- Mẫu huyết tương trắng không chứa cefaclor.
- Mẫu huyết tương tự tạo chứa chuẩn cefaclor: Pha dung dịch chuẩn gốc cefaclor nồng độ chính xác khoảng 1000 µg/mL trong MeOH. Từ dung dịch chuẩn gốc chuẩn bị 6 dung dịch chuẩn làm việc WSS1, WSS2, ...WSS6
trong MeOH 50% có nồng độ chính xác khoảng 5, 10, 30, 50, 100 và 300 µg/mL.
Pha dãy đường chuẩn gồm 1 mẫu huyết tương trắng (blank plasma) và 6 mẫu huyết tương có pha chuẩn cefaclor và chuẩn nội cephalexin theo bảng 2.6.
Bảng 2.6. Cách chuẩn bị đường chuẩn mẫu huyết tương tự tạo
STT Mẫu Blank S1 S2 S3 S4 S5 S6 Nồng độ (µg/mL) 0 0,5 1,0 2,0 5,0 10,0 30,0 1 VWSS 1 (µL) - 100 - - - - - 2 VWSS 2 (µL) - - 100 - - - - 3 VWSS 3 (µL) - - - 100 - - - 4 VWSS 4 (µL) - - - - 100 - - 5 VWSS 5(µL) - - - - - 100 - 6 VWSS 6(µL) - - - - - - 100 7 VHuyết tương trắng (µL) 1000 900 900 900 900 900 900
- Mẫu kiểm chứng (QC) gồm 3 loại:
+ LQC: Nồng độ gấp 3 lần nồng độ LLOQ + MQC: Nồng độ bằng 50-80% Cmax
+ HQC: Nồng độ bằng 75-90% nồng độ ULOQ
Các mẫu LQC, MQC, HQC có nồng độ lần lượt là: 1,5; 10,0; 25,0 µg/mL được chuẩn bị tương tự như các mẫu huyết tương tự tạo chứa chuẩn cefaclor. Cách chuẩn bị các mẫu QC được trình bày ở bảng 2.7.
Bảng 2.7. Cách chuẩn bị mẫu QC
STT QC Nồng độ (µg/mL) VWSS (µL) VHuyết tương trắng (µL)
1 LQC 1,5 50 (WSS3) 950 2 MQC 10,0 100 (WSS5) 900 3 HQC 25,0 500 (WSS4) 500
- Chuẩn bị mẫu giới hạn định lượng dưới LLOQ 0,5 µg/mL như sau: Dùng micropippette lấy chính xác 100 µLdung dịch chuẩn làm việc WSS1, pha loãng bằng huyết tương trắng vừa đủ 1 mL.