Các bước tiến hành cụ thể như sau:
- Chuẩn bị mẫu: Mẫu đất lấy phân tích được để khô tự nhiên tại nhiệt độ phòng. Mẫu đất được rây nhỏ với kích thước hạt <0,25 mm;
Nếu mẫu chưa được phân tích ngay, được bảo quản trong tủ lạnh trong điều kiện 40C trong lọ đựng mẫu có lắp kín.
Bước 1: Cân 20g mẫu cho vào cốc dung tích 250ml. Cho vào cốc 16 ml NH4Cl 0.2 M khuấy trong 5 phút, thêm 100ml acetone cho vào khuấy bằng máy khuấy từ
trong 15 phút, rung trong bể rung siêu âm trong 15 – 30 phút sau đó lọc bằng phễu chiết và bơm chân không, được dung dịch A.
Bước 2: Chiết mẫu
Lấy 25 ml A (1/4 ddA) cho vào 20 ml NaCl bão hoà (10%), 200 ml nước và 25 ml Dichlormethane vào trong bình chiết, đậy nắp, lắc đều, định kỳ mở van bình chiết để giải phóng áp suất dư, để lắng tách lớp. Lọc lớp dưới bẳng cách cho đi qua phễu lọc có chứa Na2SO4 khan vào bình cầu. Lớp trên tiếp tục cho 25ml dichlormethane vào sóc chiết tách lớp như lần 1.
- Cô cạn dung dịch thu được trong bình cầu bằng máy cất quay chân không ở nhiệt độ 42oC. Cô đặc mẫu đến khoảng 2ml (dung dịch B).
Bước 3: Làm sạch mẫu
- Sử dụng cột thủy tinh có đường kính trong 20 mm và chiều dài cột 30 cm. Nhồi 5g Florisil đã hoạt hóa vào cột thủy tinh rồi chuyển dung dịch B vào cột. Tiếp theo, cho dùng 15 ml hệ dung dịch n – hexan:Dichlormethane :actonentrin với tỷ lệ 49,65:50:0,35 đi qua cột florisil để rửa giải. Cô cạn dung dịch bằng máy cất quay chân không đến 1ml.
Bước 4: Phân tích trên GC/MS
- Thể tích bơm mẫu: 1 µl dịch chiết sau xử lý vào máy sắc ký khí kết nối khối phổ GC/MS với chế độ làm việc như sau:
- Cột sắc ký: Cột sắc ký mao quản Ultra 2, kích thước 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm, chứa 5% phenyl methylsilicon.
- Chương trình nhiệt độ cột: Từ 800C đến 1600C: 100C/phút. Giữ ở 1600C trong 2 phút. Từ 1600C đến 2800C: 50C/phút.
2800C giữ trong 15 phút. - Nhiệt độ buồng bơm mẫu: 2200C giữ trong suốt quá trình. - Bơm mẫu theo phương pháp chia dòng (split).
- Khí mang: He, tốc độ dòng 1,2 ml/phút. - Nhiệt độ khối phổ: 2800C.
Sơ đồ 2.1: Chương trình nhiệt độ cột
Định tính, định lượng kết quả phân tích
Định tính: Hóa chất BVTV được định tính dựa trên phổ của peak và thư viện viện phổ trong phần mềm máy tính.
Định lượng: Hàm lượng của chất nghiên cứu được xác định theo phương pháp chuẩn ngoại, sử dụng diện tích pic sắc ký để tính toán. Đường chuẩn gồm 5 điểm với mỗi chất phân tích được xây dựng bằng cách sử dụng các dung dịch pha loãng từ dung dịch chuẩn. Phương trình đường chuẩn và diện tích peak sắc ký được tính bằng phần mềm GC/MS Solution, rồi từ đó tính ra nồng độ chất nghiên cứu.
800C 100C/ph 1600C 2800C 15 phút 50C/phút 2 phút
Sơ đồ 2.2: Quy trình xử lý mẫu đất chứa hóa chất BVTV
Cân 20g đất thêm 16ml dung dịch NH4Cl 0,02M + 100ml aceton
Lọc bằng phễu chiết và hút chân không thu được dung dịch
Chiết bằng dung môi bao gồm dichlormethan + nước + NaCl theo tỷ lệ thích hợp sau đó loại nước bằng Na2SO4
khan.
Cô cạn dung dịch thu được bằng máy cất quay chân không. Làm sạch mẫu bằng Florisil đã hoạt hóa trong cột thủy tinh.
Rửa giải bằng hệ dung dịch
n - Hexane:Dichlomethane:actonentrin cho đi qua cột florisil tỉ lệ 49,65:50:0,35 (15 ml)
Làm khô bằng máy cất quay chân không Thêm 1 ml n-Hexane lắc thật kỹ
để thu mẫu Phân tích bằng GC/MS