thải bằng LC - MS/MS
2.2.1.1. Phương pháp thu thập, xử lý mẫu thô trước khi tiến hành chiết tách
- Lấy nước thải từ nhà máy sản xuất kháng sinh trong giai đoạn nhà máy không sản xuất kháng sinh.
- Xử lý mẫu thô: lọc qua giấy lọc, màng lọc thủy tinh, màng lọc 0,45µm, acid hóa đến pH 2 bằng HCl 10%, loại tạp bằng Na2EDTA.
- Bảo quản mẫu sau khi lấy ở 2 - 8 oC.
2.2.1.2. Phương pháp chiết tách β-lactam từ nước thải
Do mẫu có tính chất phức tạp và lượng chất phân tích trong mẫu (nếu có) rất nhỏ, lựa chọn phương pháp chiết pha rắn để chiết tách và làm giàu mẫu với các kháng sinh β-lactam nghiên cứu.
- Loại cột chiết sử dụng: Cột chiết pha rắn OASIS HLB Cartridge 200 mg, 6ml
- Quy trình hoạt hóa cột: Hoạt hóa cột bằng 10ml MeOH + 5ml H2O + 5ml H2O pH 2.
- Dung môi rửa giải: 1 ml hỗn hợp dung môi MeOH : H2O (1:1)
2.2.1.3. Xây dựng phương pháp xác định hàm lượng cefadroxil và cefotaxim trong nước bằng phương pháp LC - MS/MS
Xây dựng quy trình phân tích sao cho có thể sử dụng định lượng đồng thời Cefadroxil và Cefotaxim trong mẫu thử nghiên cứu. Tiến hành khảo sát theo các nội dung sau:
Khảo sát lựa chọn chuẩn nội: đảm bảo phân tách tốt và phù hợp với các chất phân tích (có tính chất tương tự với các chất phân tích), dự kiến sử dụng chuẩn nội là đồng vị đánh dấu của kháng sinh nghiên cứu.
Khảo sát điều kiện khối phổ:
Tiến hành khảo sát các điều kiện khối phổ ở chế độ autotune: + Nguồn ion hóa.
+ Tốc độ khí phun + Tốc độ khí làm khô
+ Điều kiện phân mảnh ion mẹ để tạo ion con. + Lựa chọn ion con để định lượng, định tính.
Khảo sát điều kiện sắc ký: thành phần và tỷ lệ pha động, tốc độ dòng, thể tích tiêm... để có thể tách và phát hiện đồng thời các kháng sinh Cefadroxil, Cefotaxim ở nồng độ ppb, sắc đồ đẹp, thời gian phân tích không quá dài.
- Pha động: Khảo sát trên ít nhất 2 hệ pha động có thành phần khác nhau, tiến hành phân tích với cả chương trình chạy đẳng dòng và chạy gradient.
- Tốc độ dòng: Khảo sát với 3 mức tốc độ khác nhau, đánh giá sắc ký đồ thu được về thời gian lưu, khả năng tách các chất phân tích.
- Thể tích tiêm: Tiến hành sắc ký với các thể tích tiêm khác nhau trong khoảng từ 1 - 10µl. Đánh giá sắc ký đồ thu được về hình dạng pic, độ lặp lại.