sát với mực chất hấp phụ đang có trong cột, khóa cột lại, dùng một ống nhỏ giọt để hút dung dịch mẫu cho vào đầu cột (đầu của ống nhỏ giọt rẽ xung quanh thành trong của cột phía gắn với mặt thóang của chất hấp phụ). Từ từ mở khóa cột để cho dung dịch mẫu thấm xuống bề mặt chất hấp phụ trên đầu cột, lúc thấy mức dung dịch đã xuống sát mực chất hấp phụ thì khóa cột lại, dung dịch không chảy ra nữa; tiếp tục nạp cho hết lượng mẫu chất vào đầu cột.
20/8/2006 Hợp chất isoprenoit Lê Văn Đăng - Khoa Hoá - ĐHSP
2- SẮC KÍ CỘT :
f) Kỹ thuật nạp mẫu vào đầu cột :
Mở khóa để hạ mực dung dịch mẫu xuống sát mặt
thoáng chất hấp phụ, khóa lại, dùng ống nhỏ giọt cho một lượng nhỏ 5-10 ml dung môi vào đầu cột (nhớ tranh thủ rửa sạch phần đầu cột) lại mở khóa để dung dịch chảy ra, sao cho mặt thóang chất hấp phụ vừa vặn khô. Lại khóa lại, cho thêm một lượng nhỏ dung môi nữa, tiếp tục đến khi thấy mẫu chất đã được gắn chặt vào chất hấp phụ ở phần đầu cột (tức là khi thêm dung môi vào thì dung môi này trong suốt, không bị lây màu của chất mẫu).
Cho một lớp bông gòn hoặc một lớp giấy lọc (hình tròn, dày khoảng 2-3 mm), đường kính bằng với đường kính trong của ống) đặt nhẹ lên mặt thóang của chất hấp phụ; cẩn thận để không làm xáo trộn bề mặt đang nằm ngang ngay nắn của mặt thoáng. Cho thêm dung môi lên đầy cột và bắt đầu quá trình giải li.
20/8/2006 Hợp chất isoprenoit Lê Văn Đăng - Khoa Hoá - ĐHSP
2- SẮC KÍ CỘT :
g) Theo dõi quá trình giải li :
- Dung dịch được giải li ra khỏi cột đượchứng vào eclen nhỏ được đánh số thứ tự và được hứng vào eclen nhỏ được đánh số thứ tự và được cân bì sẵn, mỗi eclen sẽ hứng một thể tích bằng nhau của dung dịch giải li, sau đó làm bay hơi dung môi trong mỗi eclen sẽ thu được cặn; cân cặn. Vẽ đường biểu diễn khối lượng chất cặn trong mỗi eclen theo số thứ tự của eclen hứng trong quá trình giải li.
20/8/2006 Hợp chất isoprenoit Lê Văn Đăng - Khoa Hoá - ĐHSP
2- SẮC KÍ CỘT :
g) Theo dõi quá trình giải li :
Với các mẫu nguyên liệu ban đầu có màu, quá trình giải li màu sắc kí cột có thể được theo quá trình giải li màu sắc kí cột có thể được theo dõi bằng mắt thường, nhờ nhìn thấy các dãy lớp có màu sắc khác nhau, đang tách ra xa nhau trong cột. Theo dõi các lớp màu khác nhau đó và hứng chúng khi chúng được giải li ra khỏi cột. Nhưng trong đa số trường hợp các chất hữu cơ không có màu, phải theo dõi bằng nhiều cách khác nhau.
- Có thể theo dõi quá trình sắc kí cột bởi sắckí bản mỏng, áp dụng cho những phân đoạn dung