-Chất chuẩn AZTR –Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương, độ tinh khiết 97,27%.
-Methanol tinh khiết loại dựng cho sắc ký (HPLC, Merck - Đức) -Acid hydroclorid đặc HCl 36-38% kl/kl (HPLC, Merck - Đức) -Acid sulfuric đặc H2SO4 98% kl/kl (HPLC, Merck - Đức) -Acid nitric đặc HNO3 70% kl/kl (HPLC, Merck - Đức) -Nước cất 2 lần
2.2.2.Dụng cụ và thiết bị
-Mỏy quang phổ huỳnh quang Cary Eclipse Fluorescence Spectrophotometer của Agilent.
-Cõn phõn tớch Sartorius, độ chớnh xỏc 0,1mg. -Bếp điều nhiệt
-Nhiệt kế, đồng hồ bấm giõy Casio
-Dụng cụ thủy tinh: Bỡnh định mức 25mL, 50mL, 100mL….,ống đong 20mL, pipet cỏc loại: Pipet chớnh xỏc 5mL, 10mL, micro pipet, pipet Pasteur…,đũa thủy tinh, phễu lọc
-Giấy lọc, giấy cõn, bỡnh tia nước cất
2.3.PHƢƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG NGHIấN CỨU. 2.3.1.Phƣơng phỏp nghiờn cứu.
-Dựa vào cụng thức phõn tử, tớnh chất lý húa của AZTR để tạo dẫn chất của nú trong acid đặc tạo thành dung dịch cú khả năng phỏt huỳnh quang
Cơ chế: Trong mụi trường acid tạo sản phẩm màu cú khả năng phỏt huỳnh quang do liờn kết glycoside của AZTR bị cắt , đồng thời phản ứng tạo muối của nhúm amin bậc 3 với acid.
-Dựng phương phỏp quột đồng bộ phổ huỳnh quang để xõy dựng phương phỏp định lượng
-Tiến hành thực nghiệm, số liệu thực nghiệm được xử lý thống kờ
2.3.2.Nội dung nghiờn cứu.
2.3.2.1.Xõy dựng phƣơng phỏp định lƣợng
-Lựa chọn dung mụi để chiết AZTR từ trong chế phẩm. -Xõy dựng điều kiện tạo dẫn xuất trong acid đặc của AZTR
Loại acid dựng để tạo dẫn xuất
Nồng độ acid sử dụng
Nhiệt độ tối ưu để tạo dẫn xuất
-Xõy dựng chương trỡnh quột đồng bộ phổ huỳnh quang
Khoảng bước súng để quột phổ, tốc độ quột, độ rộng khe sỏng, độ phõn giải.
Độ chờnh lệch giữa bước súng phỏt xạ và bước súng kớch thớch (delta ): = em - ex.
2.3.2.2.Thẩm định phƣơng phỏp phõn tớch
- Khoảng tuyến tớnh
- Độ đỳng của phương phỏp - Độ chớnh xỏc của phương phỏp
2.3.2.3.Ứng dụng phƣơng phỏp đó xõy dựng để định lƣợng AZTR trong chế phẩm. 2.3.2.4. Một số cụng thức tớnh toỏn[6] - Trung bỡnh cỏc kết quả: n i i x n X 1 1 - Độ lệch chuẩn: s = 2 1 ) ( 1 1 x x n i n i
- Độ lệch chuẩn tương đối: RSD (%) = 100
x s