổi trung bình nhóm nghiên cứu 60,6 ± 10,7 tuổi, BN trẻ tuổi 26 tuổi, lớn tuổi 80 tuổi Kết tương tự với ghi nhận Nguyễn Thanh Hoa cộng nghiên cứu 100 BN UTP có đột biến EGFR BV K Trung ương năm 2019, tuổi trung bình mắc bệnh 56,27 ± 7,9 tuổi, dao động từ 39 đến 80 tuổi [6] Về đặc điểm giới tính, nghiên cứu chúng tơi ghi nhận có 34 BN nam (51,5%) 32 BN nữ (48,5%), tỷ lệ UTP có đột biến EGFR nam giới gần tương tự nữ giới Một nghiên cứu gần Việt Nam ghi nhận tỷ lệ nam giới cao nữ giới, Nguyễn Thanh Hoa cộng Bệnh viện K Trung ương (2019) ghi nhận nam giới chiếm tỷ lệ 60% [6] Tuy nhiên, nghiên cứu 38 giới với cỡ mẫu lớn lại ghi nhận nữ giới phổ biến nhóm UTP có đột biến EGFR Wang JF cộng tiến hành phân tích cộng gộp với 478 BN UTP có đột biến gen EGFR từ 10 nghiên cứu trước đó, kết cho thấy nữ giới chiếm 64,9% [7] Về đặc điểm đột biến EGFR nhạy cảm TKIs nhóm nghiên cứu, chúng tơi ghi nhận có 54,5% BN mang đột biến LREA exon 19; 44% BN có đột biến L858R exon 21; trường hợp mang đột biến G719S exon 18 Kết phù hợp với ghi nhận đột biến EGFR nhạy cảm TKIs, đột biến phổ biến LREA L858R Kim HR cộng nghiên cứu 110 BN UTP mang đột biến EGFR Hàn Quốc ghi nhận 62,7% có đột biến LREA; 33,6% có đột biến L858R có 3,7% gặp đột biến nhạy cảm khác EGFR [8] TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 509 - THÁNG 12 - SỐ CHUYÊN ĐỀ - 2021 Nghiên cứu thời gian xuất kháng thuốc, ghi nhận thời gian trung bình từ thời điểm bắt đầu điều trị EGFR-TKI đến bệnh tiến triển 14,48 ± 3,9 tháng; thời gian xuất tiến triển sớm tháng, muộn 26 tháng Kết phù hợp với ghi nhận từ nghiên cứu giới gần đây, thời gian trung bình từ bắt đầu điều trị đến xuất tình trạng kháng lại EGFR-TKIs hệ thứ khoảng 10-16 tháng [3,9] Hiện nay, có nhiều phương pháp sinh học phân tử khác để phát đột biến gen EGFR, phương pháp phổ biến FDA chấp thuận Scorpions ARMS real- time PCR giải trình tự gen hệ Với ưu điểm kỹ thuật đơn giản, hệ thống thiết bị sẵn có, thời gian cho kết nhanh, Scorpions ARMS real- time PCR chấp thuận phương pháp thường quy để phát đột biến EGFR thực hành lâm sàng Bằng việc sử dụng Kit cobas® EGFR Mutation test Roche, chúng tơi phát có 36/66 bệnh nhân kháng thuốc EGFRTKIs xuất đột biến thứ phát EGFRT790M, chiếm 54,5% Theo báo cáo gần đây, đột biến EGFR-T790M ghi nhận khoảng 40-55% bệnh nhân UTP kháng lại EGFR-TKIs hệ thứ [4] Kết nghiên cứu thấy rằng, đột biến thứ phát EGFR-T790M chế phổ biến gây nên đề kháng lại EGFRTKIs hệ thứ V KẾT LUẬN Sử dụng kỹ thuật Scorpion-ARMS realtime PCR với Kit cobas® EGFR Mutation test Roche, phát 54,5% mẫu mô sinh thiết thời điểm kháng thuốc xuất đột biến thứ phát EGFRT790M Đây nguyên nhân phổ biến gây kháng lại EGFR-TKIs hệ thứ bệnh nhân UTP không tế bào nhỏ TÀI LIỆU THAM KHẢO Bray F, Ferlay J, Soerjomataram I, et al (2018) Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries CA Cancer J Clin; 68(6):394-424 Lee CK, Brown C, Gralla RJ, et al (2013) Impact of EGFR inhibitor in non-small cell lung cancer on progression-free and overall survival: a meta-analysis J Natl Cancer Inst; 105: 595-605 Oxnard GR, Arcila ME, Sima CS, et al (2011) Acquired Resistance to EGFR Tyrosine Kinase Inhibitors in EGFR-Mutant Lung Cancer: Distinct Natural History of Patients with Tumors Harboring the T790M Mutation Clin Cancer Res; 17(6):1616-1622 Westover D, Zugazagoitia J, Cho BC (2018) Mechanisms of acquired resistance to first and second-generation EGFR tyrosine kinase inhibitors Annals of Oncology; 29 (Supplement 1):i10-i19 Jackman D, Pao W, Riely GJ, et al (2010) Clinical definition of acquired resistance to epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors in non-small-cell lung cancer J Clin Oncol; 28 (2):357-60 Nguyễn Thanh Hoa, Đỗ Hùng Kiên (2019) Đánh giá kết điều trị bước thuốc Erlotinib bệnh nhân ung thư phổi Bệnh viện K Y học thực hành; 1106 (8):1012 Wang ZF, Ren SX, Li W, et al (2018) Frequency of the acquired resistant mutation T790 M in non-small cell lung cancer patients with active exon 19Del and exon 21 L858R: a 39 ... real-time PCR xem phương pháp thư? ??ng quy để phát đột biến Chính vậy, chúng tơi thực nghiên cứu với mục tiêu xác định đột biến EGFR-T790M gây đề kháng EGFR-TKIs hệ thứ bệnh nhân ung thư phổi không tế bào. .. giá tình trạng kháng EGFR- TKIs hệ thứ cho ung thư phổi không tế bào nhỏ [5]: - Được chẩn đốn xác định UTP khơng tế bào nhỏ kết mô bệnh học - Được xác định có đột biến gen EGFR nhạy cảm EGFR-TKIs... tế bào ung thư, đột biến EGFRT790M xác định nguyên nhân phổ biến [4] Cho đến nay, nhiều phương pháp sinh học phân tử khác phát đột biến EGFR-T790M thứ phát Tuy nhiên, kỹ thuật Scorpion -ARMS real-time