tcvn6506-1-2015

Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6506-1:2015 ISO 11816-1:2013 SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ PHOSPHATASE KIỀM - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP ĐO HUỲNH QUANG ĐỐI VỚI SỮA VÀ ĐỒ UỐNG TỪ SỮA Milk and milk products - Determination of alkaline phosphatase activity - Part 1: Fluorimetric method for milk and milk-based drinks Lời nói đầu TCVN 6506-1:2015 thay TCVN 6506-1:2007; TCVN 6506-1:2015 hoàn toàn tương đương với ISO 11816-1:2013; TCVN 6506-1:2015 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố; Bộ tiêu chuẩn TCVN 6506 (ISO 11816) Sữa sản phẩm sữa - Xác định hoạt độ phosphatase kiềm gồm phần sau đây: - TCVN 6506-1:2015 (ISO 11816-1:2013), Phần 1: Phương pháp đo huỳnh quang sữa đồ uống từ sữa - TCVN 6506-2:2009 (ISO 11816-2:2003), Phần 2: Phương pháp đo huỳnh quang phomat SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ PHOSPHATASE KIỀM - PHẦN 1: PHƯƠNG PHÁP ĐO HUỲNH QUANG ĐỐI VỚI SỮA VÀ ĐỒ UỐNG TỪ SỮA Milk and milk products - Determination of alkaline phosphatase activity - Part 1: Fluorimetric method for milk and milk-based drinks Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp đo huỳnh quang để xác định hoạt độ phosphatase kiềm (ALP, EC 3.1.3.1) sữa tươi nguyên liệu, sữa nguyên chất qua xử lý nhiệt, sữa tách phần chất béo, sữa gầy sữa có bổ sung hương liệu Phương pháp áp dụng cho sữa đồ uống từ sữa bị, sữa cừu, sữa dê Tiêu chuẩn áp dụng cho sữa bột sau hoàn nguyên Thiết bị đọc hoạt độ đến 000 mili đơn vị lít (mU/l) Nếu hoạt độ lớn 000 mU/l pha lỗng mẫu thử sữa không chứa phosphatase kiềm (7.1) cho thu kết không lớn 000 mU/l Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn áp dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 2.1 Hoạt độ phosphatase kiềm (ALP) (alkaline phosphatase activity) Hoạt độ phosphatase kiềm có mặt sản phẩm, xác định quy trình quy định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH Hoạt độ phosphatase kiềm biểu thị mili đơn vị hoạt độ enzym lít mẫu (mU/I) 2.2 Đơn vị hoạt độ phosphatase kiềm (unit of alkaline phosphatase activity) Lượng enzym phosphatase kiềm xúc tác để biến đổi µmol chất phút Nguyên tắc Hoạt độ phosphatase kiềm mẫu đo cách phân tích động học trực tiếp huỳnh quang liên tục Cơ chất este monophosphoric thơm không phát huỳnh quang, 2’-[2-benzothiazolyl]-6’hydroxybenzothiazol phosphat, có mặt phosphatase kiềm có nguồn gốc từ mẫu, thủy phân phần gốc phosphat tạo sản phẩm phát huỳnh quang cao Việc đo huỳnh quang hoạt độ phosphatase kiềm (ALP) đo nhiệt độ 38 °C thời gian sử dụng chất LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Fluorophos® Việc bao gồm ủ ấm sơ chất mẫu, sau lấy số đọc liên tục tốc độ phản ứng CHÚ THÍCH: Mặc dù quy trình kéo dài min, nhung phút đầu thời gian cân để đảm bảo cho mẫu đạt tới nhiệt độ 38 °C Việc đo hoạt độ thực tế phút thứ hai đến hết phút thứ ba (nghĩa chu kỳ min) Thuốc thử Tất thuốc thử sử dụng phải thuộc loại tinh khiết phân tích nước phải nước cất nước loại khoáng nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác 4.1 Cơ chất1) Fluorophos®, đựng chai, chai chứa 144 mg bột chất Fluorophos®, khối lượng phân tử 580 g/mol Fluorophos® loại chất este monophosphoric thơm không phát huỳnh quang, 2’-[2benzothiazolyl]- 6’-hydroxybenzothiazol phosphat (Fluorophos®) Cơ chất Fluorophos® bền năm kể từ ngày sản xuất bảo quản chai đậy kín, nhiệt độ từ °C đến °C, tránh ánh sáng 4.2 Dung dịch đệm chất, dung dịch đệm dietanolamin (DEA), c(DEA) = 2,4 mol/l có pH 10,0, đựng chai 240 ml Dung dịch đệm cho chất bền năm kể từ ngày sản xuất bảo quản chai đậy kín, nhiệt độ từ °C đến °C, tránh ánh sáng 4.3 Cơ chất làm việc Để chất Fluorophos® (4.1) dung dịch đệm cho chất (4.2) đạt đến nhiệt độ phòng Cho lượng dung dịch đệm chất chứa chai (240 ml) (4.2) vào chai đựng chất Fluorophos® (144 mg) (4.1) lắc kỹ cách đảo chiều vật chứa để tạo dung dịch 1,0 milimol (pH 10) Sử dụng chai màu nâu để bảo vệ tránh ánh sáng Để yên dung dịch thu nhiệt độ phịng 30 trước sử dụng Dùng phép thử A/D (tương tự kỹ thuật số) 8.2 để kiểm tra tính ổn định dung dịch chất làm việc sẵn sàng để sử dụng Không sử dụng dung dịch chất làm việc có số đọc 1200 FLU (đơn vị huỳnh quang) thu (8-2) Cơ chất làm việc bền 60 ngày bảo vệ tránh ánh sáng bảo quản nhiệt độ từ °C đến °C, h bảo quản 38 °C CHÚ THÍCH: Thể tích chất làm việc thu (240 ml) đủ cho khoảng 115 phép thử 4.4 Dung dịch hiệu chuẩn, Fluoroyellow®(FY) [2’-(2-benzothiazolyl)-6’-hydroxybenzothiazol] dung dịch đệm chất (4.2) Các dung dịch hiệu chuẩn bền 18 tháng kể từ ngày sản xuất bảo quản chai kín nhiệt độ từ °C đến °C Lắc trộn nhẹ trước sử dụng để đảm bảo thu kết tối ưu 4.4.1 Dung dịch hiu chun A, cha àmol/l Fluoroyellowđ 4.4.2 Dung dch hiu chun B, cha 17,24 x 10-3 àmol/l Fluoroyellowđ 4.4.3 Dung dịch hiệu chuẩn C, chứa 34,48 x 10-3 µmol/l Fluoroyellow® 4.5 Dung dịch kiểm sốt thiết bị hàng ngày, cha 34,48 x 10-3 àmol/l Fluoroyellowđ Cỏc dung dch kim sốt thiết bị hàng ngày bền 18 tháng kể từ ngày sản xuất bảo quản chai kín nhiệt độ từ °C đến °C Lắc trộn nhẹ trước sử dụng để đảm bảo thu kết thích hợp Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phịng thử nghiệm thơng thường thiết bị dụng cụ sau: Các thuốc thử quy định 4.1 đến 4.5 dụng cụ quy định 5.1 đến 5.4 (trừ 5.3) có sẵn Hệ thống thử nghiệm Fluorophos Hãng Advanced istruments Inc., Two technology Way, Norwood, MA 02062, USA Nhà sản xuất thay đổi hình dạng bao gói Hệ thống thử nghiệm Fluorophos cung cấp Người sử dụng cần tham khảo dẫn nhà sản xuất chuẩn bị thuốc thử khác với quy định tiêu chuẩn Fluorophos Fluoroyellow nhãn hiệu thương mại đăng ký Hãng Advanced Instruments Inc ví dụ sản phẩm thương mại phù hợp sẵn có Thơng tin đưa để tiện lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn Không ấn định phải sử dụng sản phẩm 1) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 5.1 Máy đo huỳnh quang có lọc, có đỡ cuvet kiểm sốt nhiệt độ ổn định, hoạt động 38 °C ± °C, phận quang học góc vng, kích thích bước sóng 440 nm phát xạ 520 nm đến 560 nm [ví dụ: thiết bị Fluorophos®1)] 5.2 Cuvet, dùng lần, thủy tinh khơng phát huỳnh quang 5.3 Pipet 5.3.1 Bộ phận phân phối thể tích cố định, để phân phối 2,0 ml 5.3.2 Pipet dạng xyranh hút loại tương tự, dung tích 0,075 ml Cần thực theo hướng dẫn nhà sản xuất kỹ thuật sử dụng pipet để thu kết xác Đảm bảo pitơng pipet kín trước sử dụng 5.3.3 Pipet, dung tích ml ml 5.4 Tủ ấm, thích hợp để giữ cuvet có khả trì nhiệt độ 38 °C ± 0C 5.5 Film, loại dùng cho phòng thử nghiệm 5.6 Máy trộn Vortex 5.7 Nồi cách thủy, có khả trì nhiệt độ 63 °C ± °C 95 °C ± °C 5.8 Bình định mức vạch, dung tích 100 ml Lấy mẫu Việc lấy mẫu khơng quy định tiêu chuẩn này, nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng thay đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Chuẩn bị 7.1 Sữa không chứa phosphatase kiềm Chuẩn bị sữa không chứa phosphatase kiềm dạng với mẫu cần phân tích, cách chuyển cẩn thận lượng sữa vào ống nghiệm vật chứa thích hợp, khơng để sữa chạm vào mép cạnh vật chứa Đặt ống thử vật chứa phần mẫu sữa nồi cách thủy (5.7) để 95 °C Làm nóng sơ phần mẫu sữa đến 95 °C, trước bắt đầu giai đoạn đun nóng nhiệt độ Kiểm tra nhiệt độ cách sử dụng nhiệt kế đầu dò nhiệt đặt vào ống vật chứa Khi nhiệt độ phần mẫu thử đạt đến 95 °C, bắt đầu đun Làm nguội nhanh mẫu sau giai đoạn đun nóng Kiểm tra phần mẫu thử xử lý để chắn hoạt độ ALP mẫu nhỏ 10 mU/l 7.2 Chuẩn bị mẫu thử 7.2.1 Yêu cầu chung Trộn kỹ tất mẫu thử trước sử dụng CHÚ THÍCH: Thơng thường, mẫu thử nghiệm không cần phải lầm ấm sơ 7.2.2 Mẫu thử trùng Sử dụng lượng cần thiết mẫu thử trùng 7.2.3 Pha loãng mẫu thử có giá trị ALP cao Chuẩn bị dịch pha lỗng mẫu sữa khơng có phosphatase (7.1) để đưa mức ALP nằm dải phân tích phép thử (< 000 mU/l) Trộn kỹ dung dịch pha loãng Cách tiến hành 8.1 Đánh giá hiệu thiết bị 8.1.1 Yêu cầu chung Cần đánh giá hiệu thiết bị độ trôi, ánh sáng phân tán độ ổn định trước phân tích mẫu thử Tuân theo nguyên tắc Thực hành Phòng thử nghiệm Tốt vận hành máy đo huỳnh quang có lọc (5.1) Các phép thử kiểm soát chất lượng bao gồm: LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn a) phép thử A/D (analog-to-digital) hàng ngày, dùng để kiểm tra chức thiết bị b) phép thử kiểm soát thiết bị hàng ngày, sử dụng dung dịch kiểm soát thiết bị hàng ngày (4.5) để theo dõi độ trôi quang học điện tử máy đo huỳnh quang; c) nên sử dụng phép kiểm sốt chuẩn, dương tính âm tính bên ngoài, 8.1.3, để theo dõi hàng ngày thông số độ chụm thiết bị 8.1.2 Phép thử AID 8.1.2.1 Khi sử dụng thiết bị Fluorophos®, thực phép thử A/D hàng ngày trước bắt đầu thử nghiệm 8.1.2.2 Thực phép thử A/D qua bảng chọn “SETUP” Ấn phím “SETUP”, chọn “phép thử A/D” cách án Khi giá đỡ cuvet trống, ấn “START”, Để cho số hiển thị ổn định, số hiển thị phải 302 ± Nếu số đọc nằm ngồi dải này, làm lọc kích thích phát xạ lặp lại phép thử A/D 8.1.2.3 Chuyển 2,0 ml dung dịch kiểm soát thiết bị hàng ngày (4.5) vào cuvet dán nhãn Đặt cuvet vào tủ ấm (5.4) 38 °C 20 Đặt cuvet làm ấm sơ vào giá đỡ Đậy nắp Khi số hiển thị ổn định, ghi lại giá trị hiển thị, giá trị phải 602 ± 12 Nếu nằm dải này, sử dụng tua vít vặn từ từ vít dụng cụ đo điện phía tay trái theo chiều kim đồng hồ ngược chiều kim đồng hồ thiết bị, số đọc hiển thị 602, cần Để số đo ổn định 15 8.1.3 Kiểm soát Tiến hành phép kiểm sốt dương tính, âm tính PhosphaCheck-N 2) sử dụng sữa bột có phosphatase chất bảo quản Các chất kiểm soát trùng PhosphaCheck bền 18 tháng bảo quản chai kín nhiệt độ từ °C đến °C Khi hoàn nguyên, dung dịch bền ngày bảo quản nhiệt độ từ °C đến °C Không làm đông lạnh Để chất kiểm sốt cân đến nhiệt độ phịng Hồn ngun chất kiểm sốt trùng PhosphaCheck® trước sử dụng Mở nắp đậy kim loại cao su, thêm 3,0 ml nước loại ion nhiệt độ phòng Đậy nắp lắc nhẹ cách đảo chiều vật chứa để yên 15 Không lắc vật chứa để chất kiểm soát tạo bọt Trộn nhẹ vật chứa trước lần sử dụng để thu kết tối ưu Sau hiệu chuẩn kênh chưa sử dụng chất kiểm sốt âm tính, phân tích ba dung dịch chất kiểm sốt (dương tính, âm tính PhosphaCheck-N™) cách cho 75 µl dung dịch kiểm soát vào ml chất làm ấm sơ Thực phép thử ALP Số đọc kiểm sốt âm tính phải nhỏ 10 mU/l, chất chuẩn PhosphaCheck-N™ phải khoảng từ 10 mU/l đến 40 mU/l kiểm sốt dương tính phải (500 ± 100) mU/l Hàng ngày sử dụng chất kiểm soát để theo dõi độ chụm thiết bị 8.2 Kiểm soát thuốc thử để kiểm tra phù hợp chất làm việc sử dụng Phân phối 2,0 ml chất làm việc (4.3) vào cuvet dán nhãn Đặt cuvet vào tủ ấm (5.4) 38 °C 20 Đặt cuvet làm ấm sơ có chứa chất làm việc vào giá đỡ cuvet Đậy nắp Khi số hiển thị ổn định, ghi lại giá trị hiển thị Dung dịch chất vừa pha chế theo phương thức A/D thường cho số đọc hiển thị khoảng 650 FLU tăng dần theo thời gian Không sử dụng chất làm việc số đọc hiển thị thu 200 FLU 8.3 Hiệu chuẩn Các đường chuẩn phải ổn định Tuy nhiên, cần phải hiệu chuẩn lại thiết bị bắt đầu lắp đặt máy đo huỳnh quang, bảo dưỡng (ví dụ: thay đèn lọc) mà ảnh hưởng đến việc hiệu chuẩn, giá trị kiểm soát thử nghiệm cho kết khơng chấp nhận Nếu có thay đổi đường chuẩn, hiệu chuẩn lại thiết bị sử dụng dãy dung dịch Các hướng dẫn kiểm soát đánh giá hiệu thiết bị sản phẩm áp dụng hãng Advanced Instruments, Inc.,Two Technology Way, Norwood, Massachusetts 02062, USA Thông tin đưa để tiện lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn Không ấn định phải sử dụng sản phẩm Các sản phẩm tương tự sử dụng đưa kết tương đương 2) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn hiệu chuẩn A, B C (4.4.1,4.4.2 4.4.3) Dựng đuờng chuẩn cho loại sản phẩm cần thử nghiệm Trộn dung dịch hiệu chuẩn A, B C cách đảo nhẹ vật chứa trước sử dụng Dùng pipet (5.3.3) chuyển tương ứng 2,0 ml dung dịch hiệu chuẩn A, B C (4.4.1, 4.4.2 4.4.3), lần lấy hai mẫu vào sáu cuvet dán nhãn trước (5.2) Đặt cuvet vào tủ ấm (5.4) để 38 °C làm nóng sơ 20 Dùng pipet (5.3.2) chuyển 0,075 ml sữa khơng có phosphatase kiềm (7.1) vào tất sáu cuvet Dùng film (5.5) đậy cuvet lại Trộn máy trộn Vortex (5.6) s, cách lắc đảo chiều nhẹ cuvet Đặt lại cuvet vào tủ ấm (5.4) Hoàn tất việc hiệu chuẩn vòng 10 sau cho mẫu thử vào máy hiệu chuẩn Bắt đầu tiến hành từ dung dịch hiệu chuẩn A, thực quy trình hiệu chuẩn thơng thường sau Dùng khăn mềm lau phía ngồi cuvet trước đặt chúng vào máy đo huỳnh quang có lọc (5.1) Khi sử dụng thiết bị Fluorophos®, ấn “CALIB” chọn chế độ “APL Dairy” Kéo cuộn bảng chọn ấn ‘‘ENTER” sản phẩm cần hiệu chuẩn hiển thị Bắt đầu dung dịch hiệu chuẩn A (4.4.1), cho dung dịch vào máy đo huỳnh quang ấn “START” Khi kết thúc việc đo, đo dung dịch hiệu chuẩn A thứ hai Thực quy trình tương tự dung dịch hiệu chuẩn B (4.4.2) C (4.4.3) kết thúc quy trình Thiết bị Fluorophos® tự động tính lượng huỳnh quang thu với dung dịch B C dựa theo dung dịch A tỷ lệ hiệu chuẩn nằm dải thiết bị Khi việc hiệu chuẩn kết thúc, tiến hành phân tích mẫu thử 8.4 Xác định Dùng pipet phân phối thể tích cố định (5.3.1) chuyển 2,0 ml chất làm việc (4.3) vào cuvet dán nhãn Đặt cuvet vào tủ ấm (5.4) để 38 °C gia nhiệt 20 Dùng pipet (5.3.2) cho thêm 0,075 ml phần mẫu thử trộn (7.2.2 7.2.3) vào chất Đậy cuvet lại film (5.5) Trộn lượng chứa cuvet máy trộn Vortex (5.6) s, cách đảo chiều nhẹ cuvet Lau khơ thành ngồi cuvet giấy mềm đặt cuvet vào máy đo huỳnh quang có lọc (5.1) Thực phép thử 20 s sau cho mẫu thử vào chất Khi dùng thiết bị Fluorophos®, ấn phím “TEST”, “ALP Dairy” xuất ấn “ENTER” Kéo cuộn bảng chọn ấn “ENTER” sản phẩm cần hiệu chuẩn hiển thị Rồi ấn phím “START” để bắt đầu thử nghiệm Việc hiển thị đếm giảm dần 60 s chất mẫu giữ ấm đến 38 °C Sau 60 s, máy huỳnh quang bắt đầu đo, hiển thị huỳnh quang mẫu đơn vị huỳnh quang (FLU) Việc hiển thị bắt đầu khoảng 200 FLU tăng chậm đần tiếp theo, cuối giai đoạn min, thiết bị Fluorophos® thực tự động phép tính cần thiết hiển thị số nhận biết mẫu, hoạt độ ALP tính theo mili đơn vị lít giá trị trung bình tăng dần huỳnh quang, trước chọn Thơng tin sau in Nếu kết phải tính thủ cơng (9.2), chia chênh lệch hai số đọc huỳnh quang cho khoảng thời gian (tính theo phút) để thu trung bình tăng dần huỳnh quang phút (F/min) Dùng giá trị F/min để tính hoạt độ ALP mẫu thử Nếu hoạt độ lớn 000 mU/l, pha lỗng mẫu sữa khơng có phosphatase kiềm (7.1) cho thu kết nhỏ 000 mU/l Thiết bị Fluorophos® hiển thị in dịng thơng báo “Sai số: Số đọc không ổn định, lặp lại phép thử” Đối với kết thấp (thường nhỏ FLU/min), thường số đọc không ổn định, để cuvet mẫu buồng thiết bị Fluorophos® thực phép xác định khác Sau thường thu kết hợp lý Tuy nhiên, lại thu sai số đọc khơng ổn định lặp lại toàn phép xác định với mẫu thử 8.5 Phép kiểm soát liên quan đến mẫu thử 8.5.1 Phép thử kiểm sốt dương tính âm tính 8.5.1.1 Phép thử kiểm sốt âm tính Bao gồm phép thử kiểm sốt âm tính với mẻ mẫu thử Gia nhiệt mẫu thử 7.1 Số đọc thiết bị phải nhỏ 10 mU/l 8.5.1.2 Phép thử kiểm sốt dương tính Bao gồm nhiều phép kiểm sốt dương tính với mẻ mẫu thử Chuẩn bị mẫu thử mức gần mức định sử dụng mẫu sữa nguyên liệu pha lỗng với sữa khơng có phosphatase (7.1) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 8.5.2 Phép thử chất gây nhiễu Khi thu giá trị ALP lớn giá trị mong đợi, dùng pipet (5.3.2) thêm 0,075 ml phần mẫu thử (7.2.2 7.2.3) vào cuvet chứa 2,0 ml dung dịch hiệu chuẩn A (4.4.1), trước làm ấm sơ tủ ấm (5.4) để 38 °C 20 trộn Đặt cuvet chứa hỗn hợp vào thiết bị Fluorophos® (5.1) thử nghiệm theo 8.4 Nếu giá trị thu vượt 20 mU/l, chứng tỏ có mặt chất gây nhiễu Trong trường hợp này, lặp lại phép thử, sử dụng mẫu 8.5.3 Phép thử kiểm soát phosphatase kiềm vi khuẩn bền nhiệt Nếu kết phép xác định 8.4 cho kết cao dự kiến thực sau: Cho phần mẫu thử khác (7.2.2 7.2.3) vào ống nghiệm Đặt nhiệt kế đầu dò nhiệt vào ống đặt tất vào nồi cách thủy (5.7) để 63 °C Khi nhiệt độ phần mẫu thử đạt đến 63 °C, giữ nhiệt độ 30 min, làm nguội nhanh Xác định hoạt độ phosphatase cịn sót lại theo 8.4 Vẫn hoạt độ có mặt phosphatase kiềm vi khuẩn bền nhiệt Tính biểu thị kết 9.1 Tỷ lệ hiệu chuẩn Các kết tính tự động thiết bị Fluorophos®, cách xây dựng thuật tốn đưa vào thiết bị đo huỳnh quang có lọc (5.1) Nếu kết tính tay tiến hành sau: Ghi lại giá trị huỳnh quang dung dịch hiệu chuẩn B (4.4.2) dung dịch hiệu chuẩn C (4.4.3), dựa vào dung dịch hiệu chuẩn A (4.4.1), chỉnh mức huỳnh quang máy đo huỳnh quang có lọc (5.1) zero Tính tỷ lệ hiệu chuẩn, K, cơng thức (1): (1) K tỷ lệ hiệu chuẩn đường chuẩn thiết lập; FC giá trị huỳnh quang thu cách đo dung dịch hiệu chuẩn C(4.4.3) dựa vào dung dịch hiệu chuẩn A (4.4.1) đặt mức huỳnh quang zero (xem 8.3); FB giá trị huỳnh quang thu cách đo dung dịch hiệu chuẩn B (4.4.2) dựa vào dung dịch hiệu chuẩn A (4.4.1) đặt mức huỳnh quang zero (xem 8.3) 9.2 Tính kết Tính hoạt độ phosphatase kiềm, Ap, theo cơng thức sau đây: Trong Ap hoạt độ phosphatase kiềm mẫu thử (7.2.2 7.2.3), tính mili đơn vị hoạt tính enzym lit; Fav lượng huỳnh quang trung bình phần mẫu thử (8.4) phát min, đo dựa vào dung dịch hiệu chuẩn A (xem 8.3) thời điểm bắt đầu phút thứ hai đến cuối phút thứ ba; CB nồng độ Fluoroyellow® dung dịch hiệu chuẩn B (4.4.2), tính micromol ml dung dịch hiệu chuẩn; f giá trị hệ số chuyển đổi tử đơn vị mililit sang mili đơn vị lít; f = x 106; trường hợp mẫu thử pha loãng để thu hoạt độ nhỏ 000 mU/l f = (hệ số pha lỗng mẫu thử) x 10® V thể tích phần mẫu thử, tính mililit (ml) LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 9.3 Biểu thị kết Biểu thị kết đến đơn vị số nguyên gần mili đơn vị 10 Độ chụm 10.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp đưa phụ lục A Các giá trị giới hạn độ lặp lại độ tái lập biểu thị mức xác suất 95 % khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu 10.2 Độ lặp lại Đối với giá trị nhỏ 125 mU/l chênh lệch tuyệt đối hai kết thử độc lập riêng rẽ thu sử dụng phương pháp thử, tiến hành nguyên liệu thử, phòng thử nghiệm, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn 14 mU/l Đối với giá trị lớn 125 mU/l nhỏ 620 mU/l chênh lệch tuyệt đối hai kết thử độc lập riêng rẽ thu sử dụng phương pháp thử, tiến hành nguyên liệu thử, phòng thử nghiệm, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn 12 % trung bình hai kết 10.2 Độ tái lập Đối với giá trị nhỏ 125 mU/l chênh lệch tuyệt đối hai kết thử riêng rẽ thu áp dụng phương pháp, tiến hành mẫu thử, thực phòng thử nghiệm khác nhau, kỹ thuật viên khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp lớn lớn 23 mU/l Đối với giá trị lớn 125 mU/l nhỏ 620 mU/l chênh lệch tuyệt đối hai kết thử riêng rẽ thu áp dụng phương pháp, tiến hành mẫu thử, thực phòng thử nghiệm khác nhau, kỹ thuật viên khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp lớn 24 % trung bình hai kết 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) tất điều kiện thao tác không quy định tiêu chuẩn này, xem tùy ý, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết e) kết thử nghiệm thu đáp ứng yêu cầu độ lặp lại ghi kết cuối thu Phụ lục A (Tham khảo) Phép thử liên phòng thử nghiệm Một phép thử liên phòng thử nghiệm bao gồm 13 phòng thử nghiệm từ bảy quốc gia (Mỹ, Anh, Pháp, Nauy, Italia, Hà lan, Thuy Sỹ) tham gia thử nghiệm theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) phòng thử nghiệm QuadraChem Frank Harding tổ chức, thực bốn loại mẫu sữa bò (sữa nguyên chất, sữa tách phần chất béo, sữa gầy sữa bổ sung hương liệu), sữa dê nguyên chất sữa cừu nguyên chất Phép thử kết thúc vào tháng năm 2004 CHÚ THÍCH 1: Chỉ có kết sữa bổ sung hương liệu, sữa cừu nguyên chất sữa dê thực tháng n8m 2004 báo cáo Phụ lục Các kết nghiên cứu sữa bò (sữa nguyên chất, sữa tách phần chất béo, sữa gầy) bổ sung vào năm 2008 Một nghiên cứu cộng tác khác ANSES Marina Nicolas tổ chức, gồm có 19 phịng thử nghiệm 18 quốc gia (Bắc Ailen, Pháp, ủc, Thụy Sĩ, Hungari, Ailen, NaUy, Đức, Phần Lan, Bỉ, Tây Ban Nha, Síp, Bungari, Bồ Đào Nha, New Zealand, Séc Hy Lạp) thực theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) sữa bò (nguyên chất, tách phần chất béo sữa gầy) Phép thử kết thúc tháng năm 2008 Dữ liệu thu sau thay cho liệu năm 2004 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Một nghiên cứu cộng tác khác ANSES Marina Nicolas tổ chức thực theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) sữa dê tách phần chất béo xử lý UHT Phép thử kết thúc tháng 12 năm 2010 Dữ liệu thu báo cáo Các kết thu được phân tích thống kê theo TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) TCVN 6910-2 {ISO 5725-2) độ chụm phương pháp nêu Điều 10 Các mức enzym trung bình thực tế mẫu nghiên cứu nêu Bảng A.1 Bảng A.2 Bảng A.3 đưa giá trị giới hạn lặp lại tái lập Bảng A.4 Bằng A.5 đưa hệ số biến thiên độ lặp lại độ tái lập tương ứng CHÚ THÍCH 2: Chuẩn tạo từ liệu Bảng A.2, A.3, A.4 A.5 để kiểm sốt hiệu phịng thử nghiệm Báo cáo toàn diện nghiên cứu ban đầu xuất Tài liệu tham khảo [5] báo cáo nghiên cứu bổ sung Phịng thí nghiệm chuẩn Liên minh Châu Âu sữa sản phẩm sữa, ANSES (EX-AFSSA), ủy ban An toàn Thực phẩm Pháp xuất Bảng A.1 - Giá trị enzym trung bình (mU/l) mức nghiên cứu mẫu Mức enzym đích Loại mẫu 20 40 100 350 500 (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) Sữa bò nguyên chất 24 40 120 350 488 Sữa bò tách phần chất béo 27 40 124 345 479 Sữa bò tách chất béo 31 42 96 349 449 - 54 108 436 618 Sữa cừu nguyên chất 31 47 110 428 608 Sữa dê nguyên chất 22 47 125 407 570 Sữa dê tách phần chất béo 29 57 110 317 474 Sữa bò bổ sung hương vị a a Sữa bổ sung hương vị dâu Bảng A.2- Các giá trị giới hạn lặp lại, r Mức enzym đíchb Loại mẫu 20 40 100 350 500 (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) Sữa bò nguyên chất 11 17 32 37 Sữa bò tách phần chất béo 16 18 30 45 Sữa bò tách chất béo 17 11 12 25 20 - 20 16 59 59 Sữa cừu nguyên chất 10 16 34 97 100 Sữa dê nguyên chất 26 43 29 Sữa dê tách phần chất béo 9 12 26 22 Sữa bò bổ sung hương vị a a Sữa bổ sung hương vị dâu; b Các giá trị liên quan đến giá trị trung bình nêu bảng A.1 khơng phải giá trị đích Bảng A.3 - Các giá trị giới hạn tái lập, R Mức enzym đíchb Loại mẫu 20 40 100 350 500 (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) Sữa bò nguyên chất -10 16 18 70 100 Sữa bò tách phần chất béo 14 18 27 78 86 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn Mức enzym đíchb Sữa bị tách chất béo Loại mẫu 28 21 19 86 75 - 34 35 131 169 Sữa cừu nguyên chất 17 20 47 170 233 Sữa dê nguyên chất 11 21 29 128 88 Sữa dê tách phần chất béo 18 26 20 64 62 Sữa bò bổ sung hương vịa a Sữa bổ sung hương vị dâu; b Các giá trị liên quan đến giá trị trung bình nêu bảng A.1 khơng phải giá trị đích Bảng A.4 - Hệ số biến thiên lặp lại, Cv,r Các giá trị tính phần trăm Mức enzym đíchb Loại mẫu 20 40 100 350 500 (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) Sữa bò nguyên chất 13 10 Sữa bò tách phần chất béo 14 3 Sữa bò tách chất béo 19 - 13 5 Sữa cừu nguyên chất 12 12 11 Sữa dê nguyên chất 14 Sữa dê tách phần chất béo 10 Sữa bò bổ sung hương vịa a Sữa bổ sung hương vị dâu; b Các giá trị liên quan đến giá trị trung bình nêu bảng A.1 khơng phải giá trị đích Bảng A.5 - Hệ số biến thiên tái lập, CV.R, Các giá trị tính phần trăm Mức enzym đíchb Loại mẫu 20 40 100 350 500 (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) (mU/l) Sữa bò nguyên chất 15 14 7 Sữa bò tách phần chất béo 18 16 8 Sữa bò tách chất béo 31 18 - 22 11 10 10 Sữa cừu nguyên chất 19 15 15 14 13 Sữa dê nguyên chất 17 15 11 Sữa dê tách phần chất béo 22 16 Sữa bò bổ sung hương vị a a Sữa bổ sung hương vị dâu; b Các giá trị liên quan đến giá trị trung bình nêu bảng A.1 khơng phải giá trị đích CHÚ THÍCH: Hiện chưa có đủ liệu trường hợp sữa bị để tính giá trị CVr CVR mức hoạt độ 20 mU/l thiết bị Fluorophos® ghi lại giá trị < 10 mU/l giá trị ALP thấp không đưa vào phân tích thống kê Điều có nghĩa tất giá tri báo cáo < 10 mU/l khơng đưa vào phân tích thống kê LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1 ] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Nguyên tắc định nghĩa chung [3] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 2: Phương pháp xác định độ lặp lại độ tái lập phương pháp đo tiêu chuẩn [4] International Union of Biochemistry Nomenclature JAMA 1988, 260 (73) [5] HARDING, F and GARRY, E Collaborative evaluation of a fluorimetric method for measuring alkaline phosphatase activity in cow’s, sheep’s and goat’s milk J Food Prot 2005, 68 (5) pp 1047-53 LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162