b) Đái tháo đường type2 (ĐTĐ không phụ thuộc insulỉn)
2.2.2.2. Định lượng polyphenol tổng số theo phương pháp Folin Ciocalteau
Nguyên tắc: dựa trên phản ứng của các hợp chất polyphenol (trong mẫu) với thuốc thử Folin-Ciocalteau cho sản phấm màu xanh lam. So màu trên máy quang phố uv VIS 1000 ở bước sóng X = 765 nm, dùng chất chuấn là acid gallic .
Các bước tiến hành như sau:
* Chuấn bị mâu định ỉượng và hóa chât.
Dung dịch acid gallic; 0.5 g acid gallic + lOml C2H5OH + 90ml H20 bảo quản lạnh. Như vậy dịch chuẩn gốc aid gallic có nồng độ 5mg/ml.
Dung dịch Na2C03; 200g Na2C03+800ml H20 đun sôi. Thêm một vài giọt tinh thể Na2C03, sau 24 giờ đem lọc và dẫn nước cất tới lOOOml.
Dung dịch mẫu cần định lượng.
* Tiến hành xây dựng đường chuẩn acỉd gallỉc.
Chuẩn bị cốc định lượng theo số lượng dung dịch gốc như sau: 0,1, 2,
3, 5 và lOml sau đó dẫn nước cất tới lOOml ta thu được các nồng độ 0, 50, 100, 150, 250, và 500mg/l acid gallic.
Cho vào mỗi cuvert 20 |jl mẫu thử (dung dịch gallic chuẩn ở các nồng độ hoặc dịch chiết các phân đoạn ) + 1.58 ml H20 + 100 ịalthuốc thử Folin- Ciocalteau sau 30 giây đến 8 phút cho thêm 300 |al Na2C03. Đẻ hỗn hợp dunh dịch phản ứng trong hai giờ ở 20°c rồi xác định ở bước sóng 765 nm. Tiến hành định lượng acid gallic để dựng đường chuẩn.
* Ket quả xây dựng đường chuấn acid gallỉc
Bảng 2.2 Kết quả đường chuẩn gallic
STT Acid gallic (mg/1) OD 765nm 1 0 0.009 2 50 0.062 3 100 0.119 4 150 0.168 5 250 0.265 6 500 0.519 600 Hình2.3. Đồ thị
chuẩn acid gallic
1
0.6
100 200 300 400
mg Acid gallic
Định lượng polyphenol tổng số:
Cân 10 mg mẫu thử thuộc mỗi phân đoạn dịch chiết hòa tan trong 1 ml ethanol 90%, bổ sung thêm nước cất vào cho đủ 10 ml dung dịch để thu được dung dịch gốc có nồng độ chất tan là 10.000 mg/1. Lấy 1 ml dung dịch gốc hòa với 9 ml nước cất thu được dung dịch cao có nồng độ 1000 mg/1.
Tiến hành thí nghiệm tương tự như đối với dung dịch acid gallic, xác định giá trị OD, từ đó tính nồng độ polyphenol trong dung dịch và thành phần phần trăm về khối lượng polyphenol trong mỗi phân đoạn dịch chiết.
Theo đó:
Hàm lượng polyphenol trong dung dịch = 1000 X (OD - 0,0128) (mg/1)