* Thành phần và vai trò của các thành phần trong công thức
- Felodipin: Dược chất.
- PVP K30: Chất mang cho hệ phân tán rắn và tá dược dính khô. - PEG 4000: Chất mang cho hệ phân tán rắn và làm tá dược dính khô.
- Poloxamer: Polyme hoạt động bề mặt vừa là chất mang vừa là chất gây thấm làm tăng độ tan của dược chất.
- HPMC: Tá dược tạo cốt kiểm soát giải phóng.
- Lactose monohydrat: Tá dược độn và tạo kênh khuếch tán cho dược chất.
- Magnesi stearat và Aerosil: Tá dược trơn, làm tăng độ trơn chảy của khối bột kép, giảm ma sát, chống dính chày cối, làm bề mặt viên bóng đẹp.
* Bào chế theo phương pháp dập thẳng
Sơ đồ quy trình (phụ lục 2). Mô tả quy trình bào chế:
- Nghiền, rây lactose monohydrat và HPMC qua rây 250. - Nghiền, rây magnesi stearat và Aerosil qua rây 180.
- Tính khối lượng hệ phân tán rắn cho công thức bào chế viên felodipin 5mg giải phóng kéo dài.
- Cân các thành phần theo công thức bào chế.
- Trộn bột kép theo nguyên tắc đồng lượng gồm HPTR, lactose monohydrat, HPMC. Sau đó trộn hỗn hợp bột kép với tá dược trơn magnesi stearat và Aerosil. - Kiểm tra các chỉ tiêu của bột bán thành phẩm gồm hàm ẩm, khả năng trơn chảy, định lượng felodipin trong bột.
- Tính khối lượng trung bình viên để hàm lượng felodipin trong mỗi viên là 5mg. - Dập viên với chày cối ɸ=9mm, lực dập 2,5 tấn, thời gian nén 30 giây.
- Kiểm tra chất lượng viên: Hình thức, độ cứng, độ đồng đều khối lượng, định lượng, đánh giá độ hòa tan.
- Quy mô thực nghiệm 50 viên/mẻ: Đánh giá sàng lọc và tối ưu hóa công thức.
2.2.3. Phƣơng pháp đánh giá chất lƣợng
* Hình thức hệ phân tán rắn
Phương pháp: Cảm quan.
Yêu cầu: Khối bột tơi xốp, màu trắng ngà đều mịn.
*Hình thức viên
Phương pháp: Cảm quan.
Yêu cầu: Viên có hình trụ lồi, màu trắng ngà, cứng chắc, bề mặt bóng đẹp, không bị bong mặt sứt cạnh.
*Xác định hàm ẩm
Phương pháp: Sử dụng cân hàm ẩm Precisa XM60. Yêu cầu: Độ ẩm khối bột dập viên ≤ 5%.
*Độ cứng của viên
Phương pháp: Sử dụng máy đo độ cứng EWERKA.
Yêu cầu: Thử 6 viên lấy giá trị trung bình để đánh giá độ bền cơ học của viên.
2.2.4. Định lƣợng felodipin
* Các dung dịch cần pha:
- Dung dịch 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5: Cân 6,42 g natri dihydrophosphat dihydrat và 7,01 g dinatri hydrophosphat dodecahydrat hòa tan trong khoảng 900ml nước cất, thêm 10,0 g NaLS, siêu âm cho tan hoàn toàn, điều
chỉnh pH đến 6,5, chuyển vào bình định mức 1000 ml, bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng nước cất.
- Dung dịch chuẩn gốc Cg: Cân chính xác 125,0 mg FDP vào bình định mức 50 ml, hòa tan với khoảng 30 ml methanol, siêu âm 5 phút cho tan hoàn toàn bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng methanol (Cg= 2,5 mg/ml).
- Dung dịch chuẩn thêm Ct: Hút chính xác 1,0 ml dd chuẩn gốc vào bình định mức 25 ml, bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 (Ct= 100 µg/ml).
- Dung dịch chuẩn 20 µg/ml: Hút chính xác 20,0 ml dd chuẩn thêm Ct vào bình định mức 100 ml , bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 (Cc= 20 µg/ml).
- Dung dịch chuẩn 10 µg/ml: Hút chính xác 10,0 ml dd chuẩn thêm Ct vào bình định mức 100 ml , bổ sung thể tích vừa đủ đến vạch bằng dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 (Cc= 10 µg/ml).
2.2.4.1: Định lượng FDP bằng phương pháp đo quang + Dung dịch thử:
- Định lượng FDP trong viên nén felodipin 5 mg giải phóng kéo dài:
Cân 10 viên nén và tính khối lượng trung bình viên (mtb (mg)), đem nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột (mc (mg)) tương đương với 10,0 mg FDP cho vào cho vào bình định mức 25 ml, hòa tan trong khoảng 20 ml methanol, siêu âm 25 phút cho dược chất tan hoàn toàn, bổ sung thể tích đến vạch bằng methanol. Sau đó đem ly tâm 4000 v/p/10p. Hút chính xác 5 ml dd trên vào bình định mức 100 ml, bổ sung thể tích đến vạch bằng dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5.
- Định lượng FDP trong hệ phân tán rắn, bột bán thành phẩm:
Tương tự như định lượng FDP trong viên nén FDP 5 mg giải phóng kéo dài, chỉ thay khối lượng bột viên bằng khối lượng bột HPTR hay bột bán thành phẩm.
+ Dung dịch chuẩn: Dung dịch chuẩn 20 µg/ml.
- Đo độ hấp thụ của dd thử và dd chuẩn ở bước sóng 364 nm, mẫu trắng là dd đệm. + Xác định hàm lượng của FDP theo công thức:
- Với viên nén: Hàm lượng phần trăm FDP so với lượng ghi trên nhãn. HL% =
- Với bột: Hàm lượng phần trăm FDP có trong khối bột HL%=
Trong đó:
Dt, Dc: Độ hấp thụ quang của mẫu thử và mẫu chuẩn mtb :khối lượng trung bình viên (mg).
mc: khối lượng bột thành phẩm hoặc bán thành phẩm hoặc bột HPTR (mg).
2.2.4.2: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
+ Điều kiện HPLC: Pha động là Acetonitril : H2O = 80:20, cột: C18 Phenomenex, tốc độ dòng: 1ml/phút, thể tích tiêm: 20 µl, detector: UV 234 nm.
+ Dung dịch chuẩn: Hút chính xác 1,0ml dd chuẩn gốc cho vào bình định mức 25ml, bổ sung vừa đủ thể tích bằng pha động. Sau đó hút 1,0ml dd trên vào bình định mức 10ml, bổ sung thể tích vừa đủ bằng pha động (C= 10 µg/ml).
+ Dung dịch thử:
- Định lượng FDP trong viên nén felodipin 5 mg giải phóng kéo dài:
Cân 10 viên nén và tính khối lượng trung bình viên (mtb (mg)), đem nghiền thành bột mịn. Cân chính xác một lượng bột (mc (mg)) tương đương với 5,0 mg FDP cho vào cho vào bình định mức 50 ml, hòa tan trong khoảng 40 ml methanol, siêu âm 25 phút cho tan hoàn toàn, bổ sung thể tích đến vạch bằng methanol. Sau đó đem ly tâm 4000 v/p/10p. Hút chính xác 5,0 ml dd trên vào bình định mức 50 ml, bổ sung thể tích đến vạch bằng pha động.
- Định lượng FDP trong hệ phân tán rắn, bột bán thành phẩm: Tương tự như định lượng FDP trong viên nén felodipin 5 mg giải phóng kéo dài, chỉ thay khối lượng bột viên bằng khối lượng bột HPTR hay bột bán thành phẩm.
+ Tính hàm lượng FDP theo công thức:
- Với viên nén: Hàm lượng phần trăm FDP so với lượng ghi trên nhãn. HL% =
- Với bột: Hàm lượng phần trăm FDP có trong khối bột HL% =
Trong đó:
ru, rs (mAU): diện tích pic của dd thử, dd chuẩn mtb :khối lượng trung bình viên (mg).
mc: khối lượng bột thành phẩm hoặc bán thành phẩm hoặc bột HPTR (mg).
2.2.5. Phƣơng pháp đánh giá dộ hòa tan felodipin từ viên nén felodipin 5 mg giải phóng kéo dài
* Điều kiện: Thiết bị cánh khuấy giỏ tĩnh, tốc độ khuấy 50 v/p, môi trường hòa tan: 500ml dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5, nhiệt độ môi trường hòa tan: 37±5
oC. thời điểm lấy mẫu: 2h, 4h, 6h, 8h,10h. + Dung dịch chuẩn: Dung dịch chuẩn 10 µg/ml.
+ Dung dịch thử: Cho viên thử vào giỏ tĩnh, và đưa giỏ vào cốc đựng môi trường hòa tan, cho máy hoạt động. Tại các thời điểm 2h, 4h, 6h, 8h, 10h lấy mẫu dịch hòa tan. Mỗi lần hút chính xác 12 ml đem ly tâm 4000 v/p/10 p, thu lấy dung dịch nổi trong, bổ sung 12 ml môi trường hòa tan vào cốc thử hòa tan. Hút chính xác 1ml dd chuẩn thêm (Ct= 100 µg/ml) vào bình định mức 10 ml, bổ sung vừa đủ thể tích bằng dung dịch vừa ly tâm thu được dd thử.
- Đo độ hấp thụ UV tại bước sóng 364nm, mẫu trắng là môi trường hòa tan. * Xác định phần trăm FDP giải phóng ở các thời điểm lấy mẫu
Nồng độ FDP trong môi trường thử độ hòa tan chưa hiệu chỉnh ở lần hút thứ n:
Cno=
Dt, Dc:Độ hấp thụ UV của dd thử và dd chuẩn. Co (µg/ml): Nồng độ của dd chuẩn thêm 100µg/ml. Cc (µg/ml): Nồng độ của dd chuẩn đo 10µg/ml.
Nồng độ FDP trong môi trường thử độ hòa tan sau hiệu chỉnh ở lần hút thứ n:
Cn= Cno +
V (ml): Thể tích của môi trường thử hòa tan (V= 500ml). Ci: Nồng độ FDP chưa hiệu chỉnh ở lần hút thứ i (i=0→n-1)
Phần trăm FDP giải phóng so với hàm lượng ghi trên nhãn tại thời điểm t:
% GPDC=
Cn (µg/ml): Nồng độ FDP đã hiệu chỉnh ở lần hút thứ n. m (µg): Hàm lượng FDP có trong viên nén.
+ Mỗi công thức thử 3 viên, lấy kết quả trung bình. Báo cáo là kết quả trung bình. * Yêu cầu giải phóng dược chất
Bảng 2.3: Bảng đối chiếu phần trăm giải phóng dƣợc chất
Thời gian %GPDC
2h 10 – 30
6h 42 – 68
10h ≥ 75
2.2.6. Đánh giá động học giải phóng dƣợc chất từ viên
2.2.6.1. Mô hình động học bậc 0
Phương trình giải phóng DC của động học bậc 0 có dạng:
0 0 100 ( ) (%) W C t K t
Trong đó: - C(t): Phần trăm dược chất giải phóng ở thời điểm t.
- W0: Tổng lượng dược chất có trong dạng bào chế. - K0: Hằng số tốc độ giải phóng bậc 0.
Để đánh giá động học giải phóng theo mô hình động học bậc 0, dùng phần mềm Excel xây dựng đồ thị biểu diễn tương quan giữa % giải phóng với thời gian, xác định hệ số tương quan R2
.
2.2.6.2 Mô hình Higuchi
Phương trình giải phóng DC của mô hình Higuchi có dạng:
1/2 0 100 ( ) W H C t K t
Trong đó: - C(t): Phần trăm dược chất giải phóng ở thời điểm t.
- KH: Hằng số tốc độ hòa tan Higuchi.
Để đánh giá động học giải phóng theo mô hình động học higuchi, dùng phần mềm Excel xây dựng đồ thị biểu diễn tương quan giữa % giải phóng với căn bậc hai của thời gian, xác định hệ số tương quan R2.
2.2.7. Các phƣơng pháp khác
* Phương pháp đánh giá thống kê
* Phương pháp đánh giá độ tương quan giữa 2 đồ thị giải phóng
Hệ số tương đồng f2: f2 = 50
Trong đó :
n: là số điểm lấy mẫu thử.
Rt, Tt: là % giải phóng của FDP tại các thời điểm t của mẫu đối chiếu và mẫu thử. f2 nhận giá trị từ 0-100. Hai đồ thị được coi là giống nhau khi f2 lớn hơn 50, f2 càng lớn thì càng giống nhau.
* Công thức tính độ nhớt của hỗn hợp polyme
Ŋ1/8 = F1* Ŋ11/8 + F2* Ŋ21/8
Trong đó:
Ŋ là độ nhớt của hỗn hợp polyme 2% trong nước tại 20oC
Ŋ1, Ŋ2 là độ nhớt của từng thành phần polyme 2% trong nước tại 20oC F1, F2 là thành phần của từng polyme trong hỗn hợp
2.2.8. Xây dựng đƣờng chuẩn sự phụ thuộc của nồng độ dung dịch felodipin vào độ hấp thụ UV
2.2.8.1. Phương pháp đường chuẩn
Pha dd FDP 100 µg/ml (xem mục 2.2.4).
Pha dãy dd chuẩn thứ cấp từ dd FDP 100 µg/ml với dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 để được dãy nồng độ 10, 20, 30, 40, 50 µg/ml.
Sau đó đo độ hấp thụ UV của các dd FDP tại bước sóng 364nm, mẫu trắng là dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5.
2.2.8.2. Phương pháp thêm chuẩn
Pha dd chuẩn thêm C= 100 µg/ml (xem mục 2.2.4)
Pha dd FDP chuẩn thứ cấp: Pha loãng từ dd C=100 µg/ml với dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 thu được dd có nồng độ lần lượt là 0.5, 1, 4, 6, 8, 10, 12 µg/ml Pha dd FDP đo: Hút chính xác 1,0 ml dd chuẩn thêm vào bình định mức 10 ml, bổ sung lần lượt các dd chuẩn thứ cấp cho đủ thể tích, lắc kĩ và ly tâm 4000 v/p/10 p. Đo độ hấp thụ UV các dd FDP tại bước sóng 364 nm, mẫu trắng là dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5.
CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN
3.1. Khảo sát lại một số tiêu chí trong đánh giá chất lƣợng
3.1.1. Định lƣợng dƣợc chất bằng phƣơng pháp đo độ hấp thụ UV
*Xác định tính đặc hiệu
Quét phổ dd FDP 10 µg/ml trong dd 1% NaLS trong đệm phosphat pH 6,5 ở bước sóng từ 200-400 nm, cho kết quả bước sóng hấp thụ cực đại ở bước sóng 239,4 nm và 364 nm tương ứng với độ hấp thụ là 0,52 và 0,19. Lựa chọn bước sóng 364 nm để tiến hành đo độ hấp thụ UV cho các dd FDP trong thực nghiệm.
*Xác định khoảng tuyến tính sự phụ thuộc của độ hấp thụ UV vào nồng độ dung dịch felodipin, ứng dụng vào định lượng FDP
Tiến hành như trong mục 2.2.8.1. Kết quả được trình bày ở bảng và hình sau:
Bảng 3.1: Độ hấp thụ UV của dung dịch felodipin chuẩn từ 10-50 µg/ml
Nồng độ (µg/ml) 10 20 30 40 50
Độ hấp thụ 0,179 0,343 0,498 0,657 0,821
Hình 3.1: Đồ thị biểu diễn đƣờng tuyến tính sự phụ thuộc độ hấp thụ UV vào nồng độ dung dịch felodipin theo phƣơng pháp đƣờng chuẩn
Nhận xét: Hệ số tương quan R2 = 0,9999 ~ 1 cho thấy độ hấp thụ UV và nồng độ dd FDP có sự phụ thuộc tuyến tính (trong khoảng từ 10 – 50 µg/ml).
*Xác định khoảng tuyến tính sự phụ thuộc của độ hấp thụ UV vào nồng độ dung dịch felodipin, ứng dụng vào định lượng FDP trong dịch thử hòa tan
Tiến hành như trong mục 2.2.8.2. Kết quả được trình bày ở bảng và hình sau:
0.179 0.343 0.498 0.657 0.821 y = 0.016x + 0.0202 R² = 0.9999 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 10 20 30 40 50 60 C (µg/ml) Độ h ấp t h ụ UV
Bảng 3.2: Độ hấp thụ UV của các dung dịch felodipin từ 0,5-12 µg/ml đã đƣợc thêm chuẩn
Cdd (µg/ml) 0,5 1 4 6 8 10 12
Cdd sau khi thêm chuẩn (µg/ml)
10,45 10,9 13,6 15,4 17,2 19,0 20,8 Độ hấp thụ 0,193 0,198 0,253 0,274 0,315 0,342 0,379
Hình 3.2: Đồ thị biểu diễn đƣờng tuyến tính sự phụ thuộc độ hấp thụ UV vào nồng độ dung dịch felodipin theo phƣơng pháp thêm chuẩn
Nhận xét: Hệ số tương quan R2
= 0,9971 ~ 1 cho thấy độ hấp thụ UV và nồng độ dd FDP có sự phụ thuộc tuyến tính trong khoảng nồng độ khảo sát.
3.1.2. Thẩm định lại một số tiêu chí trong phƣơng pháp định lƣợng felodipin bằng HPLC
Chuẩn bị pha động và các điều kiện sắc kí như trong mục 2.2.4.2.
*Xác định độ đặc hiệu
Mẫu trắng là pha động (actonitril: H2O = 80:20). Mẫu chuẩn: Pha như mục 2.2.4.2 thu được dd FDP chính xác khoảng 10 µg/ml. Mẫu thử: Pha như trong mục 2.2.4.2 thu được dd FDP có nồng độ khoảng 10 µg/ml. Tiêm lần lượt các mẫu: mẫu trắng, mẫu chuẩn, mẫu thử. Kết quả được trình bày như bảng sau:
Bảng 3.3: Diện tích pic và thời gian lƣu của các mẫu xác định độ đặc hiệu
Mẫu Thời gian lưu ( phút) Diện tích pic (mAU)
Mẫu trắng - -
Mẫu chuẩn 5,547 593584
Mẫu thử 5,483 589290
Nhận xét: Không xuất hiện pic trên sắc kí đồ của mẫu trắng, sắc kí đồ của mẫu chuẩn và mẫu thử cho diện tích pic (mAU) và thời gian lưu (phút) tương ứng giống nhau (phụ lục 4). Vì vậy, định lượng FDP đạt yêu cầu về độ đặc hiệu.
0.193 0.198 0.256 0.274 0.315 0.342 0.379 y = 0.016x + 0.1845 R² = 0.9959 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0 2 4 6 8 10 12 14
C sau khi thêm chuẩn (µg/ml)
Độ h ấp thụ UV
*Xác định khoảng tuyến tính
Pha dd FDP chuẩn với các nồng độ: 0,5; 1; 2; 4; 6; 8; 10; 12 µg/ml. Tiêm các mẫu chuẩn. Kết quả được trình bày như ở bảng và hình sau:
Bảng 3.4: Thời gian lƣu và diện tích pic của các mẫu xác định khoảng tuyến tính C (µg/ml) 0,5 1,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 TR(phút) 5,483 5,195 5,291 5,120 5,099 5,547 5,547 5,355 Diện tích pic (mAU) 32419 62806 118449 241795 360372 470580 593584 721054
Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn đƣờng tuyến tính sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ dung dịch felodipin
Nhận xét: Hệ số tương quan R2
= 0,9998 ~ 1 cho thấy nồng độ dd FDP tuyến tính trong khoảng tin cậy từ 0,5 - 12 µg/ml. Vì vậy, sử dụng được phương pháp HPLC để định lượng FDP có trong nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm.