3.1. Phát hiện các nhóm chất và thử hoạt tính sinh học dịch chiếtcủa cây Syzygium formosum Wall., của cây Syzygium formosum Wall.,
Cấu trúc hoá học của các hợp chất hữu cơ và hoạt tính sinh học của chúng có quan hệ chặt chẽ với nhau do vậy việc tìm hiểu hoạt chất ở những cây thuốc dân gian thường được bắt đầu bằng việc thử hoạt tính sinh học và sàng lọc hoá học để từ đó xác định bản chất hoá học của nhóm chất mang hoạt tính sinh học.
Về nguyên tắc, khi ngâm chiết mẫu thường sử dụng những dung môi hữu cơ có độ phân cực tăng dần, như vậy sẽ thu được các cặn chiết có độ phân cực tương tự nhau.
Việc phân đoạn được thực hiện theo sơ đồ 2.1.
Những cặn chiết này đem thử nghiệm với các vi sinh vật kiểm định (biotest) và phản ứng hoá học đặc hiệu sẽ cho biết chúng có hoạt tính hay không và trong đó có những lớp chất nào. Kết quả xác định thành phần định tính một số nhóm chất cơ bản cho biết trong cây Đơn tướng quân có phản ứng dương tính với sterol và flavonoit.
Kết quả thử hoạt tính với vi sinh vật kiểm định (VSVKĐ) các dịch chiết từ lá của cây Syzygium forrmosum Wall., được trình bày trong bảng 2.3 đã cho biết dịch chiết hexan và metanol cho kết quả âm tính, riêng dịch chiết etyaxetat là có tác dụng với vi khuẩn Gram (+), chủng Staphylococus aureus.
Từ kết quả trên dịch chiết etylaxetat sẽ là đối tượng được chúng tôi định hướng tập trung nghiên cứu.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
47
tạp của nhiều hợp chất hữu cơ. Việc tách riêng các chất ra khỏi hỗn hợp được thực hiện trên cột silicagel với các hệ dung môi rửa giải thích hợp (xem mục 2.4) và thường phải lặp lại một vài lần để thu được chúng ở dạng tinh sạch, đáp ứng yêu cầu xác định cấu trúc hóa học.
3.2. Phân lập và nhận dạng các chất từ dịch chiết
Kết quả đã phân lập được các hợp chất hữu cơ thuộc nhóm chất steroit và tritecpenoit.
3.2.1. Hợp chất ancol mạch dài
Ancol mạch dài (tritriacontanol) Sy.E2/7: C33H68O
Chất rắn vô định hình, màu trắng, khối lượng 19,4 mg, RfB = 77, nóng chảy ở 84-85oC có mặt trong dịch chiết hexan, etylaxetat của lá. Trong phổ
1
H- NMR của chất này cho thấy tín hiệu của nhóm CH3 ở độ dịch chuyển hoá
học
0.88ppm tương ứng với 3proton, tín hiệu singlet của nhóm OH nằm trong vùng
2.16ppm, ngoài ra còn có tín hiệu 3.57ppm ở dạng triplet tương ứng với 2
proton của nhóm CH2 có liên kết với OH. Đường tích phân phổ 1H-NMR cho
biết có 60 proton ở độ dịch chuyển hoá học 1.25ppm và 2 proton ở 1.58ppm đều là các tín hiệu của nhóm CH2, như vậy tổng số proton có mặt trong phân tử là 68. Mặt khác trong phổ 13C-NMR và DEPT cũng quan sát thấy tín hiệu của nhóm CH3 ở
14.16ppm, một tín hiệu của nhóm CH2 liên kết với OH ở 63.6ppm và một dãy
CH2 mạch dài nằm trong khoảng 22.86 đến 32.7ppm hoàn toàn phù hợp với
phổ
1H-NMR. Những số liệu phổ nói trên cho phép kết luận hợp chất Sy.E2/7 là một ancol mạch dài có công thức phân tử C33H68O với tên gọi: tritriacontanol
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
48
3.2.2. Các hợp chất steroit
Nhóm chất steroit tìm thấy trong dịch chiết hexan và etylaxetat từ lá cây đơn tướng quân. Dựa vào các đặc trưng hoá lý và quang phổ của 2 chất phân lập được, đối chiếu với chất chuẩn kết hợp so sánh với các dẫn liệu trong
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
49
bảng 3.1 đã nhận ra chúng là:
3.2.2.1. Hợp chất Sy.H19 : β-Sitosterol hay stigmast-5-en-24R-3β-ol
Những tinh thể hình kim, nóng chảy ở 135-136°C, điểm nóng chảy so
với chất mẫu không thay đổi. Trong các phổ 1H- và 13C-NMR đã chỉ ra sự có mặt của một nhóm hydroxyl (δH tại 3,53ppm (proton của CH liên kết với OH), δC tại 71,7ppm và một nối đôi δH tại 5,35ppm (1H, d, J 5Hz) tín hiệu của proton liên kết với C-6 ở vị trí một nối đôi, δC-5 tại 140,70ppm, s và δC-6
tại 121,7ppm, d).
Các dữ liệu về phổ NMR đều phù hợp với β-sitosterol [11]. (xem bảng 3.1).
3.2.2.2. β-Sitosterol glucosid (Sy.E18II/22) (β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosyl) glucopyranosyl)
Chất rắn vô định hình, nóng chảy ở 269-270°C.
Quan sát trên các phổ 13C-NMR và DEPT thấy có 35 tín hiệu của nguyên tử cacbon, trong đó có 7 nguyên tử cacbon gắn với oxy đặc trưng cho phần đường (nằm trong vùng 61,20 đến 100,8 ppm), có 2 tín hiệu ở 140,6 và 121,3ppm thuộc về một liên kết olefin. Các phổ IR và 1H-NMR đều xác nhận sự có mặt của một liên kết đôi (1640cm-1, δH-6 ở 5,30ppm) và hấp thụ của
nhiều nhóm hyđroxyl (3390 cm-1). Trong phổ 1H-NMR cũng quan sát thấy proton đường xuất hiện ở dạng doublet tại 4,32ppm, có J=7,8Hz và δC-1’
tương ứng là 100,9 ppm. Số liệu các phổ IR, MS, 1H- và 13C-NMR thu được cho phép nghĩ đến cấu trúc của một hợp chất glucosid có công thức C35H60O6. Những điểm trình bày ở trên và kết hợp so sánh điểm nóng chảy với sterol glucosid chuẩn đã cho phép khẳng định Sy.E18II/22 là β-sitosterol-3-O-β-D- glucopyranosyl.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
50