I. TỔNG QUAN
2.3.2 Phân loại xạ khuẩn theo ISP
- Chuẩn bị ống giống gốc nuôi cấy trong ống thạch nghiêng 6-10 ngày tuổi.
- Xác định đặc điểm hình thái và sắc tố hòa tan:MT xác định: ISP1, ISP2, ISP3, ISP4, ISP5 đã được hấp tiệt trùng, đổ vào hộp Petri, mỗi MT làm 4 đĩa.
Cấy zigzac bào tử của Streptomyces 180.245 lên bề mặt thạch.
+ Màu của khuẩn ty khí sinh: Quan sát trực tiếp trên bề mặt khuẩn lạc, có thể
có: màu đỏ (R), màu vàng (Y), xanh lá cây (G), xanh da trời (B), tím (V), xám (Gy),
trắng (W). Trường hợp có các màu xen kẽ thì ghi các màu liền nhau.
+ Màu của khuẩn ty cơ chất: Quan sát mặt sau của khuẩn lạc (mặt dưới đĩa Petri), thường có các màu: vàng nâu, vàng nâu ánh đỏ hoặc da cam, vàng nâu ánh xanh da trời hoặc tím, vàng nâu lẫn xanh lá cây. Nếu thấy màu ký hiệu là (1), nếu không thấy ký hiệu là (0).
+ Quan sát chuỗi bào tử và bề mặt bào tử dưới kính hiển vi điện tử:
Dạng chuỗi bào tử: thẳng (R), uốn cong (Rf), móc câu (RA), lò xo (S). Nếu chuỗi bào tử có nhiều đặc điểm thì ghi đầy đủ các đặc điểm (ví dụ SRf )
Bề mặt bào tử có thể có các dạng sau: phẳng nhẵn (sm), sần sùi mụn cơm (wa), có gai (sp), có tóc (ha).
+ Sắc tố hòa tan nằm ngay trong MT có các màu: vàng, xanh, đỏ, tím,… Nếu có ký hiệu là (1), nếu không có kí hiệu là (0).
- Xác định sắc tố melaninoid (màu đen hoặc nâu đen) : Nuôi cấy xạ khuẩn trên các MT ISP6, ISP7 đã hấp tiệt trùng, quan sát ở ngày thứ 2, 4. Nếu có ký hiệu là (1), nếu không có ký hiệu là (0).
- Khả năng tiêu thụ nguồn carbon: Nuôi cấy bào tử trên các môi trường có chứa các nguồn đường khác nhau (các ISP9), đánh giá ở ngày thứ 12, 14, 16. Nếu bào tử phát triển mạnh hơn hoặc bằng khi nuôi cấy trên MTISP chứa đường glucose (chứng dương) thì ký hiệu là (+), nếu không phát triển mạnh bằng khi nuôi cấy trên chứng âm(MT ISP9 không có nguồn đường ) thì ký hiệu là (-), nếu phát triển không rõ ràng, mạnh hơn chứng âm và kém hơn chứng dương thì ký hiệu là (±).