Chuẩn bị một dãy nồng độ chuẩn của cefaclor trong huyết tương trắng với các nồng độ trong khoảng 0,5 – 30 µg/mL. Tiến hành phân tích các mẫu. Từ đáp ứng píc của cefaclor tại các nồng độ tương ứng, xác định sự tương quan tuyến tính giữa đáp ứng píc và các nồng độ đã pha.
Xây dựng phương trình hồi quy và xác định hệ số tương quan tuyến tính r. Tính lại nồng độ theo phương trình hồi quy đã xây dựng, xác định độ đúng với từng nồng độ.
2.2.4.3. Giới hạn định lượng dưới (LLOQ)
Tiến hành tiêm sắc ký 6 mẫu trắng và 6 mẫu chuẩn có nồng độ trong khoảng 0,5 µg/ml. Ghi lại đáp ứng píc của mẫu trắng và mẫu chuẩn. Tính lại nồng độ của các mẫu khảo sát dựa vào đường chuẩn đã xây dựng trong cùng điều kiện. Tính % độ lệch giữa các kết quả của 6 lần phân tích.
2.2.4.4. Độ đúng, độ lặp lại
a. Độ đúng
Tiến hành chạy sắc ký các lô mẫu bao gồm LQC (1,5 µg/mL), MQC (10,0 µg/mL), HQC (25,0 µg/mL). Mỗi lô mẫu gồm ít nhất 5 mẫu độc lập có cùng nồng độ. Xác định kết quả định lượng các mẫu QC theo đường chuẩn đã xây dựng trong cùng điều kiện.
So sánh giá trị trung bình các lần định lượng tại mỗi nồng độ với giá trị thực.
b. Độ lặp lại
- Độ lặp lại trong ngày:
Dựa theo đường chuẩn pha trong huyết tương trắng tiến hành trong cùng điều kiện, tính lại nồng độ của các mẫu QC. Xác định độ lặp lại trong ngày bằng cách tính toán RSD giữa các lần định lượng của mỗi nồng độ được phân tích trong cùng một ngày.
-Độ lặp lại khác ngày:
Tiến hành tương tự như xác định độ lặp lại trong ngày của các mẫu QC. Tính giá trị RSD của kết quả định lượng cho mỗi nồng cho mỗi nồng độ trong ít nhất 3 ngày phân tích khác nhau.
2.2.4.5. Hiệu suất chiết (Tỷ lệ thu hồi)
Tiến hành sắc ký các lô mẫu QC bao gồm LQC, MQC, HQC theo quy trình đã xây dựng, mỗi lô mẫu gồm ít nhất 5 mẫu độc lập có cùng nồng độ. Song song tiến hành định lượng các mẫu chuẩn pha trong dung môi không qua giai đoạn chiết tách, có nồng độ tuơng ứng với các mẫu QC.
So sánh kết quả đáp ứng của cefaclor trong mẫu QC pha trong huyết tương (có qua chiết tách) với đáp ứng của cefaclor trong mẫu pha trong dung môi (không qua chiết tách)