Quy trình bào chế liposome DOX được tiến hành theo các bước đã nêu trong mục 2.2.1:
- Pha ethanol: hòa tan 100mg HSPC, 30mg CHL trong Vml ethanol tuyệt đối (tỷ lệ về thành phần trong công thức được giữ nguyên so với các nghiên cứu tiến hành trước đó).
- Pha nước: 100ml dung dịch đệm citrat 300mM pH 4.
- Tiêm nhanh Vml ethanol vào 100ml dung dịch đệm tốc độ tiêm 0,5ml/s, kết hợp khuấy trộn 4000v/p bằng máy đồng nhất hóa tốc độ cao.
+ V= 3, 5, 7, 10 (ml)
+ Kiểm soát nhiệt độ trong và sau khi tiêm 10 phút (40oC, 50oC, 60oC, 70oC, 80oC) + Kết hợp thêm quá trình làm giảm kích thước tiểu phân bằng đùn qua màng có kích thước 200nm, 100nm để so sánh sự khác nhau giữa các mẫu thu được.
- Cô đặc về 10ml bằng lọc tiếp tuyến.
- Đổi đệm bên ngoài liposome bằng đệm HEPES pH 7,4.
- Nạp dược chất DOX.HCL để đạt nồng độ 2mg/ml kết hợp thiết bị khuấy từ cho DOX.HCL tan hết, ủ ở nhiệt độ 50oC trong 10 phút, bảo quản ở 2 – 8oC trong 24h, sau đó tiến hành định lượng DOX toàn phần và xác định hiệu suất liposome hóa theo các bước đã nêu trong 2.2.2.2.
Trong quá trình nghiên cứu, cố định các bước tiến hành và các thông số: hàm lượng HSPC, CHL, DOX.HCl; loại đệm sử dụng bên trong và bên ngoài liposome; tốc độ
tiêm, tốc độ khuấy trộn; quá trình nạp dược chất: nhiệt độ, thời gian ủ vào bảo quản liposome DOX.
Tiến hành thay đổi các thông số: thể tích ethanol; nhiệt độ trong và sau quá trình khuấy trộn; kết hợp quá trình làm giảm KTTP bằng nén qua màng và khảo sát ảnh hưởng của các thông số nói trên tới KTTP và hiệu suất liposome hóa.