2.3.1. Tổn ợp óa ọc và kiểm tra độ tin k iết
–Sử dụng phương pháp tổng hợp hóa học, dựa trên phản ứng:
Phản ứng đóng vòng tạo dẫn chất ester 3-(benzimidazol-2- yl)propanoat.
Phản ứng tổng hợp ester bằng tác nhân SOCl2.
Phản ứng thế N1 của ester 3-(benzimidazol-2-yl)propanoat. –Dùng TLC để theo dõi quá trình tiến triển của phản ứng.
–Kiểm tra độ tinh khiết của sản phẩm bằng TLC và nhiệt độ nóng chảy.
2.3.2. Xác địn cấu trúc
Các chất tổng hợp được được xác định cấu trúc bằng các phổ: phổ hồng ngoại (IR), phổ khối (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR).
* Phổ hồng ngoại (IR): phổ hồng ngoại được ghi tại Khoa Hóa, Trường Đại học KHTN Hà Nội, trên máy Perkin Elmer và máy Impact- 410 của Viện Hóa học- Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, với kỹ thuật viên nén KBr trong vùng 4000- 400cm-1. Các mẫu rắn được phân tán trong KBr đã sấy khô với tỷ lệ khoảng 1: 200 rồi ép dưới dạng film mỏng dưới áp lực cao có hút chân không để loại bỏ hơi ẩm [1,3].
* Phổ khối lượng (MS): phổ khối lượng các chất được ghi tại Viện Hóa học và Viện Hóa học các hợp chất thiên nhiên- Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, máy đo LC/MSD Trap Agilent hoặc Agilent 6310 với chế độ đo ESI hoặc LC-MS [5,13].
* Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1
H-NMR) được ghi trên máy Bruker AV-500 tại Viện Hóa học- Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam dùng DMSO, MeOD làm dung môi [2,17].
2.3.3. T ử tác dụn sin ọc k án nấm, k án k uẩn
Thử tác dụng sinh học tiến hành trên 5 vi khuẩn Gram(+), 5 vi khuẩn Gram(-) và 4 vi nấm, thực hiện tại bộ môn Vi sinh- Sinh học của Trường Đại học Dược Hà Nội.
Tất cả các chất tổng hợp được đem thử hoạt tính theo phương pháp khuếch tán trên thạch và sau đó đo kích thước vòng vô khuẩn. Chọn chất đối chiếu là penicillin và streptomycin với kháng khuẩn. Chọn intraconazol là chất đối chiếu với phương pháp kháng nấm.
CHƢƠNG 3
THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU