So 2 - Nam 2021 Tieng Viet

Untitled 1 NHA TRANG UNIVERSITY ISSN 1859 2252 Số 2 2021 NHA TRANG UNIVERSITY TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • Toøa soaïn Tröôøng Ñaïi hoïc Nha Trang, soá 02 Nguyeãn Ñình Chieåu, TP Nha Trang Khaùnh Hoøa •[.]

ISSN 1859 - 2252 Số - 2021 NHA TRANG UNIVERSITY TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG TẠP CHÍ KHOA HỌC - CÔNG NGHỆ THỦY SẢN ISSN 1859 - 2252 TỔNG BIÊN TẬP TS TRẦN DỖN HÙNG PHĨ TỔNG BIÊN TẬP TS VŨ KẾ NGHIỆP BAN BIÊN TẬP PGS.TS Nguyễn Thị Kim Anh Trường Đại học Nha Trang GS TS Augustine Arukwe PGS TS Lê Phước Lượng Trường Đại học Nha Trang PGS TS Nguyễn Đình Mão Norwegian University of Science and Technology, Trondheim, Norway Trường Đại học Nha Trang PGS TS Vũ Ngọc Bội Trường Đại học Nha Trang Trường Đại học Nha Trang TS Phan Thị Dung Trường Đại học Nha Trang TS Nguyễn Hữu Dũng Trường Đại học Nha Trang PGS TS Nguyễn Tiến Dũng Trường ĐH Kinh tế Luật- ĐHQG Tp HCM PGS TS Nguyễn Văn Duy Trường Đại học Nha Trang PGS.TS Nông Văn Hải Viện Nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam PGS TS Lê Văn Hảo Trường Đại học Nha Trang TS Nguyễn Thị Hiển Trường Đại học Nha Trang TS Nguyễn Văn Hòa Trường Đại học Nha Trang GS TS Hồng Đình Hịa Trường ĐH Bách khoa Hà Nội GS TS Nguyễn Trọng Hoài Trường ĐH Kinh tế Tp HCM PGS TS Lê Minh Hoàng Trường Đại học Nha Trang TS Mai Thị Tuyết Nga PGS TS Ngô Đăng Nghĩa Trường Đại học Nha Trang PGS TS Nguyễn Văn Nhận Trường Đại học Nha Trang PGS TS Nguyễn Hữu Ninh Viện Nghiên cứu NTTS I - Bộ NNPTNT PGS TS Mai Thanh Phong Trường ĐH Bách khoa - ĐHQG Tp HCM GS TS Nguyễn Thanh Phương Đại học Cần Thơ PGS TS Trần Gia Thái Trường Đại học Nha Trang GS TS Trương Bá Thanh Đại học Đà Nẵng PGS TS Phạm Hùng Thắng Trường Đại học Nha Trang TS Khổng Trung Thắng Trường Đại học Nha Trang TS Hồng Văn Tính Trường Đại học Nha Trang GS TS Toshiaki Ohshima Tokyo University of Marine Science and Technology, Japan TS Hoàng Hoa Hồng PGS TS Trang Sĩ Trung Trường Đại học Nha Trang Trường Đại học Nha Trang PGS TS Lại Văn Hùng PGS TS Nguyễn Anh Tuấn Trường Đại học Nha Trang Trường Đại học Nha Trang GS TS Nguyễn Ngọc Lâm Viện Hải dương học - Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam GS TS Yew-Hu Chien National Taiwan Ocean University, Taiwan GS TS Nguyễn Kế Tuấn Trường Đại học Kinh tế quốc dân Hà Nội PGS TS Đỗ Thị Thanh Vinh Trường Đại học Nha Trang BAN THƯ KÝ ThS Trần Nhật Tân - ThS Lương Đình Duy • • • • • • • Tòa soạn : Trường Đại học Nha Trang, số 02 Nguyễn Đình Chiểu, TP Nha Trang - Khánh Hòa Điện thoại : 0258.2220767 Fax : 0258.3831147 E-mail : tapchidhnt@ntu.edu.vn Giấy phép xuất : 292/GP-BTTTT ngày 3/6/2016 Chế : Phòng Khoa học Công nghệ - Trường Đại học Nha Trang In : Công ty cổ phần In Thương mại Khánh Hòa, số 08 Lê Thánh Tôn - Nha Trang Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 2/2021 MUÏC LUÏC Hàm lượng 11-Keto Testosterone huyết tương mùa sinh sản cá dìa đực (Siganus Guttatus) Nguyễn Văn An, Nguyễn Văn Minh, Phạm Quốc Hùng Ảnh hưởng tỷ lệ tinh bột biến tính, protein đậu tương đến độ cứng, hao hụt khối lượng co rút kích thước gel protein thịt sẫm cá ngừ vây vàng (Thunnus Albacares) xay Nguyễn Trọng Bách, Nguyễn Thế Nguyên, Trang Sĩ Trung Một số đặc trưng hoạt động ương - ni cá tra Sóc Trăng thời gian gần Nguyễn Văn Quỳnh Bôi, Nguyễn Lâm Anh Phan Văn Út Hiện trạng nghề nuôi cá bớp (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766) thương phẩm Kiên Giang Nguyễn Tấn Sỹ, Ngô Văn Mạnh, Lục Minh Diệp, Phan Văn Út, Vũ Trọng Đại Tuyển chọn, nuôi thành thục cho sinh sản tôm bác sĩ Lysmata amboinensis (De Man 1888) Lục Minh Diệp, PhùngThế Trung Ước lượng nguồn ding dưỡng (C N) cho tăng trưởng tôm thẻ xanh Litopenaeus stylirostris cá dìa Siganus lineatus nuôi ghép sử dụng đồng vị bền carbon (δC13) ni tơ (δN15) Lương Công Trung Đánh giá hiệu vắc xin PISCIVAC Irido Si việc phòng bệnh cá mú ngủ IRIDOVIRUS gây cá mú lai (Epinephelus fuscoguttatus x E Lanceolatus) nuôi Khánh Hịa Trần Vĩ Hích Takano R Fukuda K Thiết kế thiết bị giám sát từ xa thông số vận hành động Yanmar làm máy tàu du lịch Hồ Đức Tuấn Ảnh hưởng kết hợp mật độ với chất đáy lên sinh trưởng tỷ lệ sống ấu trùng nghêu lụa (Paphia undulata born, 1780) giai đoạn sống đáy Khánh Hòa Vũ Trọng Đại, Ngô Anh Tuấn, Ngô Thị Thu Thảo Thử nghiệm ương giống cá bớp (Rachycentron canadum Linnaeus, 1766) bể ao Kiên Lương - Kiên Giang Nguyễn Tấn Sỹ, Ngô Văn Mạnh, Lục Minh Diệp, Phan Văn Út, Vũ Trọng Đại Nhân tố tác động đến sách cổ tức doanh nghiệp chế biến thủy sản niêm yết thị trường chứng khoán Việt Nam Nguyễn Thị Hiển, Trần Việt Dũng 17 26 34 42 55 59 68 75 82 Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Số 2/2021 HÀM LƯỢNG 11-KETO TESTOSTERONE HUYẾT TƯƠNG TRONG MÙA SINH SẢN CỦA CÁ DÌA ĐỰC (SIGANUS GUTTATUS) PLASMA 11-KETO TESTOSTERONE LEVELS IN BREEDING SEASON OF THE MALE RABBIT FISH (SIGANUS GUTTATUS) Nguyễn Văn An1, Nguyễn Văn Minh2, Phạm Quốc Hùng2 Trường Đại học Kiên Giang Viện Nuôi trồng Thủy sản, Trường Đại học Nha Trang Tác giả liên hệ: Nguyễn Văn An (email: nvan@vnkgu.edu.vn) Ngày nhận bài: 22/05/2021; Ngày phản biện thông qua: 16/06/2021; Ngày duyệt đăng: 29/06/2021 TÓM TẮT Nghiên cứu thực 60 mẫu cá đực có chiều dài khối lượng tồn thân trung bình 30,26 ± 2,26 cm 506,27 ± 84,06 gram Biến động hàm lượng 11-ketotestosterone (11-KT) theo tháng theo giai đoạn phát triển tinh sào huyết tương cá dìa đực (Siganus guttatus) điều kiện ni nhốt phân tích phương pháp miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) Tổ chức tinh sào quan sát đánh giá độ thành thục theo thang đo bậc Nikolski Kết nghiên cứu cho thấy có thay đổi hàm lượng 11-KT huyết tương theo tháng theo giai đoạn phát triển tinh sào Hàm lượng 11-KT huyết tương cao quan sát giai đoạn tạo tinh tháng 6-7 Kết nghiên cứu góp phần hiểu biết thêm nội tiết sinh sản cá dìa, ứng dụng quản lý đàn cá bố mẹ sinh sản nhân tạo Từ khóa: Cá dìa, Siganus guttatus, 11-KT, tinh sào, mùa sinh sản ABSTRACT The experiment was conducted on 60 broodfish Siganus guttatus with total length and body weight were 30.26 ± 2.26 cm and 506.27 ± 84.06 gram, respectively Monthly changes of plasma 11-ketotestosterone (11KT) levels in the breeding season and testicular stages of male rabbitfish (Siganus guttatus) in captivity were investigated by using Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Testicular stages of development were observed and analyzed based on the sacle of Nikolski The results included monthly changes and testicular stages in plasma 11-KT levels The 11-KT levels were observed high at spermation stage and during June-July These results contribute to further understanding of reproductive endocrinology in rabbitfish, which can be implicated for broodstock management and artificial propagation Keywords: Rabbit fish, Siganus guttatus, 11-KT, testis, reproductive season ĐẶT VẤN ĐỀ Ở cá, 11-ketotestosterone (11-KT) có chức hormone sinh dục, androgen nội sinh 11-KT dạng testosterone bị oxy hóa có chứa nhóm keto vị trí C11 11-KT có liên quan đến adrenosterone, androgen tìm thấy với số lượng huyết tương [3, 4] Đã có nhiều nghiên cứu vai trị 11-KT cá xương, theo người ta thấy 11-KT có ảnh hưởng đến số bước q trình sinh tinh biệt hóa tinh trùng [3, 4] Một số nghiên cứu khác cho 11-KT kích thích phát triển đặc điểm giới tính thứ cấp Hàm lượng 11-KT huyết tương cá thay đổi theo mùa • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG biến động theo giai đoạn phát triển tinh sào [4, 7] Hàm lượng 11-KT ghi nhận cá [7] Những liệu khoa học góp phần vào hiểu biết khía cạnh nội tiết q trình sinh sản cá Cá dìa (Siganus guttatus) lồi cá biển có giá trị kinh tế [1, 2] Sự phát triển tuyến sinh dục cá nói chung có liên quan đến mùa vụ, tính chu kỳ đặc biệt thay đổi hàm lượng hormone sinh dục, sinh sản huyết tương [10, 11] Một số nghiên cứu biến động hàm lượng testosterone estradiol cá dìa đực thực [8, 12] Tuy nhiên hormone steroid 11-KT xác định Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản androgen chủ yếu đóng vai trị quan trọng q trình phát triển tinh sào cá [4] Vì nghiên cứu hàm lượng 11-KT huyết tương mùa sinh sản cá dìa đực nhằm tìm quan hệ 11-KT chu kỳ phát triển tinh sào cá dìa Kết nghiên cứu nhằm góp phần làm rõ vài trò 11-KT cá dìa đực đóng góp vào hiểu biết nội tiết sinh sản cá biển nói chung VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đàn cá nghiên cứu thu mẫu Đàn cá nghiên cứu có chiều dài khối lượng tồn thân trung bình 30,26 ± 2,26 cm 506,27 ± 84,06 gram Cá bố mẹ nuôi lồng biển Cam Ranh, Khánh Hòa (12° 52' 15"N, 108° 40' 33"E) Cá cho ăn hàng ngày thức ăn công nghiệp cho cá biển với thàn phần protein 42%, lipid 6%, tro 16%, chất xơ 3% độ ẩm 11% với phần 2-3 % khối lượng thân Mật độ ni bình qn kg/m3 với tỷ lệ đực 1:1; Nhiệt độ nước: 28-32oC; độ mặn: 29-34 ‰; pH: 7,8 - 8,6 oxy hòa tan: 4,5 - 6,5 mg/l Hàng tháng, 10 cá đực thu ngẫu nhiên để lấy máu tinh sào 2.2 Phân tích hàm lượng 11-KT huyết tương Hàm lượng 11-KT huyết tương phân tích phương pháp miễn dịch liên kết enzym (Enzyme Linked Immunosorbent Assay: ELISA) ELISA Kit hormone steroid từ nhà sản xuất Cayman Chemical Company (Ann Arbor, MI, USA) Phương pháp phân tích hàm lượng 11-KT huyết tương tóm tắt theo trình tự bước thực sau: (1) Dung dịch đệm ELISA (ELISA buffer) dung dịch rửa (Wash buffer): Hòa tan 10 ml dung dịch đệm ELISA buffer đậm đặc với 90 ml nước tinh khiết Hòa tan ml dung dịch rửa Wash buffer đậm đặc với 2000 ml nước tinh khiết Sau đó, hịa tan ml Tween 20 vào dung dịch rửa trước sử dụng Bảo quản dung dịch nhiệt độ 4oC (2) Mẫu huyết tương: Mẫu máu cá dìa đực thu bảo quản đơng -800C sau tách lấy phần huyết tương huyết cầu máy ly Số 2/2021 tâm MIKRO 120 10.000 vòng thời gian 15 phút Lấy 0,5 ml mẫu huyết tương tách hòa tan với 2,5 ml Diethyl ether lắc máy Vortexer Để yên khoảng 5-10 phút, hỗn hợp tách biệt thành lớp Dùng pipet hút lấy phần dung dịch lớp suốt, lớp ether có chứa hormone steroid, cho vào ống nghiệm tiếp tục tách lần tương tự lần Sau chiết xuất phần ether có lẫn hormone steroid, cho bay hết ether, hormone steroid lại lắng tụ đáy thành ống nghiệm Đưa 0,5 ml dung dịch đệm ELISA Buffer vào ống nghiệm lắc đều, đảm bảo hòa tan hormone steroid với dung dịch đệm ELISA Buffer (3) Hormone steroid chuẩn: Dùng pipet lấy 100 µl hormone steroid chuẩn kit nhà cung cấp cho vào ống nghiệm Ở thí nghiệm dùng hormone 11-KT standar Sau hịa tan hormone steroid chuẩn với 900 µl nước tinh khiết lắc máy lắc Vortexer Tiếp theo chuẩn bị ống nghiệm đánh dấu từ đến Đưa 900 µl dung dịch đệm ELISA vào ống nghiệm số 500 µl dung dịch đệm ELISA vào ống nghiệm đến Chuyển 100 µl hormon steroid chuẩn hòa tan vào ống nghiệm lắc máy lắc Vortexer, sau lấy 500 µl từ ống nghiệm đưa vào ống nghiệm lắc Tiếp theo, lấy 500 µl từ ống nghiệm đưa vào ống nghiệm lắc máy lắc Vortexer Tương tự vậy, thực ống nghiệm thứ Cuối ta có dung dịch chuẩn với nồng độ khác Dung dịch đánh dấu (hormone steroid AchE Tracer) kháng nguyên (hormone steroid EIA antiserum): Hormone steroid AchE Tracer pha chế cách hòa tan 100 dtn hormone steroid với mL dung dịch đệm ELISA buffer Hormone steroid ELISA antiserum pha chế cách hòa tan 100 dtn hormon steroid antiserum với ml dung dịch đệm ELISA buffer Để tạo khác biệt dễ nhìn dùng, dung dịch đánh dấu nhỏ thêm 60 µl thuốc nhuộm tracer kháng nguyên nhỏ thêm 60 µl thuốc nhuộm antiserum Trong kit 11-KT nhà sản xuất ta thấy nồng độ chuẩn Bảng TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 2/2021 Bảng 1: Nồng độ 11 - ketotestosterone chuẩn (pg/ml) Thứ tự mẫu chuẩn Hàm lượng 11- KT chuẩn 100 50 4) Phân tích mẫu: Bố trí đĩa 96 giếng theo mẫu Sau dùng micropipet hút dung dịch chuẩn bị cho vào giếng sau: Dùng micropipet hút 100 µl dung dịch đệm ELISA buffer vào giếng NSB 50 µl dung dịch đệm ELISA buffer vào giếng Bo, hút 50 µl hormone chuẩn pha lỗng nồng độ khác vào giếng S1 tới S8 đĩa, hút 50 µl mẫu huyết tương tách bước cho vào giếng bố trí đĩa Sau dùng micropipet hút 50 µl dung dịch đánh dấu AchE Tracer vào tất giếng bố trí loại trừ giếng Blk giếng TA Tiếp tục hút 50 µl kháng nguyên ELISA antiserum vào tất giếng bố trí loại trừ giếng Blk, TA NSB Sau đem đĩa nhựa 96 giếng ủ máy lắc nhẹ nhiệt độ phòng (25-280C) thời gian 1-2 Sau thời gian ủ lần 1, rửa giếng dung dịch rửa ELISA Wash, rửa lần dung dịch đưa chất (Ellman’s reagent) vào giếng đĩa Dung dịch Ellman’s reagent pha cách hòa tan 20 ml nước cất với 100 dtn Ellman’s reagent Sau thực xong bước rửa giếng, đưa 200 μl chất (Ellman’s reagent) vào giếng đĩa μl ELISA Tracer vào giếng TA, tiếp tục ủ đĩa lần thứ thời gian 1- đĩa xuất màu vàng Cuối cùng, sau kết thúc thời gian ủ lần 2, lấy đĩa đo mật độ quang giếng đĩa máy quang phổ bước sóng 405 nm ELISA Thu kết phân tích (5) Đường chuẩn tính tốn kết quả: Đường chuẩn xây dựng sở nồng độ 11-KT chuẩn (pg/ml) chuẩn bị trước (X) %B/Bo 11-KT chuẩn (Y) Dựa vào phương trình Y = aLn(X) + b, hàm lượng 11-KT mẫu tính theo hàm số X = Exp((Y-b)/a) Trong đó: X hàm lượng 11 -KT có mẫu; Y %B/Bo mẫu; a b số • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG 25 12.5 6.25 3.13 1.56 0.78 2.3 Phương pháp làm tiêu tinh sào Mẫu tinh sào cá dìa đực đưa khỏi dung dịch cố định, rửa rút nước cách ngâm cồn tuyệt đối khoảng 4-8 giờ, tiếp theo, ngâm methyl salicylate 12-24 Sau cùng, mẫu thấm parafin nóng chảy 65oC thời gian Sử dụng máy đổ parafin nóng chảy vào khuôn chứa mẫu, để dàn lạnh khoảng 30 phút cho mẫu parafin đông cứng lại Gắn khối parafin lên đế gỗ dán nhãn Gắn đế gỗ có mẫu vào máy microtom, cắt lát có độ dày 5-7 micron Đưa lát cắt vào nước ấm (4045oC) khoảng 1-2 phút để lát cắt giãn Dùng lam lấy lát cắt khỏi nước sấy máy sấy nhiệt độ 45-60oC 1-4 Sau sấy khô, mẫu khử parafin cách ngâm dung dịch xilen làm trương nước cách nhúng dung dịch ethanol nồng độ khác khoảng 2-3 phút Cuối mẫu nhuộm dung dịch Hematoxylin-Mayer (4-6 phút) Eosin (2 phút) để khô đậy lamen keo dán Bậc thang phân biệt giai đoạn phát triển tinh sào dựa theo lý thuyết Nikolski Sakun [5, 9] 2.4 Phân tích thống kê Số liệu trình bày dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (Mean ± SD) Biến động hàm lượng 11-KT theo tháng theo giai đoạn phát triển tinh sào phân tích theo phương pháp phương sai yếu tố (One-way ANOVA) kiểm định Ducan với mức ý nghĩa P