86 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Loài tiên mao trùng Trypanosoma evansi ký sinh trùng đơn bào đường máu (Protozoa) thuộc lớp trùng roi (Flagellata) có tầm quan trọng lớn ngành Thú y Bệnh Trypanosoma evansi thấy phổ biến loài gia súc như: trâu, bò, dê, ngựa, hươu, lạc đà…, bệnh gây nhiều thiệt hại kinh tế nước châu Phi, Nam Mỹ châu Á vùng có số lượng gia súc chết hàng năm lớn Trypanosoma evansi gây nên (Brun R cs., 1998 [31]) Theo Phan Văn Chinh (2006) [1]: Bệnh tiên mao trùng xuất nhiều vùng nước, với tỷ lệ mắc cao: trâu 13 – 30 %, bò – 14 %, tỷ lệ gia súc chết số gia súc mắc bệnh lên tới 6,3 – 20 % Trong năm gần đây, với phát triển kinh tế quốc dân, ngành chăn nuôi nói chung chăn ni trâu nói riêng có bước phát triển vượt bậc, trở thành ngành sản xuất quan trọng, bước góp phần cung cấp thực phẩm cho xã hội có đóng góp tích cực vào mục tiêu xóa đói giảm nghèo Chăn ni trâu nguồn cung cấp thực phẩm thịt, sữa cho người, sức kéo nguồn phân bón lớn cho sản xuất nông nghiệp Hiện nay, nhiều bệnh vi trùng vi rút gây có vắc xin phòng bệnh Song hầu hết bệnh ký sinh trùng chưa có vắc xin phòng bệnh nên bệnh xảy phổ biến gây thiệt hại lớn cho chăn ni Trâu, bị mắc bệnh tiên mao trùng thường gầy yếu, chậm sinh trưởng, phát triển Có nhiều trâu, bị mang mầm bệnh không phát bệnh, sức đề kháng giảm lúc bệnh tiên mao trùng phát gây chết nhiều gia súc suy nhược, thiếu máu, khả lao tác, giảm phẩm chất thịt, đồng thời hội để bệnh truyền nhiễm kế phát, gây thiệt hại lớn cho chăn nuôi Chi Lăng huyện có địa hình đồi núi chiếm 80%, khí hậu nhiệt đới gió mùa, thời tiết nóng ẩm, mưa nhiều điều kiện thuận lợi cho ruồi, mòng (vật môi giới trung gian truyền bệnh tiên mao trùng) phát triển Sự lây lan bệnh phụ 87 thuộc nhiều vào phát triển ruồi, mòng Chúng hút máu, truyền bệnh tiên mao trùng từ trâu bệnh sang trâu khỏe, làm cho bệnh phát tán lây lan Theo số liệu thống kê phòng thống kê huyện Chi Lăng, tính đến thời điểm cuối năm 2014, tổng đàn trâu huyện Chi Lăng 15.590 Trong thời gian qua, giống nhiều địa phương khác, cơng tác giống, chăm sóc ni dưỡng phịng chống dịch bệnh, đặc biệt việc phòng trị bệnh tiên mao trùng chưa trọng Hàng năm, trâu bị ốm chết nhiều vụ Đông - Xuân, thời tiết giá lạnh thức ăn trở nên khan Cơ sở hạ tầng phục vụ công tác chẩn đoán điều trị bệnh cho đàn gia súc địa phương nhiều hạn chế, dẫn tới hệ bệnh tiên mao trùng trở nên phổ biến hơn, nghiêm trọng gây thiệt hại lớn Qua phân tích mức độ phổ biến thiệt hại kinh tế bệnh tiên mao trùng gây trâu Việt Nam, đặc biệt khó khăn cơng tác phịng trị bệnh, chúng tơi thực đề tài: “Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ, ứng dụng kit CATT chẩn đoán bệnh tiên mao trùng Trypanosoma evansi gây trâu huyện Chi Lăng, tỉnh Lạng Sơn biện pháp phòng trị” Mục tiêu đề tài - Xác định số đặc điểm dịch tễ bệnh T evansi gây đàn trâu huyện Chi Lăng, tỉnh Lạng Sơn - Ứng dụng kit CATT chẩn đoán bệnh tiên mao trùng cho trâu địa phương nghiên cứu - Lựa chọn phác đồ điều trị bệnh tiên mao trùng có hiệu quả, phù hợp với điều kiện chăn nuôi huyện Chi Lăng, tỉnh Lạng Sơn Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học Kết đề tài thông tin khoa học có giá trị đặc điểm dịch tễ, phương pháp chẩn đoán bệnh Trypanosoma evansi gây biện pháp phòng chống bệnh tiên mao trùng đàn trâu huyện Chi Lăng, tỉnh Lạng Sơn 88 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết đề tài sở khoa học khuyến cáo người chăn ni áp dụng biện pháp chẩn đốn phịng, trị bệnh tiên mao trùng, nhằm hạn chế tỷ lệ nhiễm thiệt hại tiên mao trùng gây ra, góp phần nâng cao suất chăn nuôi trâu địa bàn huyện Chi Lăng nói riêng tỉnh Lạng Sơn nói chung Những đóng góp đề tài - Đề tài cơng trình nghiên cứu có tính hệ thống bệnh tiên mao trùng loài Trypanosoma evansi gây đàn trâu huyện Chi Lăng - Xây dựng biện pháp phòng, trị bệnh tiên mao trùng có hiệu cao đàn trâu huyện Chi Lăng, khuyến cáo áp dụng rộng rãi nông hộ chăn nuôi trâu tỉnh Lạng Sơn 89 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI Hiện nhiều loài tiên mao trùng phát máu nhiều lồi động vật, lồi đơn bào Trypanosoma evansi ký sinh gây bệnh cho động vật đóng vai trò quan trọng Bệnh tiên mao trùng Blanchard (1888) phát Việt Nam Sau đó, bệnh thấy phổ biến hầu hết tỉnh thành nước Trâu, bò, ngựa,… mắc bệnh bị thiếu máu, suy nhược, giảm khả sinh sản sức sản xuất, mắc bệnh nặng súc vật dễ chết 1.1.1 Đặc điểm, hình thái, cấu trúc phân loại tiên mao trùng 1.1.1.1 Đặc điểm, hình thái, cấu tạo tiên mao trùng Theo Phạm Văn Khuê cs (1996) [7], T evansi loài đơn bào ký sinh ngồi hồng cầu, có hình thoi, dài 18-34 μm, thân có roi bắt nguồn thể hình roi, cách khoảng 1,5 μm Roi chạy dọc thân tạo thành nhiều màng rung động, cuối roi lơ lửng phần đầu thành roi tự dài μm Nhờ có roi, màng rung động mà T evansi chuyển động máu động vật Tiêu máu nhuộm Giemsa, nguyên sinh chất bắt màu xanh nhạt, nhân bắt màu hồng Tiên mao trùng ký sinh máu số tổ chức động vật có xương sống, truyền từ động vật bệnh sang động vật khoẻ theo phương thức giới nhờ trùng hút máu họ mịng Tabanidae, họ ruồi Stomoxydinae Theo Verma B B Gautam O P (1978) [106], người ta đưa khái niệm để phân biệt hình thái tiên mao trùng theo dạng: Trypamastigote: Tiên mao trùng có hình dạng bình thường Spimastigote: Tiên mao trùng có hình thái Crithidia Chosnomastigote: Tiên mao trùng có roi chạy thẳng theo thân, khơng tạo thành màng rung động, khơng có nếp gấp khúc Promastigote: Tiên mao trùng có hình thái giống Leptomonas 90 Amastigote: Tiên mao trùng có hình thái giống Leishmanian Phaeromastigote: Tiên mao trùng có hình thái giống Leishmania có roi có đoạn tự thân Khi rung động, roi tự vung phía trước màng rung chuyển động giúp cho tiên mao trùng di chuyển nhanh máu vật chủ (Phạm Sỹ Lăng, 1982) [11] Cấu trúc T evansi giống cấu trúc loài tiên mao trùng khác thuộc họ Trypanosomatidae Cấu trúc từ ngồi vào chia thành phần chính: Vỏ: Ngồi lớp vỏ hay cịn gọi màng bao (periplast) dày - 10 nm, vỏ chia làm lớp (lớp ngoài, lớp lớp trong; lớp lớp tiếp giáp với nguyên sinh chất dày lớp giữa) Lớp vỏ cấu tạo từ phân tử glycoprotein Lớp vỏ (Variant Glycoprotein Surface -VGS) có khả biến đổi, nhờ mà kí sinh trùng né tránh đáp ứng miễn dịch vật chủ Tiếp giáp với lớp cặp vi ống xếp song song dọc theo chiều dài thân tiên mao trùng Chính nhờ xếp cặp vi ống nên tiên mao trùng có hình dạng suốt mảnh Ngun sinh chất: gồm lớp lớp Trong nguyên sinh chất có chứa nội quan: ribosome có màu thẫm xen kẽ vùng không bào màu sáng, mitochrondno, reticulum (lưới nội bào), mạng lưới Golgi đặc biệt kinetoplast (thể động) - nơi roi sinh chứa ADN điểm riêng tiên mao trùng Lượng kADN chiếm khoảng 10 - 20% ADN toàn thể, bao gồm loại cấu trúc vịng ADN là: vịng lớn (maxicircles) vịng nhỏ (minicircles) Nhân: Nhân tiên mao trùng vị trí khác thể tiên mao trùng, nhiên xuất máu thường thấy phía bên tiên mao trùng Chứa ADN, hình bầu dục hình trứng Ngồi nhân, phía cuối thân cịn kinetoplast chứa ADN (kADN), có đường kính vào khoảng 0,7 micromet Từ kinetoplast có roi chạy vịng quanh thân lên đầu phía ngồi thể thành roi tự Roi tiên mao trùng có lớp vỏ giống lớp vỏ thân Trong roi có cặp vi ống xung quanh cặp trung tâm, xếp song song dọc chiều dài roi (Hoare C.A 1972) [60] 91 Hình 1.1 Cấu tạo Trypanosoma evansi (Nguồn: Desquesnes M., 2004) [41] A - Roi H - Phần thân B - Tổ hợp cytoskeleton I - Bộ máy Golgi C - Nhân J - Lưới nội sinh chất D - Ty thể K - Màng rung E - Thể động kinetoplast L - Nơi tiếp xúc roi với màng rung F - Thể đặc M - Nơi tiếp xúc roi với thân G - Túi tiên mao 1.1.1.2 Phân loại tiên mao trùng ký sinh gia súc Theo Levine N D cs (1980) [70], dựa nghiên cứu siêu cấu trúc tiên mao trùng theo Adl S M cs (2005) [25] dựa vào đặc điểm hình thái sinh học phân tử, vị trí tiên mao trùng hệ thống phân loại nguyên bào (Protozoa) sau: Giới Protozoa Ngành Sarcomastigophora Lớp Zoomastigophorea Bộ Kinetoplastida Họ Trypanosomatidae Donein, 1901 Giống Trypanosoma Gruby, 1843 Loài Trypanosoma evansi Steel, 1885 92 Trong loài tiên mao trùng phát hiện, có lồi tổ chức Thú y giới (OIE) thông báo có khả gây bệnh cho người động vật có vú, là: Trypanosoma brucei, Trypanosoma congolense, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma evansi, Trypanosoma gambiense, Trypanosoma siminae Trypanosoma vivax (OIE, 2010 [86]) 1.1.1.3 Cấu trúc kháng nguyên loài tiên mao trùng Trypanosoma evansi Kháng nguyên T evansi gồm hai loại: kháng nguyên ổn định (kháng nguyên không biến đổi) kháng nguyên biến đổi (Nguyễn Thị Kim Lan, 2008 [8]) * Kháng nguyên ổn định (kháng nguyên không biến đổi) Trong trình ký sinh thể vật chủ, phần lớn thành phần kháng nguyên tiên mao trùng không bị biến đổi Bằng phương pháp điện di miễn dịch huyết thỏ tối miễn dịch với T evansi, nhà khoa học phát tới 30 thành phần kháng nguyên khác Tất loại tiên mao trùng thuộc nhóm có loại kháng nguyên ổn định chúng giống phần với chủng tiên mao trùng khác nhóm Thí dụ T brucei thuộc giống phụ Trypanozoon, loài T congolense thuộc giống phụ Nannomonas đến 60% giống nhau, T.vivax thuộc giống phụ Duttonella có miễn dịch chéo với Trypanozoon Nannomonas Có ba loại kháng nguyên không biến đổi (ISG: Invariant Surface Glycoprotein) màng nguyên sinh chất tế bào Loại ISG 65, ISG 75 phân bố toàn màng tế bào ước lượng số lượng khoảng 50.000 - 60.000 phân tử giống Ở T evansi sống, kháng nguyên kết hợp với kháng thể vật chủ Do cấu trúc khơng gian ba chiều đặc tính ưa nước, ISG nằm chen vào phần VSG Bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang phương pháp đánh dấu iode màng tế bào tiên mao trùng, phát phân lập phân tử Loại thứ ba, ISG 100 gần phát Chúng có đặc tính ưa nước khơng thể kết hợp với kháng thể vật chủ (Johanson H.C cs., 2008)[64] * Kháng nguyên biến đổi Về kháng nguyên biến đổi, cần đề cập đến biến đổi lớp vỏ bề mặt VSG (Variant Surface Glycoprotein), quan điểm xuất kháng nguyên biến đổi tiên mao trùng chế di truyền kháng nguyên biến đổi 93 Nhờ kháng thể đặc hiệu đánh dấu mà nhà khoa học phát biến đổi lớp kháng nguyên bề mặt Lớp áo bề mặt tiên mao trùng có thành phần glycoprotein bao phủ tồn bề mặt tế bào lớp phân tử giống (mỗi tiên mao trùng có 107 phân tử) Lớp áo bề mặt kích thích thể vật chủ tạo kháng thể đặc hiệu với type kháng nguyên biến đổi VAT (Variable Antigen Type) Kháng nguyên biến đổi có tính miễn dịch cao, chiếm khoảng 10% protein tiên mao trùng Loại kháng nguyên kích thích tạo kháng thể đặc hiệu loại sinh Đối với kháng ngun biến đổi, có khả kích thích tạo miễn dịch chủ động Người ta ước lượng rằng, TMT có vài trăm vài nghn VSG, ngh a - 10% số gen tiên mao trùng cung cấp cho kháng nguyên bề mặt Theo Holland W.G cs (2001) [61], tượng biến đổi kháng nguyên bề mặt Tiên mao trùng thấy gia súc bị tiêm thuốc làm suy giảm miễn dịch 1.1.2 Dịch tễ học tiên mao trùng 1.1.2.1 Phân bố địa lý bệnh Bệnh tiên mao trùng phân bố rộng, từ phía Tây sang phía Đơng bán cầu Phía Tây bán cầu thuộc châu Mỹ, phía Đơng bán cầu trải dài từ châu Phi đến Philippine Ở châu Phi, bệnh trải dài từ Tây sang Đơng, phía Bắc qua vùng sa mạc Sahara, dọc theo bờ biển Atlantique, Địa trung hải Bệnh tiên mao trùng xảy với tên gọi "bệnh Surra” Ả Rập Saudi, Yêmen, Sultanate, Ả Rập thống nhất, Thổ Nh Kỳ, Israel, Syrie, Afganistan, Pakistan Ở châu Á, bệnh xuất Trung Á (thuộc Liên Xô cũ), Ấn Độ, Malaysia, bán đảo Đông Dương, Trung Quốc, Indonexia, Philippine Tại châu Úc, nhà khoa học xác định tồn bệnh tiên mao trùng lục địa (Reid S A., 2002 [90]) Ở châu Âu, lần người ta phát hai trường hợp nhiễm bệnh tiên mao trùng lồi chuột có nguồn gốc từ Nam Mỹ chó có nguồn gốc Nepal (Gutierrez C cs., 2010 [54]) Bệnh tiên mao trùng xuất châu Mỹ từ kỷ 16 thực dân Tây Ban Nha mang ngựa bị bệnh tiên mao trùng từ Ả rập đến Colombia (Desquesnes M cs., 2013 [45]) 94 Ở Việt Nam, bệnh tiên mao trùng thấy hầu hết vùng sinh thái khác nhau: miền núi, trung du, đồng ven biển Theo Phạm Sỹ Lăng (1982) [11], bệnh tiên mao trùng có tất tỉnh miền Bắc (Bắc Kạn, Lạng Sơn, Tuyên Quang, Thái Nguyên, Ninh Bình Hà Tây) Trâu, bò nhiễm bệnh với tỷ lệ cao khác vùng khác 1.1.2.2 Vật chủ vật môi giới truyền bệnh tiên mao trùng * Vật chủ Trong số lồi TMT có khả gây bệnh cho người động vật có vú T evansi lồi gây bệnh phổ biến Chúng ký sinh hầu hết loài thú ni thú hoang, thấy nhiều trâu, bị, ngựa, lợn, hươu, nai, hổ, báo, sư tử, chó, mèo, lạc đà, voi, thỏ, chuột cống, chuột lang, chuột bạch, khơng ký sinh người Trâu, bị nhiễm Trypanosoma evansi tự nhiên, bị mẫn cảm thường thể mãn tính Lạc đà thường nhiễm T evansi thể cấp tính, chết nhiều số nước châu Phi, châu Á Holland W G (2001) [61], kiểm tra phát thú hoang châu Á nhiễm Trypanosoma evansi tự nhiên: hươu đảo Maurice; nai Cervus Indonesia; cừu hoang hoẵng; linh dương Kazakistan; tinh tinh đảo Saumatra; chuột Hamster Ấn Độ; khỉ Maracus rheusus số nước Ở Nam Mỹ Trung Mỹ có số loài thú bị mắc bệnh tiên mao trùng Trypanosoma evansi gây thể cấp tính chết: chó rừng, khỉ Venezuela, nai trắng, hươu Panama Colombia Nguyễn Quốc Doanh cs ( 2001) [3], nghiên cứu bệnh tiên mao trùng lồi bị sát, ếch nhái đồng sơng Hồng, đó: lồi rắn, ba ba, cóc, ếch, nhái nhiễm T evansi với tỉ lệ 8,03% Ngoài động vật bị nhễm T evansi tự nhiên, phịng thí nghiệm truyền bệnh tiên mao trùng cho loại động vật nhỏ, chuột nhắt trắng, chuột cống trắng, thỏ, chuột lang, chồn, cầy hương, chó, mèo, chuột nhắt trắng, chuột cống trắng đặc biệt mẫn cảm với T evansi (Losos G J.và cs 1972)[69] 95 * Côn trùng môi giới truyền bệnh tiên mao trùng: Sự lây truyền tiên mao trùng từ trâu, bò ốm sang trâu, bò khoẻ loài ruồi hút máu (thuộc họ phụ Stomoxydinae) lồi mịng hút máu (thuộc họ Tabanidae) Ruồi mịng hút máu gia súc bị bệnh (có chứa tiên mao trùng vịi hút), sau lại hút máu gia súc khoẻ, hút máu truyền tiên mao trùng từ vòi hút vào máu vật khoẻ Sự lây truyền mang tính chất học (Desquesnes M., 2004) [42] Sự xuất lượng lớn ruồi, mòng mùa mưa nóng ẩm ln có liên quan đến tình hình dịch tễ bệnh tiên mao trùng trâu, bò, lạc đà dê - Chu kỳ phát triển sinh học ruồi, mòng: Theo Luckins A G Dwinger H (2004) [73]: ruồi, mịng nói chung ruồi, mịng hút máu nói riêng có chu kỳ phát triển qua giai đoạn trứng, ấu trùng (dòi), nhộng trưởng thành Ruồi trưởng thành sống - tháng cần hút máu vật chủ để ni dưỡng trứng Thơng thường ruồi, mịng cần hút máu bốn lần tuần Desquesnes M cs (2009) [43] cho biết, giống Stomoxys có 18 lồi, phổ biến quan trọng truyền lây bệnh tiên mao trùng loài Stomoxys calcitrans Khác với loài Tabanus spp., đực loài Stomoxys calcitrans hai giống hút máu, thời gian hoàn thành vòng đời chúng 15 - 28 ngày, tuổi thọ trung bình 20 - 30 ngày - Thành phần lồi ruồi, mịng hút máu nước ta: Phan Văn Chinh (2006) [1], tiến hành kiểm tra ruồi, mịng mơi giới trung gian truyền bệnh T evansi ba tỉnh Quảng Bình, Thừa Thiên Huế, Khánh Hồ đại diện cho khu vực địa lý khác tỉnh miền Trung, tiến hành kiểm tra từ 1998 đến 2004 thu thập 17.600 tiêu mòng, ruồi thuộc lồi, lồi mịng thuộc hai giống Tabanus Chrysops thuộc họ Tabanidae (Tabanus rubidus, Tabanus kiangsuensis, Tabanus striatus, Tabanus miser, Tabanus bruneothorax, Tabanus pseudofiventus, Chrysozona assamensis, Chrysops dispar) loài ruồi Stomoxys calcitrans phổ biến vùng kiểm tra