Báo cáo thực tập kỹ thuật gen

Bài báo cáo thực tập kỹ thuật gen. I.Tách chiết plasmid 1.Mục tiêu thí nghiệmMục tiêu của thí nghiệm là nhằm phân tách plasmidp Bluescript (+) từ tế bào E.Coli DH5α và tinh sạch plasmid. Chuẩn bị cho quá trình dòng hoá.2.Nguyên tắc Sử dụng chất tẩy rửa có tính kiềm hóa như SDS – NaOH để phá màng tế bào, giải phóng DNA tổng số. Trong điều kiện môi trường kiềm, DNA bị phân cắt liên kết hydro giữa các nucletotide dẫn đến bị biến tính. Sau đó, kali axetat (KOAc) được bổ sung làm giảm độ kiềm của hỗn hợp và liên kết hydro của các DNA có thể được thiết lập lại. DNA plasmid ở dạng siêu xoắn dễ dàng hồi tính trở về hình dạng ban đầu, DNA genome kích thước lớn sẽ bị tủa. Trong khi các DNA plasmid có thể hòa tan dễ dàng trong dung dịch, DNA genome và các protein biến tính sẽ bị kết tủa và được giữ lại trong phức hợp SDSKali. Kết tủa có thể tách ra khỏi dung dịch DNA plasmid bằng cách ly tâm. Các hạt resin silica (SiOH) trong cột tinh sạch tạo liên kết hydro với các gốc PO43 của DNA trong nồng độ muối cao Guanidium HCl giúp DNA bám chặt vào cột. Các tạp như protein, muối, RNA sẽ được rửa giải trước bằng dung dịch rửa giải và DNA còn lại trong cột sẽ được ly giải bởi H2O sau để thu nhận.