5. Điểm mới của đề tài
3.1.1. Phân lập chủng nấm men S.cerevisiae từ dịch nho
Trong quả đã có những giống nấm men có sẵn, các giống này có khả năng chịu đƣợc những điều kiện khác nhau nhƣ HL đƣờng cao, độ axit cao,… Chọn những quả nho to, đồng đều, không bị dập nát, không bị thối hỏng, đƣợc rửa sạch, để ráo nƣớc, sau đó đem ngâm đƣờng theo tỉ lệ 1:1. Sau khoảng 15 ngày thì vớt xác quả ra và lọc lấy dịch quả. Sau đó tiến hành phân lập trên môi trƣờng vô trùng môi trƣờng phân lập ở đây là môi trƣờng Hansen.
Cách tiến hành: Phân lập trên môi trƣờng thạch đĩa đã vô trùng, chuẩn bị 10 ống nghiệm định mức, dùng pipet hút 9ml nƣớc cất vào mỗi ống. Lấy 1ml dịch quả cho vào ống thứ nhất (dịch pha loãng ở 10-1). Sau đó lại hút 1ml dịch ở ống thứ nhất cho vào ống thứ 2 đƣợc dung dịch có độ pha loãng 10-2
23
tƣơng tự với các ống tiếp theo cho đến ống 9 sẽ có độ pha loãng 10-9. Có thể chọn ở các nồng độ 10-6
– 10-9.
Phân lập: Dùng pipet hút 1 – 2 giọt dịch pha loãng nhỏ vào đĩa Petri có sẵn môi trƣờng Hansen đã đƣợc khử trùng. Sau đó dùng que trang dàn đều lên mặt thạch. Đặt ngƣợc các hộp Petri xuống, dùng giấy báo gọi lại và nuôi trong tủ ấm ở nhiệt độ từ 25 – 300
C. Sau 2 – 3 ngày lấy ra quan sát. Trên bề mặt thạch ta thấy xuất hiện những khuẩn lạc, dựa vào hình thái khuẩn lạc nấm men ta chọn những khuẩn lạc to, tròn, lồi, nhẵn bóng có màu trắng đục đặc trƣng cho nấm men. Kết quả phân lập chọn đƣợc ra 3 mẫu nấm men dùng làm đối tƣợng nghiên cứu tiếp theo.
Hình 3.1. Chủng nấm men phân lập đƣợc trên môi trƣờng thạch đĩa
Sau đó các khuẩn lạc này chúng tôi cấy sang các ống thạch nghiêng đã có sẵn môi trƣờng Hansen vô trùng để giữ giống, sau 2 – 3 ngày lấy ống thạch nghiêng ra quan sát, làm tiêu bản soi kính để kiểm tra hình thái tế bào nấm men. Kí hiệu cho các chủng nấm men thu đƣợc là M1, M2, M3.
24
Hình 3.2. Cấy truyền chủng nấm men M1, M2, M3 trên môi trƣờng thạch nghiêng