Định tính bằng phản ứng hóa học
Lấy một ít cắn các phân đoạn: cắn H, cắn E, cắn B, cắn N hòa tan bằng các dung môi ethanol 90%, nước, ether dầu hỏa thu được các dịch chiết tương ứng để làm các phản ứng định tính.
Flavonoid: phản ứng cyanidin.
Coumarin: Mở đóng vòng lacton, phản ứng với thuốc thử diazo. Anthranoid: Phản ứng Borntraeger.
Saponin: Hiện tượng tạo bọt, phản ứng Salkowski.
Tanin: Phản ứng với sắt (III) clorid 5%, chì acetat 10%, gelatin 1%. Aicd amin: Phản ứng với thuốc thử Ninhydrin 3%.
Đường khử: Phản ứng với thuốc thử Felling. Polysaccharid: Phản ứng với thuốc thử Lugol. Chất béo: Vết mờ trên giấy lọc.
Sterol: Phản ứng Liberman - Bouchardt. Caroten: Phản ứng với acid sulfuric đặc.
Kết quả định tính bằng phản ứng hóa học thể hiện bảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả định tính cắn các phân đoạn bằng phản ứng hóa học
Nhóm chất Phản ứng Hiện tượng dương tính Kết quả Cắn H Cắn E Cắn B Cắn N
Flavonid Phản ứng cyanidin màu đỏ - + + +
Coumarin
Mở đóng vòng lacton ống 1 tủa như ống
2 - - - +
Thuốc thử diazo màu đỏ + + + +
Anthranoid Phản ứng Borntraeger Lớp nước màu đỏ
khi cho dd NaOH - + - -
Saponin
Hiện tượng tạo bọt Cột bọt bền trong
15 phút - + + +
Phản ứng Salkowski vòng tím đỏ giữa 2
lớp chất lỏng - + + +
Tanin
Sắt (III) clorid 5% tủa xanh đen + + + + Chì acetat 10% tủa bông trắng + + + +
Gelatin 1% tủa bông trắng - - - +
Acid amin Thuốc thử Ninhydrin 3% màu tím - - - + Đường khử Thuốc thử Felling tủa đỏ gạch - - - + Polysaccharid Dung dịch Lugol ống 1 màu nhạt
hơn ống 2 - - - +
Chất béo Vết mờ trên giấy lọc Có vết mờ + - - - Sterol Phản ứng Liberman-
Bouchardt
Vòng tím đỏ giữa 2 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
lớp chất lỏng + - - -
Caroten Acid sulfuric đặc Màu xanh + - - -
Ghi chú: (-) phản ứng âm tính. (+) phản ứng dương tính. Sơ bộ kết luận
Cắn H có: Sterol, caroten, chất béo. Cắn E có: Flavonoid, anthranoid, saponin. Cắn B có: Flavonid, saponin. Cắn N có: Flavonoid, acid amin, đường khử, polysaccarid, tanin, coumarin, saponin.
Định tính bằng sắc ký lớp mỏng
Dung dịch chấm sắc ký: có nồng độ khoảng 0,5mg/ml.
Bản mỏng silica gel 60 F254 được hoạt hóa ở 1100C trong 1 giờ. Bão hòa dung môi trong 1 giờ.
Quan sát sắc ký đồ thu được sau khi khai triển với hệ dung môi thích hợp dưới ánh sáng tử ngoại ở 2 bước sóng λ=254 nm, λ=366 nm và sau khi hiện màu bằng dung dịch acid sulfuric 10% (sấy ở 1100C trong 15 phút).
Phân đoạn n-hexan Các hệ dung môi đã khai triển: Hệ 1: Chloroform: aceton (9:1) Hệ 2: Chloroform: methanol (6:1) Hệ 3: n-hexan: aceton (3:1).
Trong đó hệ 2 tách được nhiều vết, các vết tách nhau rõ nhất (Hình 3.4).
Hình 3.4. Sắc ký đồ của phân đoạn n-hexan ở hệ dung môi chloroform: methanol (6:1).
Chú thích:
a: Sắc ký đồ quan sát ở UV 254nm.
b,d: Sắc ký đồ quan sát ở UV 366nm trước và sau khi phun thuốc thử. c: Sắc ký đồ sau khi hiện màu bằng thuốc thử quan sát ở ánh sáng thường.
Nhận xét: Trên sắc ký đồ của phân đoạn n-hexan sau khi phun thuốc thử, quan sát các vết hiện rõ hơn so với khi quan sát ở UV 254nm và 366nm. Quan sát ở ánh sáng thường sau khi phun thuốc thử thấy xuất hiện 08 vết với Rf tương ứng (Bảng 3.4).
Bảng 3.5. Bảng giá trị Rf của các vết ở phân đoạn n-hexan
STT 1 2 3 4 5 6 7 8
Rf 0.195 0,275 0,468 0,574 0,611 0,709 0,763 0,859 Phân đoạn ethylacetat
Các hệ dung môi đã khi triển: Hệ 1: Chloroform: methanol (6:1).
Hệ 2: Toluen: ethyl acetat: acid formic (4:6:0,5). Hệ 3: n-hexan: aceton (3:1).
Trong đó hệ 1 tách được nhiều vết, các vết tách nhau tốt nhất thể hiện ở hình 3.5.
Hình 3.5. Sắc ký đồ của phân đoạn ethyl acetat ở hệ dung môi chloroform: methanol (6:1).
Chú thích:
a: Sắc ký đồ quan sát ở UV 254nm.
b,d: Sắc ký đồ quan sát ở UV 366nm trước và sau khi phun thuốc thử. c: Sắc ký đồ sau khi hiện màu bằng thuốc thử quan sát ở ánh sáng thường.
Nhận xét: Trên sắc ký đồ của phân đoạn n-hexan sau khi phun thuốc thử, quan sát các vết hiện rõ hơn so với khi quan sát ở UV 254nm và 366nm. Quan sát ở ánh sáng thường sau khi phun thuốc thử thấy xuất hiện 06 vết với Rf tương ứng (Bảng 3.5).
Bảng 3.6. Bảng giá trị Rf tương ứng của các vết ở phân đoạn ethyl acetat
STT 1 2 3 4 5 6
Rf 0,128 0,165 0,474 0,600 0,747 0,809 Phân đoạn n-butanol
Hệ dung môi đã khai triển: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hệ 1: Chloroform: methanol (4:1).
Hệ 2: Chloroform: methanol: nước (65:35:10). Hệ 3: n-butanol: acid acetic: nước (4:2:1). Hệ 4: Toluen: ethyl acetat: acid acetic (5:2:1).
Trong đó hệ 1 các vết tách tốt nhất thể hiện ở hình 3.6.
Hình 3.6. Sắc ký đồ của phân đoạn n-butanol ở hệ dung môi chloroform: methanol (4:1).
Chú thích:
a: Sắc ký đồ quan sát ở UV 254nm.
b,d: Sắc ký đồ quan sát ở UV 366nm trước và sau khi phun thuốc thử. c: Sắc ký đồ sau khi hiện màu bằng thuốc thử quan sát ở ánh sáng thường.
Nhận xét: Trên sắc ký đồ của phân đoạn n-hexan sau khi phun thuốc thử, quan sát các vết hiện rõ hơn so với khi quan sát ở UV 254nm và 366nm. Quan sát ở UV 366 nm xuất hiện 03 vết với Rf tương ứng (bảng 3.7).
Bảng 3.7. Bảng giá trị Rf tương ứng của các vết ở phân đoạn n-butanol
STT 1 2 3
Rf 0,153 0,245 0,415