Để xác định tác nhân gây bệnh, bước đầu tiên phải phân lập mẫu bệnh và dựa vào các đặc điểm hình thái bước đầu có thể xác định vi sinh vật gây bệnh thuộc họ nào, thậm chí loài nào. Do đó, đặc điểm hình thái là một trong những chỉ tiêu quan trọng trong việc phân loại và giám định. Hình thái bào tử là một trong những đặc điểm quan trọng trong nhận biết loài nấm Phytophthora. Kết quả quan sát hình thái của 20 chủng nấm được nghiên cứu cho thấy:
- Bào tử nang (sporangium) của tất cả các chủng nấm đều có núm, một số chủng nấm có bào tử nang 2 núm. Hình dạng bào tử nang rất biến động: hình cầu, hình trứng, hình ellip, bất quy tắc (hình 3.2). Kích thước bào tử có chiều dài từ 18 - 65 µm, chiều rộng từ 12 - 51 µm. Hầu hết bào tử nang có 1 núm, đôi khi có 2 – 3 núm.
- Bào tử nang hình thành trên cành bào tử nang (sporangiophore) dạng sym (Hình 3.3).
- Tất cả 20 chủng nấm đều hình thành bào tử hậu (chlamydospore) ở mức độ khác nhau. Bào tử hậu có thể hình thành ở đỉnh hoặc giữa sợi nấm (Hình 3.4). Bào tử hậu có hình cầu, đường kính từ 14 - 40 µm. Bào tử hậu không màu hoặc màu hơi nâu, sinh ra ngay sau khi sợi nấm phát triển hoặc muộn hơn.
Hình 3.2. Đặc điểm của bào tử nang: hình cầu, trứng, ellip, bất qui tắc, bào tử nang có hai núm
CCDL 3.6 CCDL 15.1 CCDL 13
Hình 3.3. Bào tử nang hình thành trên cành bào tử mọc dạng sym (minh họa chủng CCDL1.3)
Hình 3.4. Bào tử hậu hình thành ở đỉnh sợi (chủng CCBP 10.1) và ở giữa sợi (chủng CCBP 5)
Các đặc điểm hình thái của các chủng nấm Phytophthora trên ca cao nhìn chung giống với các nấm đã công bố trên ca cao như P. capsici (nhóm 2), P. palmivora, P. megakarya (nhóm 4).
Trên thực tế rất ít khi quan sát được các đặc điểm liên quan tới sinh sản hữu tính như hình thái bao đực (antheridium), bao trứng (oogonium), bào tử trứng (oospore) và cách giao phối dẫn tới không thể định danh loài các chủng nấm
Phytophthora trên ca cao thông qua nghiên cứu hình thái của chúng, vì vậy chúng tôi đã sử dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong việc định danh loài.
CCDL1.3
Bảng 3.8. Đặc điểm hình thái các loài nấm Phytophthora palmivora phân lập từ ca cao (Viện Bảo vệ thực vật, 2013) Stt Chủng Bào tử hậu (ĐK (m)/ vị trí hình thành Cành bào tử nang (sporangiophore)
Bào tử nang (sporangium) Hình dạng Dài (m) Rộng (m) Núm
Lỗ thoát động bào tử (m)
1 CCDL 1.3 19 ( mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip,
bất qui tắc 23-65 16-27 1 núm 5
2 CCDL 2.3 Hiếm, 27( mọc ở giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng 20-37 17-32 1 núm 5 3 CCDL 2.4 25 - 40 (mọc ở đầu, giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 22-50 20-32 1 - 3 núm 5 4 CCDL 3.6 25 - 32 (mọc ở đầu, giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng 22-55 20-42 1 núm 5 5 CCDL 4.2 20 - 30 (mọc ở đầu, giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 22-45 17-35 1 núm 5 6 CCDL 5.1 17 - 25 (mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip,
bất quy tắc 25-47 20-40 1 núm 5
7 CCDL 11.4 25 -27 (mọc ở đầu, mọc nhiều
ở giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng 22-57 17-52 1 - 2 núm 5
8 CCDL 13.2 25 - 30 (mọc ở giữa sợi) Dạng sym Trứng, cầu 25-59 21-51 1 núm 5 9 CCDL 15.1 22 - 25 (mọc ở đầu, giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 25-52 20-37 1 - 2 núm 2.5 - 5
Stt Chủng Bào tử hậu (ĐK (m)/ vị trí hình thành
Cành bào tử nang (sporangiophore)
Bào tử nang (sporangium) Hình dạng Dài (m) Rộng (m) Núm
Lỗ thoát động bào tử (m)
10 CCDL 16.1 20 - 25(mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng 20-42 15-30 1 núm 5 11 CCDN 3 19 - 23 (mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 27-57 17-30 1 núm 5 12 CCDN 4 15 - 17 (mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 22-45 15-30 1 núm 5 13 CCDN 7 25 - 32 (mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng 27-60 22-40 1- 2 núm 5 14 CCDN 8 27 - 35 (mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng 27-50 12—37 1- 2 núm 5 15 CCBP 2 20 - 32 (mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng 27-55 20-40 1- 2 núm 5 16 CCBP 3 14 - 21(mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng 18-48 15-31 1- 2 núm 4-5 17 CCBP 5 21 - 32 (mọc ở đầu, giữa sợi) Dạng sym Hình thành ít bào
tử Cầu, trứng 27-50 22-40 1 núm 5 18 CCBP 10.1 30 - 40(mọc ở đầu sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 23-60 17-40 1 núm 5 19 CCBP 10.2 17 - 32 (mọc ở đầu, giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 20-40 12—40 1 núm 5 20 CCBP 10.3 17 - 30 (mọc ở đầu, giữa sợi) Dạng sym Cầu, trứng, ellip 27-47 17-38 1 núm 5
3.3. Đặc điểm sinh học, sinh thái của nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao