3.1. Phát hiện các nhĩm chất và thử hoạt tính sinh học dịch chiếtcủa cây Syzygium formosum Wall., của cây Syzygium formosum Wall.,
Cấu trúc hố học của các hợp chất hữu cơ và hoạt tính sinh học của chúng cĩ quan hệ chặt chẽ với nhau do vậy việc tìm hiểu hoạt chất ở những cây thuốc dân gian thường được bắt đầu bằng việc thử hoạt tính sinh học và sàng lọc hố học để từ đĩ xác định bản chất hố học của nhĩm chất mang hoạt tính sinh học.
Về nguyên tắc, khi ngâm chiết mẫu thường sử dụng những dung mơi hữu cơ cĩ độ phân cực tăng dần, như vậy sẽ thu được các cặn chiết cĩ độ phân cực tương tự nhau.
Việc phân đoạn được thực hiện theo sơ đồ 2.1.
Những cặn chiết này đem thử nghiệm với các vi sinh vật kiểm định (biotest) và phản ứng hố học đặc hiệu sẽ cho biết chúng cĩ hoạt tính hay khơng và trong đĩ cĩ những lớp chất nào. Kết quả xác định thành phần định tính một số nhĩm chất cơ bản cho biết trong cây Đơn tướng quân cĩ phản ứng dương tính với sterol và flavonoit.
Kết quả thử hoạt tính với vi sinh vật kiểm định (VSVKĐ) các dịch chiết từ lá của cây Syzygium forrmosum Wall., được trình bày trong bảng 2.3 đã cho biết dịch chiết hexan và metanol cho kết quả âm tính, riêng dịch chiết etyaxetat là cĩ tác dụng với vi khuẩn Gram (+), chủng Staphylococus aureus.
Từ kết quả trên dịch chiết etylaxetat sẽ là đối tượng được chúng tơi định hướng tập trung nghiên cứu.
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
47
tạp của nhiều hợp chất hữu cơ. Việc tách riêng các chất ra khỏi hỗn hợp được thực hiện trên cột silicagel với các hệ dung mơi rửa giải thích hợp (xem mục 2.4) và thường phải lặp lại một vài lần để thu được chúng ở dạng tinh sạch, đáp ứng yêu cầu xác định cấu trúc hĩa học.
3.2. Phân lập và nhận dạng các chất từ dịch chiết
Kết quả đã phân lập được các hợp chất hữu cơ thuộc nhĩm chất steroit và tritecpenoit.
3.2.1. Hợp chất ancol mạch dài
Ancol mạch dài (tritriacontanol) Sy.E2/7: C33H68O
Chất rắn vơ định hình, màu trắng, khối lượng 19,4 mg, RfB = 77, nĩng chảy ở 84-85oC cĩ mặt trong dịch chiết hexan, etylaxetat của lá. Trong phổ
1
H- NMR của chất này cho thấy tín hiệu của nhĩm CH3 ở độ dịch chuyển hố
học
0.88ppm tương ứng với 3proton, tín hiệu singlet của nhĩm OH nằm trong vùng
2.16ppm, ngồi ra cịn cĩ tín hiệu 3.57ppm ở dạng triplet tương ứng với 2
proton của nhĩm CH2 cĩ liên kết với OH. Đường tích phân phổ 1H-NMR cho
biết cĩ 60 proton ở độ dịch chuyển hố học 1.25ppm và 2 proton ở 1.58ppm đều là các tín hiệu của nhĩm CH2, như vậy tổng số proton cĩ mặt trong phân tử là 68. Mặt khác trong phổ 13C-NMR và DEPT cũng quan sát thấy tín hiệu của nhĩm CH3 ở
14.16ppm, một tín hiệu của nhĩm CH2 liên kết với OH ở 63.6ppm và một dãy
CH2 mạch dài nằm trong khoảng 22.86 đến 32.7ppm hồn tồn phù hợp với
phổ
1H-NMR. Những số liệu phổ nĩi trên cho phép kết luận hợp chất Sy.E2/7 là một ancol mạch dài cĩ cơng thức phân tử C33H68O với tên gọi: tritriacontanol
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
48
3.2.2. Các hợp chất steroit
Nhĩm chất steroit tìm thấy trong dịch chiết hexan và etylaxetat từ lá cây đơn tướng quân. Dựa vào các đặc trưng hố lý và quang phổ của 2 chất phân lập được, đối chiếu với chất chuẩn kết hợp so sánh với các dẫn liệu trong
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
49
bảng 3.1 đã nhận ra chúng là:
3.2.2.1. Hợp chất Sy.H19 : β-Sitosterol hay stigmast-5-en-24R-3β-ol
Những tinh thể hình kim, nĩng chảy ở 135-136°C, điểm nĩng chảy so
với chất mẫu khơng thay đổi. Trong các phổ 1H- và 13C-NMR đã chỉ ra sự cĩ mặt của một nhĩm hydroxyl (δH tại 3,53ppm (proton của CH liên kết với OH), δC tại 71,7ppm và một nối đơi δH tại 5,35ppm (1H, d, J 5Hz) tín hiệu của proton liên kết với C-6 ở vị trí một nối đơi, δC-5 tại 140,70ppm, s và δC-6
tại 121,7ppm, d).
Các dữ liệu về phổ NMR đều phù hợp với β-sitosterol [11]. (xem bảng 3.1).
3.2.2.2. β-Sitosterol glucosid (Sy.E18II/22) (β-sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosyl) glucopyranosyl)
Chất rắn vơ định hình, nĩng chảy ở 269-270°C.
Quan sát trên các phổ 13C-NMR và DEPT thấy cĩ 35 tín hiệu của nguyên tử cacbon, trong đĩ cĩ 7 nguyên tử cacbon gắn với oxy đặc trưng cho phần đường (nằm trong vùng 61,20 đến 100,8 ppm), cĩ 2 tín hiệu ở 140,6 và 121,3ppm thuộc về một liên kết olefin. Các phổ IR và 1H-NMR đều xác nhận sự cĩ mặt của một liên kết đơi (1640cm-1, δH-6 ở 5,30ppm) và hấp thụ của
nhiều nhĩm hyđroxyl (3390 cm-1). Trong phổ 1H-NMR cũng quan sát thấy proton đường xuất hiện ở dạng doublet tại 4,32ppm, cĩ J=7,8Hz và δC-1’
tương ứng là 100,9 ppm. Số liệu các phổ IR, MS, 1H- và 13C-NMR thu được cho phép nghĩ đến cấu trúc của một hợp chất glucosid cĩ cơng thức C35H60O6. Những điểm trình bày ở trên và kết hợp so sánh điểm nĩng chảy với sterol glucosid chuẩn đã cho phép khẳng định Sy.E18II/22 là β-sitosterol-3-O-β-D- glucopyranosyl.
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên h tt p : // ww w . l r c - t nu . e du . v n
50