Nghiên cứu được thẩm định theo hướng dẫn của ICH [19] và ASEAN [3].
Độ phù hợp hệ thống
Các thông số được sử dụng để đánh giá độ phù hợp của hệ thống bao gồm độ
phân giải Rs giữa các pic của đồng phân (S)- và (R)-atenolol và độ lệch chuẩn tương đối (RSD) của các đáp ứng phân tích khi tiêm mẫu lặp lại. Yêu cầu các giá trị thời gian di chuyển, diện tích pic của mỗi đồng phân có RSD ≤ 3 % [1], Rs > 2.
Tiến hành tiêm lặp lại 6 lần cùng một dung dịch chuẩn atenolol racemic 100 ppm trong cùng điều kiện điện di.
Độ đặc hiệu
Chuẩn bị mẫu placebo, mẫu thử và mẫu chuẩn (R,S)-atenolol 100 ppm, mẫu chuẩn (S)-atenolol 50 ppm và tiến hành điện di với các điều kiện đã chọn
được ở trên. Yêu cầu trên điện di đồ pic của các đồng phân phải tách hoàn toàn so với pic của chất tạp. Trên điện di đồ của mẫu placebo, tại thời điểm
ứng với pic của (R)-, (S)- atenolol không được có pic xuất hiện. Thời gian di chuyển trên điện di đồ của mẫu thử và mẫu chuẩn phải như nhau.
Khoảng nồng độ tuyến tính
Triển khai điện di dãy dung dịch chuẩn atenolol racemic có nồng độ từ 40 ppm đến 140 ppm. Mối tương quan giữa diện tích pic và nồng độ chất phân tích được biểu diễn bằng phương trình hồi quy tuyến tính và hệ số tương quan hồi quy.
Độ chính xác
Tiến hành điện di xác định nồng độ atenolol trong 6 mẫu thử độc lập có nồng
độ khoảng 100 ppm. Đánh giá độ lặp lại của kết quả thu được thông qua độ
lệch chuẩn tương đối RSD, yêu cầu RSD ≤ 2%.
Độ đúng
Thêm chuẩn vào các mẫu placebo ở các mức nồng độ 80%, 100%, 120% nồng độ định lượng. Tiến hành điện di dung dịch thêm chuẩn, dựa vào diện tích pic của các dung dịch này và đường chuẩn ta tính % tìm lại lượng chất chuẩn thêm vào. Độ đúng của phương pháp tại mỗi nồng độ phải nằm trong khoảng từ 98 % đến 102 %.
Ứng dụng
Định lượng các đồng phân đối quang của atenolol trong một chế phẩm có chứa atenolol trên thị trường.
Tiến hành điện di các mẫu chuẩn atenolol racemic và mẫu thử. Dựa vào diện tích pic của mẫu thử và mẫu chuẩn, hàm lượng atenolol racemic của mẫu chuẩn để xác định hàm lượng từng đồng phân atenolol trong mẫu thử.
Hàm lượng atenolol, C14H22N2O3, phải đạt được từ 90,0 đến 110,0% so với lượng ghi trên nhãn [1].