Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).

Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).Khảo sát hiệu quả kháng oxy hóa và bảo vệ gan trên mô hình chuột của một số cây thuộc họ Cà phê (Rubiaceae).

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ PHAN KIM ĐỊNH KHẢO SÁT HIỆU QUẢ KHÁNG OXY HĨA VÀ BẢO VỆ GAN TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT CỦA MỘT SỐ CÂY THUỘC HỌ CÀ PHÊ (Rubiaceae) LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 62420201 Năm 2021 PHAN KIM ĐỊNH Mã số NCS: P0915002 KHẢO SÁT HIỆU QUẢ KHÁNG OXY HÓA VÀ BẢO VỆ GAN TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT CỦA MỘT SỐ CÂY THUỘC HỌ CÀ PHÊ (Rubiaceae) LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 62420201 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGs.Ts ĐÁI THỊ XUÂN TRANG PGs.Ts NGUYỄN TRỌNG TUÂN Năm 2021 iii LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Đái Thị Xuân Trang PGS.TS Nguyễn Trọng Tuân tận tình hướng dẫn, đóng góp ý kiến, giúp đỡ động viên tơi suốt q trình học, thực luận án, viết báo hồn thành chương trình đào tạo Tôi xin trân trọng gởi lời cảm ơn đến Thầy PGS.TS Nguyễn Văn Thành, PGS.TS Nguyễn Minh Chơn, TS Trương Thị Bích Vân tập thể Thầy Cơ Viện Nghiên Cứu Phát Triển Công Nghệ Sinh học, Khoa Sau Đại học, Trường Đại học Cần Thơ ln quan tâm, động viên giúp đỡ tơi hồn thành hồ sơ, thủ tục suột thời gian học tập trường Tôi xin cảm ơn tập thể Thầy Cơ Bơ mơn Sinh học hỗ trợ phịng thí nghiệm thiết bị cần thiết thời gian thực luận án Đặc biệt, cảm ơn quý Thầy Cô chia sẻ công việc giành thời gian để tơi chun tâm học tập hồn thành chương trình đào tạo Tôi xin cảm ơn quý Thầy Cô Bộ mơn Hóa học hỗ trợ chia sẻ thiết bị thời gian làm thí nghiệm Cảm ơn Ban Chủ Nhiệm Khoa Khoa Học Tự Nhiên – Trường Đại học Cần thơ tạo điều kiện động viên tơi học tập hồn thành chương trình đào tạo Cảm ơn em Trần Chí Linh hỗ trợ tơi thực thí nghiệm Cảm ơn em sinh viên nhóm nghiên cứu đề tài liên quan đồng hành tơi q trình thực luận án Sau xin gởi lời cảm ơn đến gia đình tơi, người ln quan tâm, động viên tạo điều kiện vật chất lẫn tinh thần để tơi chun tâm hồn thành chương trình đào tạo Nghiên cứu sinh Phan Kim Định TÓM TẮT Họ Cà phê (Rubiaceae) họ thực vật lớn, phân bố rộng rãi nhiều nơi đặc biệt vùng Đồng sông Cửu long Thực vật họ Cà phê biết có chứa lượng lớn hợp chất thứ cấp có hoạt tính sinh học iridoid, anthraquinone, triterpene, phenolic alkaloid Nhiều loại thuộc họ Cà phê sử dụng y học dân gian với tác dụng chữa bệnh khác Nghiên cứu thực nhằm khảo sát khả kháng oxy hóa bảo vệ gan số thuộc họ Cà phê Sử dụng phương pháp điều tra vấn người dân địa điểm sở y học cổ truyền thuộc tỉnh Kiên Giang, An Giang Vĩnh Long, để tìm hiểu thơng tin tình hình sử dụng thuốc trị bệnh gan dân gian Qua làm sở chọn mẫu thực vật để nghiên cứu hoạt tính kháng oxy hóa, bảo vệ gan Các cao chiết định lượng sơ hàm lượng polyphenol, flavonoid alkaloid tổng phương pháp đo quang phổ Phương pháp loại bỏ gốc tự 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, khả khử sắt, phosphomolypdenum sử dụng để đánh giá khả kháng oxy hoá cao chiết Phương pháp ức chế biến tính protein huyết bị (BSA) dùng để khảo sát hoạt tính kháng viêm Carbon tetrachloride (CCl4) sử dụng gây nhiễm độc gan chuột silymarin dùng chất đối chứng dương thử nghiệm khảo sát hoạt tính bảo vệ gan Kết nghiên cứu thu thập thơng tin tình hình sử dụng 50 thuốc điều trị bệnh gan thuộc 22 họ thực vật, họ Cà phê có số loài sử dụng nhiều Các thuộc họ Cà phê bao gồm Trang to (lá, hoa), Mơ lông (lá), Mơ leo (lá), Gáo trắng (lá, vỏ thân, rễ), Gáo vàng (lá, vỏ thân, rễ), Lưỡi rắn (cả cây) Lưỡi rắn trắng (cả cây) chọn thu mẫu chiết cao methanol (12 cao chiết methanol) Qua khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa, xác định hàm lượng polyphenol, flavonoid alkaloid tổng có cao chiết xác định có hàm lượng polyphenol, flavonoid, alkaloid tổng tương đối cao, có hoạt tính kháng oxy hóa kháng viêm Các cao chiết gồm Trang to, Gáo trắng, vỏ thân Gáo trắng, rễ Gáo trắng, Gáo vàng, vỏ thân Gáo vàng, rễ Gáo vàng, Mơ lơng Mơ leo có hoạt tính kháng oxy hóa kháng viêm chọn thử hoạt tính bảo vệ gan chuột Kết có cao chiết bao gồm Gáo trắng, vỏ thân Gáo trắng, rễ Gáo trắng, Gáo vàng, vỏ thân Gáo vàng, rễ Gáo vàng có khả làm giảm enzyme ALT, AST, điều hòa MDA GSH gan tốt Kết hợp với kết quan sát mô học gan chuột thí nghiệm, nghiên cứu chọn cao chiết rễ Gáo vàng có hiệu bảo vệ gan tốt vừa có khả làm giảm enzyme ALT, AST, điều hòa hàm lượng MDA, GSH gan bảo vệ mơ gan Thử nghiệm độc tính cấp cho thấy, cao chiết Gáo vàng, vỏ thân Gáo vàng rễ Gáo vàng có liều gây chết chuột lớn 5000 mg/kg khối lượng chuột Kết thử nghiệm độc tính bán trường diễn, sử dụng cao chiết rễ Gáo vàng liều 400 mg/kg khối lượng 90 ngày gây độc chuột Cao methanol tổng rễ Gáo vàng chiết phân đoạn với dung môi n-hexan, ethyl acetate Các phân đoạn thử khả kháng oxy hóa, kháng viêm, định lượng polyphenol, flavonoid, alkaloid tổng thử hoạt tính bảo vệ gan Phân đoạn ethyl acetate rễ Gáo vàng xác định có hoạt tính sinh học tốt chọn tiến hành phân lập chất Kết nghiên cứu phân lập xác định hợp chất từ phân đoạn ethyl acetate gồm naucleficine 3-O-rhamnoside quinovic acid Từ khóa: AST, ALT, bảo vệ gan, CCl4, kháng oxy hóa, Rubiaceae ABSTRACT The Rubiaceae family is a large plant family, widely distributed in many places, especially common in the Mekong Delta Rubiaceae species are known to contain large amounts of biologically active secondary compounds such as iridoids, anthraquinones, triterpenes, phenolics and alkaloids Many plants of this family are used in folk medicine for the treatment of various diseases The research was carried out to investigate the antioxidant and hepatoprotective activities of some plants of the Coffea family (Rubiaceae) The methods of surveying and interviewing people at locations, which are traditional medicine centers in provinces of Kien Giang, An Giang and Vinh Long, were used to find out information about the use of medicinal plants to treat liver diseases Thereby, this served as the basis for selecting plant samples to make methanol extracts to study antioxidant and hepatoprotective activities The extracts were preliminarily quantified of total polyphenols, flavonoids and alkaloids contents by spectrophotometric methods The 2, 2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl free radical scavenging, reducing power, and phosphomolybdenum methods were used to evaluate the antioxidant capacity of the extracts Bovine serum protein (BSA) denaturation inhibition test was used to investigate anti-inflammatory activity Carbon tetrachloride (CCl4) was used to induce hepatotoxicity in mice and silymarin was used as a positive control in screening test hepatoprotective activity The research have investigated the use of 50 medicinal plants to treat liver disease belonging to 22 plant families, in which the Coffea family has the most widely used species The seven plant species of the Rubiaceae family include Ixora duffii (leaves, flowers), Paederia lanuginosa Wall (leaves), Paederia scandens L (leaves), Neolamarckia cadamba (Roxb.) Bosser (leaves, stem bark, roots), Nauclea orientalis L (leaves, stem bark, roots), Hedyotis corymbosa L (whole plant) and Hedyotis diffusa Willd (whole plant) were sampled and extracted with methanol (12 methanol extracts) In the investigation of antioxidant and anti-inflammatory activity, the quantification of total polyphenol, flavonoid and alkaloid content, extracts were determined to have relatively high content of polyphenols, flavonoids, total alkaloids, as well as antioxidant and anti-inflammatory activities The extracts including Ixora duffii leaves extract, Neolamarckia cadamba (Roxb.) Bosser leaves, stem bark and root extracts, Nauclea orientalis L leaves, stem bark root extracts, Paederia scandens L leaves extract and Paederia lanuginosa Wall leaves extract with antioxidant and anti-inflammatory activities were selected for studying on hepatoprotective activity in mice As a result, there were extracts including Neolamarckia cadamba (Roxb.) Bosser leaves, stem bark and root extracts, Nauclea orientalis L leaves, stem bark and root extracts which have the ability to reduce ALT, AST enzymes, modulate MDA and GSH contents in the liver Combined with the results of histological observations of the liver of experimental mice, the study has selected the extract of Nauclea orientalis L root with good hepatoprotective effect with both of the ability to reduce ALT, AST enzymes, regulate MDA and GSH levels in the liver, and protect liver tissue Acute toxicity test results showed that lethal dose in 50 percent of Nauclea orientalis L leaves, stem bark and root extracts in mice was greater than 5000 mg/kg body weight The sub-chronic toxicity test results of mice treated with Nauclea orientalis L roots extract at dose of 400 mg/kg body weight in 90 days, also did not show toxicity in mice The Nauclea orientalis L roots methanol extract was fractionated with sequential n-hexane, ethyl acetate sovents Fractions were tested for antioxidant, anti-inflammatory activities, total polyphenols, flavonoids, alkaloids contents, and hepatoprotective activity The ethyl acetate fraction displayed the highest activities was selected to isolate compounds Research results have isolated and identified two compounds from the ethyl acetate fraction consisting of naucleficine and 3-O-rhamnoside quinovic acid Keywords: antioxidant, ALT, AST, CCl4, hepatoprotective activity, Rubiaceae viii LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam kết luận án hồn thành dựa kết nghiên cứu hướng dẫn PGS.TS Đái Thị Xuân Trang PGS.TS Nguyễn Trọng Tuân Các kết nghiên cứu chưa dùng cho luận án cấp khác Cần Thơ, ngày Người hướng dẫn PGS.TS Đái Thị Xuân Trang Người hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Trọng Tuân tháng năm 2021 Nghiên cứu sinh Phan Kim Định MỤC LỤC Mục lục vii Danh sách bảng x Danh sách hình xii Danh mục từ viết tắt xiii Chương 1: Giới thiệu Chương 2: Tổng quan tài liệu 2.1 Tổng quan dạng oxy hoạt động chất kháng oxy hóa 2.1.1 Các dạng oxy hoạt động 2.1.2 Chất kháng oxy hóa 2.1.3 Một số phương pháp đánh giá khả kháng oxy hóa 2.2 Tổng quan gan 11 2.2.1 Sơ lược cấu trúc chức gan 11 2.2.2 Các thông số chức gan 12 2.2.3 Đặc điểm mô học gan 14 2.3 Nguyên nhân gây tổn thương gan 17 2.3.1 Các chất gây độc gan 17 2.3.2 Stress oxy hóa ảnh hưởng đến chức gan 18 2.4 Các dạng tổn thương gan 21 2.4.1 Bệnh gan nhiễm mỡ 21 2.4.2 Bệnh gan mạn tính 21 2.4.3 Xơ hóa gan xơ gan 21 2.5 Một số loại thuốc bảo vệ gan 23 2.6 Sơ lược số loài thực vật thuộc họ Cà phê 24 2.6.1 Sơ lược Mơ lông (Paederia lanuginose Wall.) .24 2.6.2 Sơ lược Mơ leo (Paederia scandens L.) 25 2.6.3 Sơ lược Trang to (Ixora duffii) .26 2.6.4 Sơ lược Lưỡi rắn (Hedyotis corymbosa L.) 27 2.6.5 Sơ lược Lưỡi rắn trắng (Hedyotis diffusa Willd.) 28 2.6.6 Sơ lược Gáo trắng (Neolamarckia cadamba (Roxb.) Bosser) 29 2.6.7 Sơ lược Gáo vàng (Nauclea orientalis L.) .30 Chương 3: Phương pháp nghiên cứu 32 3.1 Phương tiện nghiên cứu 32 3.1.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 32 3.1.2 Nguyên vật liệu 32 3.1.3 Thiết bị hóa chất 33 3.2 Phương pháp nghiên cứu 34 3.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 34 3.2.2 Điều tra loại dược liệu dùng điều trị bệnh gan .34 3.2.3 Thu mẫu chiết cao số thuộc họ Cà phê 35 3.2.4 Sàng lọc hoạt tính kháng oxy hóa in vitro cao chiết .35 3.2.5 Khảo sát hiệu bảo vệ gan cao chiết mơ hình chuột .38 3.2.6 Thử nghiệm tính an tồn cao chiết 40 3.2.7 Chiết cao phân đoạn thử hoạt tính sinh học cao phân đoạn 42 3.2.8 Phân lập, tinh chế xác định cấu trúc hóa học hợp chất từ cao phân đoạn có hoạt tính bảo vệ gan hiệu 42 3.2.9 Xử lý số liệu 43 Chương 4: Kết thảo luận 44 4.1 Điều tra dược liệu sử dụng điều trị bệnh gan 44 4.2 Hiệu suất ly trích cao số thuộc họ Cà phê 47 4.3 Hiệu kháng oxy hóa in vitro cao chiết 49 4.3.1 Hàm lượng polyphenol, flavonoid alkaloid tổng cao chiết 49 4.3.2 Hiệu kháng oxy hóa in vitro cao chiết 50 4.3.3 Hiệu kháng viêm in vitro cao chiết 59 4.4 Khả bảo vệ gan cao chiết 62 4.4.1 Khả làm giảm enzyme gan cao chiết 62 4.4.2 Khả kháng oxy hóa in vivo cao chiết chuột tổn thương gan CCl4 66 Phụ lục 2.M.1 Phổ HSQC toàn phần Phụ lục 2.M.2 Phổ HSQC giãn rộng Phụ lục 2.M.3 Phổ HSQC giãn rộng Phụ lục 2.N PHỔ HMBC CỦA HỢP CHẤT NO02 Phụ lục 2.N.1 Phổ HMBC toàn phần Phụ lục 2.N.2 Phổ HMBC giãn rộng Phụ lục 2.N.3 Phổ HMBC giãn rộng Phụ lục 2.N.4 Phổ HMBC giãn rộng Phụ lục 2.N.5 Phổ HMBC giãn rộng Phụ lục 2.N.6 Phổ HMBC giãn rộng Phụ lục 2.O PHỔ COSY CỦA HỢP CHẤT NO02 Phụ lục 2.O.1 Phổ COSY toàn phần Phụ lục 2.O.2 Phổ COSY giãn rộng Phụ lục 2.O.3 Phổ COSY giãn rộng Phụ lục 2.O.4 Phổ COSY giãn rộng Phụ lục PHỤ LỤC PHIẾU ĐIỀU TRA THỰC ĐỊA ... KIM ĐỊNH Mã số NCS: P0915002 KHẢO SÁT HIỆU QUẢ KHÁNG OXY HĨA VÀ BẢO VỆ GAN TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT CỦA MỘT SỐ CÂY THUỘC HỌ CÀ PHÊ (Rubiaceae) LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 62420201... phenolic alkaloid Nhiều loại thuộc họ Cà phê sử dụng y học dân gian với tác dụng chữa bệnh khác Nghiên cứu thực nhằm khảo sát khả kháng oxy hóa bảo vệ gan số thuộc họ Cà phê Sử dụng phương pháp điều... Chất kháng oxy hóa ngoại sinh chia làm hai nhóm chất kháng oxy hóa tự nhiên chất kháng oxy hóa tổng hợp Chất kháng oxy hóa tự nhiên Các chất kháng oxy hóa tự nhiên có hoạt tính kháng oxy hóa cao