Tài liệu CÔNG NGHỆ GIÁM SÁT VI SINH VẬT VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG ppt

CHƯƠNG XIII

CÔNG NGHỆ GIÁM SÁT VI SINH VẬT VÀ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG

 Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức phân tử

Kỹ thuật PCR

Kỹ thuật kiểm tra enzyme vi sinh vật

 Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật ở mức tế bào

Kỹ thuật kiểm tra vi sinh vật phát quang

Kỹ thuật kiểm tra vi khuẩn đánh giá chất lượng nước

Nguyên tắc

Dựa trên sự khuếch đại một trình tự gene đích

 Nguyên lý của real-time PCR

Real-time PCR là một phương pháp pcr mới nó kiểm soát lượng huỳnh quang giải phóng ra trong phản ứng từ đó có thể biết được lượng sản phẩm PCR trong từng thời điểm (chu kỳ) của quá trình khuếch đại, trái ngược vơí PCR truyền thống chỉ biết được lượng sản phẩm được khuếch đại ở thời điểm cuối cùng của phản ứng khuếch đại

 Dựa trên nguyên tắc kháng thể - kháng nguyên

Nguyên tắc:

Dựa vào sự phát hiện ATP thông qua enzyme luciferase  sự phát sáng

- Phát hiện nhanh

- Nhạy vì có thể phát hiện 1 pg ATP tương ứng với 1000 tế bào vi khuẩn

 Dễ bị dương tính giả Chi phí cao

 Kỹ thuật MPN

 Kỹ thuật màng lọc

- Viết tắt: Most Probably Number

- Dựa trên nguyên tắc pha loãng tới hạn

 Mẫu được pha thành một dãy thập phân liên tiếp và mẫu được đưa vào môi trường thích hợp

 Ủ và đọc số ống dương tính

 Tra bảng Mac – crady  tính toán số lượng

MẪU PHA LOÃNG

EC brothEMBIMViC

Coliform chịu nhiệt

E.Coli

Tra bảng

370C/24h

Tra bảng

-10-110-210-3

-10-110-210-3

- Sử dụng để định lượng VSV trong các mẫu lỏng như nước sinh hoạt, nước thải, sữa …

- Sử dụng màng lọc vô trùng có kích thước nhỏ (0,27 m và 0,45 m)

Có 2 loại:

- Coliforms tổng số- E.Coli

- Enterobacteria

Và tùy theo các chỉ tiêu phân tích mà ta sử dụng các loại môi trường thích hợp

Một số thao tác khi sử dụng bộ lọc vi sinh