Từ sắc ký đồ hình 3.6 cho thấy, sản phẩm kết tinh được là một hỗn hợp gồm các steviol glycosid và còn lẫn một lượng nhỏ tạp chất cần phải được loại bỏ. Mặt khác, nhu cầu sử dụng trong sản xuất cũng như trong công tác nghiên cứu từng thành phần glycosid riêng biệt đang không ngừng tăng nên việc phân lập steviosid và rebaudiosid A là rất cần thiết. Bên cạnh đó, các nhà khoa học cũng đã chỉ ra rằng các steviol glycosid mặc dù ngọt hơn đường saccharose nhiều lần nhưng lại có dư vị không mong muốn, trong đó rebaudiosid A là chất có độ ngọt đồng nhất, không có dư vị đắng và được công nhận là có tính chất cảm quan hấp dẫn nhất trong các steviol glycosid. Trong khi steviosid có độ ngọt thấp hơn, lại có dư vị đắng, dư vị đó xuất hiện ngay cả trong mẫu tinh khiết đến 99% [12], [15], [30], [31]. Cũng vì lí do đó mà trên thị trường hiện nay, các sản phẩm đường cỏ ngọt có thành phần đa số là rebaudiosid A. Tuy nhiên đến nay ở Việt Nam chưa có nghiên cứu nào phân lập rebaudiosid A từ cỏ ngọt.
Từ những nhu cầu thực tế đó, chúng tôi tiến hành xây dựng phương pháp phân lập steviosid và rebaudiosid A từ glycoside toàn phần vừa thu được.
Một số nghiên cứu đã phân lập được stevisoid và rebaudiosid A bằng phương pháp sắc ký cột [28], tuy nhiên phương pháp khá phức tạp, chi phí cao. Bên cạnh đó, có một số nghiên cứu chỉ ra rằng có thể có thể tách riêng được rebaudiosid A và steviosid từ hỗn hợp glycosid toàn phần bằng phương pháp đơn giản hơn là tái kết tinh trong một số dung môi như: methanol, ethanol hay hỗn hợp dung môi methanol-nước, ethanol-nước,… [12], [30], [31]. Vì vậy, chúng tôi định hướng phân lập steviosid và rebaudiosid A bằng phương pháp kết tinh phân đoạn trong methanol.