Thử tác dụng kháng khuẩn và chống nấm của các sản phẩm tổng hợp được bằng phương pháp khuếch tán trên thạch, thực hiện tại phòng thí nghiệm Bộ môn Vi sinh - Sinh học – Đại học Dược Hà Nội.
Nguyên tắc:
- Mẫu thử (có chứa hoạt chất thử) được đặt lên lớp thạch dinh dưỡng đã cấy vi sinh vật kiểm định (vi khuẩn hoặc vi nấm), hoạt chất từ mẫu thử khuếch tán vào môi trường thạch sẽ ức chế sự phát triển của vi sinh vật kiểm định tạo thành vòng vô khuẩn (vô nấm).
- Kết quả được đánh giá dựa trên đường kính vòng vô khuẩn, vô nấm và được đánh vòng vô khuẩn, vô nấm được đánh giá theo công thức:
2 1 1 ( ) 1 n n i i i i D D D D s n n
D: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn, vô nấm Di : Đường kính vòng vô khuẩn hoặc vô nấm thứ i
s: Độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh n: Số thí nghiệm làm song song
Giống vi sinh vật kiểm định gồm 5 vi khuẩn Gram(+) và 4 vi khuẩn Gram(-) và 4 vi nấm sau:
Staphylococcus aureus ATCC 1128
Bacillus pumilus ATCC 10241
Bacillus subtilis ATCC 6633
Bacillus cereus ATCC 9946
Sarcina lutea ATCC 9341
(S. aureus) (B. pumilus) (B. subtilis) (B. cereus) (S. lutea)
Escheriachia coli ATCC 25922
Proteus mirabilis BV 108 Shighella flexneri DT 112 Salmonella typhi DT 220 (E. coli) (P. mirabilis) (S. flexneri) (S. typhi) Aspergillus sp. VSSH 1401 Asp.1 Aspergillus sp. VSSH 1402 Asp.2 Paecilomyces sp. VSSH 1403 Pae.3 Penicillium sp. VSSH 1501 Pen.1
Môi trường thử: canh thang, thạch thường, sabouraud lỏng
Kháng sinh chuẩn
- Benzathin penicillin 20 IU/mL đối với vi khuẩn Gr(+). - Streptomycin 20 IU/mL đối với vi khuẩn Gr(-).
Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN