3.2.1. Định tính xác định nhóm hợp chất trong hạt Vải
Định tính alcaloid
Cho 10 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 250ml, thấm ẩm dược liệu bằng dung dịch amoniac đặc, đậy bình kín trong 30 phút. Cho thêm 20 ml chloroform, lắc đều ngâm trong 24 giờ. Lọc lấy dịch chiết cho bình gạn. Lắc dịch chiết chloroform với dung dịch acid sulfuric 1N 2 lần, mỗi lần 10 ml. Để phân lớp, gạn lấy dịch chiết acid cho vào 3 ống nghiệm để làm phản ứng.
- Ống 1: Cho 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat. Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa nâu đến đỏ nâu.
- Ống 2: Cho 2-3 giọt Dragendorff. Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa từ vàng cam đến đỏ.
- Ống 3: cho 2-3 giọt thuốc thử Mayer. Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa trắng đến vàng,
Kết quả: Cả 3 ống không có tủa.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải không có alcaloid.
Định tính flavonoid
Lấy 5 g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml có nút mài, thêm 20ml ethanol 90%. Đun cách thủy 10 phút. Lọc nóng qua giấy lọc gấp nếp. Dùng dịch lọc để làm các phản ứng:
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm ít bột magnesi. Nhỏ từ từ vài giọt HCl đậm đặc (2-3 giọt) vào ống nghiệm. Sau đó để yên vài phút. Phản ứng dương tính khi dung dịch chuyển từ vàng sang đỏ.
Kết quả: Dung dịch chuyển từ vàng sang đỏ. - Phản ứng với kiềm.
Phản ứng với NaOH: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm vài giọt dung dịch NaOH 10%, quan sát hiện tượng. Sau đó thêm 1ml nước cất. Phản ứng dương tính nếu có tủa vàng khi kiềm hóa, thêm nước thì tủa tan.
Kết quả: Xuất hiện tủa vàng, thêm nước tủa tan.
Phản ứng với hơi amoniac: Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc. Để khô, quan sát dưới ánh sáng thường, sau đó hơ lên miệng amoniac đậm đặc. Nhỏ 1 giọt khác làm chứng không hơ qua amoniac. So sánh màu sắc với vết chứng. Phản ứng dương tính nếu màu vết thử đậm hơn màu vết chứng.
Kết quả: Màu vết thử đậm hơn màu vết chứng. - Phản ứng với thuốc thử diazo.
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hóa bằng dung dịch kiềm (dung dịch NaOH, KOH, Na2CO3), thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha, lắc đều, đun nóng. Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu đỏ.
Kết quả: Xuất hiện tủa đỏ.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có flavonoid.
Định tính coumarin
Lấy 5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml có nút mài. Thêm 20 ml ethanol 90%. Đun cách thủy 10 phút, lọc nóng. Dùng dịch lọc để làm phản ứng:
- Phản ứng đóng mở vòng lacton.
Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1ml dịch chiết. Ống 1 thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10%. Ống 2 để nguyên.
Đun cách thủy cả 2 ống đến sôi. Để nguội, quan sát.
Acid hóa ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, quan sát.
Phản ứng dương tính nếu ống1 có tủa vàng khi kiềm hóa, thêm nước thì tủa tan, acid hóa lại có tủa trở lại; ống 2 có tủa đục khi thêm nước.
Kết quả: Ống 1 có tử như ống 2. - Phản ứng diazo hóa:
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm 2ml dung dịch NaOH 10%, đun cáh thủy đến sôi. Để nguội, thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha. Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu đỏ.
Kết quả: xuất hiện màu đỏ.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có coumarin.
Định tính anthranoid
- Phản ứng Borntraeger.
Cho 5g bột dược liệu vào bình nón 100ml, thêm 50ml dung dịch H2SO4 10%. Đun sôi cách thủy trong 10 phút. Lọc nóng, cho dịch chiết và bình gạn. Để nguội, rồi lắc với 5ml chloroform. Lấy dịch chiết chloroform làm phản ứng.
Cho vào 2 ống nghiệm:
Ống 1: 1ml dịch chiết chloroform + 1ml dung dịch NH4OH 10% Ống 2: 1ml dịch chiết chloroform + 1ml dung dịch NaOH 10%.
Lắc nhẹ, quan sát. Phản ứng dương tính khi ống 1 lớp nước có màu vàng, ống 2 có lớp nước màu đỏ.
Kết quả: Lớp nước ống 1 màu vàng. Lớp nước ống 2 màu đỏ. - Phản ứng vi thăng hoa.
Cho 1g bột dược liệu lên nắp nhôm. Hơ nhẹ trên nguồn nhiệt đến khi bay hơi hết nước trong dược liệu. Đặt lên miệng nắp nhôm một lam kính có để miếng bông tẩm nước lạnh. Tiếp tục đốt nắp nhôm trên nguồn nhiệt. Sau 5-10 phút lấy lam kính ra để nguội, soi dưới kính hiển vi. Phản ứng dương tính khi trên lam kính có tinh thể hình kim (Hình 3.2).
Hình 3.2. Tinh thể hình kim. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có anthranoid.
Định tính saponin
- Quan sát hiện tượng tạo bọt.
Cho 1g bột dược liệu vào ống nghiệm to, thêm 5 ml nước, đun sôi nhẹ, lọc nóng. Dịch lọc cho vào ống nghiệm to, thêm 5ml nước. Lắc mạnh trong 5 phút theo chiều dọc ống nghiệm, để yên, quan sát. Phản ứng dương tính nếu cột bọt bền trong 15 phút.
Kết quả: Cột bọt bền trong 15 phút. - Phản ứng tạo màu Sankowski.
Cho vào ống nghiệm to 1g bột dược liệu, thêm vào 5ml ethanol 90%, đun sôi cách thủy, lọc nóng, lấy dịch lọc. Cho 1ml dịch lọc vào 1 ống nghiệm khác. Để ống nghiệm nghiêng 45o, cho từ từ 1ml acid sulfuric đặc theo thành ống nghiệm. quan sát. Phản ứng dương tính khi xuất hiện vòng nâu đỏ ở mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng.
Kết quả: Xuất hiện vòng nâu đỏgiữa 2 lớp chất lỏng. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có saponin.
Định tính tanin
Cho vào cốc có mỏ 5g bột dược liệu, thêm 20ml nước , đun sôi cách thủy 5 phút. Lọc nóng qua giấy lọc. Lấy dịch lọc chia vào 3 ống nghiệm để dịnh tính:
Ống 1: thêm 1 giọt dung dịch sắt (III) clorid 5%. Ống 2: thêm 1 giọt dung dịch chì acetat 10%. Ống 3: thêm vào dung dịch gelatin 1%.
Phản ứng dương tính khi ống 1 có tủa màu xanh đen, ống 2 có tủa bông trắng, ống 3 có tủa bông trắng.
Kết quả: ống 1 có tủa xanh đen. ống 2 có tủa bông trắng. ống 3 có tủa bông trắng. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có tanin.
Định tính acid hữu cơ
Cho 1g bột dược liệu vào ống nghiệm lớn, thêm 5ml nước. Đun sôi cách thủy 5 phút, lọc nóng. Lấy dịch lọc, để nguội. Thêm vào dịch lọc ít tinh thể Na2CO3. Phản ứng dương tính khi có khí CO2 bay lên.
Kết quả: Không xuất hiện khí.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải không có acid hữu cơ.
Định tính acid amin
Cho 1g bột dược liệu vào ống nghiệm lớn, thêm 5ml nước cất. Đun sôi cách thủy 5 phút, lọc nóng, lấy dịch lọc. Lấy 2ml dịch lọc cho vào ống nghiệm khác, thêm 3 giọt thuốc thử Ninhydrin 3%, đun sôi cách thủy 10 phút. Phản ứng dương tính khi dung dịch xuất hiện màu tím.
Kết quả: Xuất hiện màu tím.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có acid amin.
Định tính đƣờng khử
Lấy 1g bột dược liệu cho vào ống nghiệm lớn, thêm 5ml nước, đun sôi cách thủy 5 phút, lọc nóng, lấy dịch lọc.Cho 2ml dịch lọc vào ống nghiệm khác, thêm 3 giọt thuốc thử Felling A và 3 giọt thuốc thử Felling B. Đun sôi cách thủy 3 phút. Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa màu đỏ gạch.
Kết quả: Xuất hiện tủa đỏ gạch.
Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có đường khử.
Định tính polysaccharid
Lấy 1g bột dược liệu cho vào ống nghiệm lớn, thêm 10ml nước, đun sôi cách thủy vài phút, lọc nóng, lấy dịch lọc ch vào 2 ống nghiệm.
Ống 1: 4ml dịch chiết + 5 giọt dung dịch lugol. Ống 2: 4ml dịch chiết + 5 giọt nước.
Phản ứng dương tính khi ống 1 nhạt màu hơn ống 2.
Kết quả: Màu ống 1 nhạt hơn ống 2. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có polysaccharid.
Định tính chất béo
Cho 10g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, đổ ngập ether dầu hỏa, ngâm qua đêm, lọc lấy dịch. Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên giấy lọc, hơ nóng cho bay hơi hết dung môi. Phản ứng dương tính khi quan sát thấy có vết mờ trên giấy lọc.
Kết quả: Có vết mờ trên giấy lọc. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có chất béo.
Định tính sterol
Phản ứng Lieberman-Bouchardt.
Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết ether dầu hỏa trên. Bốc hơi dung môi đến khô. Thêm vào ống nghiệm 1ml alhydrid acetic, lắc kỹ. Để nghiêng ống nghiệm 45o, thêm acid sulfuric đặc từ từ theo thành ống nghiệm. Phản ứng dương tính khi mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng xuất hiện vòng tím đỏ.
Kết quả: Xuất hiện vòng tím đỏ giữa 2 lớp chất lỏng. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải không có sterol.
Định tính caroten.
Lấy 5ml dịch chiết ether dầu hỏa trên cho vào ống nghiệm, bốc hơi trên nồi cách thủy đến khô, thêm 1-2 giọt dung dịch acid sulfuric đặc, lắc đều. Phản ứng dương tính khi dịch lỏng chuyển sang màu xanh.
Kết quả: Dịch lỏng chuyển sang màu xanh. Sơ bộ kết luận: Hạt Vải có caroten.
Bảng 3.1. Kết quả định tính hạt Vải bằng phản ứng hóa học STT Nhóm chất Phản ứng Kết quả Kết luận 1 Alcaloid Thuốc thử Mayer - Không Thuốc thử Bouchardat - Thuốc thử Dragendorff - 2 Flavonoid Phản ứng Cyanidin + Có Kiềm + Sắt (III) clorid 5% +
Với thuốc thử diazo +
3 Coumarin Phản ứng đóng mở vòng lacton + Có
Với thuốc thử diazo +
4 Anthranoid
Phản ứng Borntrager +
Có
Vi thăng hoa +
5 Saponin
Hiện tượng tạo bọt +
Có
Phản ứng Salkowski +
6 Tanin
Dung dịch sắt (III) clorid 5% +
Có Dung dịch chì acetat 10% +
Dung dịch gelatin 1% +
7 Acid hữu cơ Na2CO3 - Không
8 Acid amin Thuốc thử Ninhydrin 3% + Có
9 Đường khử Thuốc thử Felling + Có
10 Polysaccarid dung dịch Lugol + Có
11 Chất béo Vết mờ trên giấy lọc + Có
12 Sterol Phản ứng Lieberman-Bouchardt + Có
13 Caroten Acid sulfuric đặc + Có
Ghi chú: (-): phản ứng âm tính. (+): Phản ứng dương tính.
Nhận xét: Hạt Vải có một số nhóm hợp chất: flavonoid, coumarin, anthranoid,
saponin, tanin, acid amin, đường khử, polysaccharid, chất béo, sterol, caroten.