- Đieău kieơn phòng nuođi choăi: ánh sáng đèn huỳnh quang có cường đoơ 1800 lux,
2.2.2. Các thao tác trong phòng thí nghieơm
2.2.2.1. Cađn
Đaịt cađn ở vị trí oơn định, khođng bị rung, khođng khí khođng bị dao đoơng nhieău. Cađn và dĩa cađn phại được giữ gìn sách sẽ. Quan trĩng nhât là khođng đượng cađn quá trĩng lượng
cho phép. Sử dúng các vaơt đựng hóa chât có trĩng lượng nhỏ hoaịc baỉng giây khi cađn và khođng được đeơ trực tiêp leđn maịt cađn.
2.2.2.2. Đong chât lỏng
Chú ý đong các dung dịch baỉng ông hút có chia đoơ hốc ông đong chư chính xác khi đáy cụa khođng khí ngang với vách đánh dâu.
2.2.2.3. Xác định đoơ pH
Đoơ pH mođi trường thường được đieău chưnh baỉng NaOH hoaịc HCl sau khi đã pha xong mođi trường và chuaơn bị đưa vào hâp khử trùng. Dùng pH kê đeơ đo đoơ pH. Đaịc bieơt, đo pH trước khi cho than hốt tính vào.
2.2.2.4. Khử trùng
Khử trùng bình cây và các dúng cú khác (dúng cú kim lối, giây nhođm, ...) baỉng noăi hâp Autoclave ở 121oC, 1 atm. Aùp suât khi hâp mođi trường khođng neđn leđn quá 1 atm vì sẽ làm phađn hụy carbohydrate và các phức hợp nháy cạm ( khođng beăn) với nhieơt đoơ ở trong mođi trường.
Bạng 2.5: Thời gian tôi thieơu đeơ hâp khử trùng mođi trường nuođi cây mođ ở 121oC (Burger, 1988)
Theơ tích mođi trường (ml) Thời gian khử trùng tôi thieơu (phút) 20 ÷ 25 24 50 26 100 28.5 250 31.5 500 35 1000 40 2000 48 3000 55 4000 63
Rửa sách tay baỉng xà bođng trước khi thao tác, maịc áo blouse, nón, khaơu trang và mang gaíng tay.
Khử trùng tụ cây trước khi thao tác cây mău: lau kỹ tụ cây baỉng coăn 70o; baơt đèn UV thời gian 30 phút, taĩt đèn UV và khởi đoơng tụ cây.
2.2.2.5. Các thao tác trong tụ cây
- Lau coăn 70o phía ngoài các bình đựng mođi trường, chai mău và các vaơt dúng baỉng kim lối trước khi đưa vào tụ cây.
- Đôt các dúng cú giại phău baỉng coăn 96o sau moêi laăn thay đoơi thao tác và gác leđn keơ đeơ nguoơi mới tiên hành tách hoaịc cây choăi.
- Các mău cây bị rơi tređn maịt bàn khođng được sử dúng cây lái.
- Hơ kỹ mieơng và naĩp bình mođi trường trước và sau khi cây mău, thao tác cây mău phại nhanh, nhé.
- Khi cây hán chê vơ tay qua mău nhaỉm hán chê nhieêm nâm;
- Tránh đeơ tay mới lau coăn gaăn đèn coăn khi đang cháy.
- Veơ sinh sách sẽ tụ cây baỉng coăn 70o sau khi kêt thúc cođng vieơc.
2.2.3. Cách bô trí thí nghieơm
Thí nghieơm bô trí theo kieơu khôi đaăy đụ ngău nhieđn, goăm 9 nghieơm thức mođi trường với thí nghieơm Kali và 10 nghieơm thức mođi trường với thí nghieơm Phosphore, moêi nghieơm thức 5 laăn laịp lái, thực hieơn tređn giông lan Dendrobium
Sonia.
2.3. NOƠI DUNG NGHIEĐN CỨU
2.3.1. Nghieđn cứu ạnh hưởng cụa Kali đên sự hình thành và phát trieơn choăi lan
Denrobium Sonia.
2.3.2. Nghieđn cứu ạnh hưởng cụa Phospho đên sự hình thành và phát trieơnchoăi lanDenrobium Sonia. choăi lanDenrobium Sonia.
2.4. CÁC CHƯ TIEĐU THEO DÕI
2. Đêm sô lá hình thành tređn moêi choăi sau cây 8 tuaăn. 3. Chieău cao choăi sau cây 8 tuaăn.
4. Sô reê tređn choăi, chiều dài rễ mỗi chồi.
5. Màu saĩc lá, ghi nhaơn nêu thây có sự xuât hieơn cụa PLB. 6. Xác định tư leơ lá sông và lá chêt/ bình sau 8 tuaăn nuođi cây.
7. Xác định sô choăi mới hình thành/ bình sau 2, 4, 6 và 8 tuaăn nuođi cây. 8. Đánh giá khạ naíng tái táo và phát trieơn cụa choăi ở các nghieơm thức thí nghieơm
- Quan sát sự thay đoơi màu saĩc, kích thước choăi, lá so với ban đaău và với các nghieơm thức khác sau moêi 2, 4, 6, 8 tuaăn nuođi cây.
- Quan sát sô lá/ choăi mới hình thành sau 8 tuaăn nuođi cây;
- Sự xuât hieơn các PLB ở các nghieơm thức và các laăn laịp lái.
Vài lưu ý:
Sô lượng choăi mău trong moêi bình là 6 choăi
Chĩn choăi phát trieơn bình thường, có 2 - 3 lá, lá màu xanh đaơm;
Đieău kieơn phòng nuođi: ánh sáng đèn huỳnh quang, cường đoơ ánh sáng 1800 lux, thời gian chiêu sáng 16 giờ/ngày, nhieơt đoơ phòng nuođi 25oC (± 2oC), aơm đoơ phòng 30%.
Hâp khử trùng ở nhieơt đoơ 121oC, hâp 20 phút đôi với mođi trường nuođi và 30 phút đôi với dúng cú.
2.5. PHAĐN TÍCH THÔNG KEĐ
Các kêt quạ thí nghieơm xử lý thông keđ theo phương pháp phađn tính phương sai theo bạng Anova. So sánh kêt quạ và xêp háng theo phương pháp Duncan. Sử dúng phaăn meăm xử lý thông kê MSTATC và Microsoft Excel.
CHƯƠNG 3
KÊT QUẠ – THẠO LUAƠN
3.1. THÍ NGHIEƠM 1: NGHIEĐN CỨU ẠNH HƯỞNG CỤA KALI ĐÊN SỰHÌNH THAØNH VAØ PHÁT TRIEƠN CHOĂI LANDENDROBIUM SONIA. HÌNH THAØNH VAØ PHÁT TRIEƠN CHOĂI LANDENDROBIUM SONIA.
Trong nuođi cây mođ vi nhađn giông cađy troăng, choăi là cođng đốn rât quan trĩng trong qui trình sạn xuât cađy giông. Heơ sô nhađn choăi và chât lượng choăi có ạnh hưởng trực tiêp đên sạn lượng và chât lượng cađy giông và cuôi cùng là chât lượng thương mái cụa sạn phaơm hoa.
Đôi với giông lan Dendrobium Sonia, thuoơc loài đa thađn, nhưng heơ sô nhađn choăi trong mođi trường thách truyeăn thông văn chưa cao. Sự tái sinh choăi cũng như chât lượng cụa choăi phú thuoơc vào nhieău yêu tô trong mođi trường nuođi cây.
Đaịc bieơt là các yêu tô đa lượng như N, P, K và chât đieău hoà sinh trưởng như auxin hay cytokinine tuy nhieđn sử dúng chât đieău hoà sinh trưởng có theơ gađy biên dị choăi, ạnh hưởng đên chât lượng cađy giông và hoa sạn phaơm.
Đeă tài tiên hành thí nghieơm với noăng đoơ Kali thay đoơi khác nhau trong mođi trường MS.
Kêt quạ thực hieơn thí nghieơm tređn bạng:
Bạng 3.1: Ạnh hưởng noăng đoơ Kali đên khạ naíng hình thành choăi lan
DendrobiumSonia.
Sô choăi lan hình thành qua các giai đốn
STT Mođi
trường 2 tuaăn 4 tuaăn 6 tuaăn 8 tuaăn
Chieău cao choăi (mm)
1 K0 7,2 a 9,2 a 11,2 bc 12,6 cde 12.0 e
2 K1 7,4 a 9,8 a 10,4 c 10,0 e 18.0 d 3 K2 7,6 a 9,6 a 11,6 bc 11,8 de 16.8 d
4 K3 7,0 a 9,4 a 10,6 c 12,4 cde 18.2 d 5 K4 7,6 a 10,0 a 13,0 bc 14,9 bcd 23.2 c 6 K5 7,6 a 10,0 a 12,0 bc 16,0 bc 23.8 c 7 K6(đc) 7,4 a 10,8 a 17,4a 23,1a 35.0 b 8 K7 7,0 a 11,4 a 18,6 a 16,6 b 37.8 ab 9 K8 6,8 a 9,6 a 11,6 bc 16,6 b 41.4 a Cv(%) 14,6 21,1 36,3 18,2 18.31 LSD(0,05) 1,4 2,7 2,0 3,5 4.4
Ghi chú: Những chữ giông nhau tređn cùng moơt coơt, giá trị khác bieơt khođng có ý nghĩa thông keđ với P = 0,05 trong Duncan’s test.
Sô choăi mău ban đaău là 6 choăi/bình
Từ bạng 3.1 cho thây ở các giai đốn đaău (2-4 tuaăn sau cây), sự ạnh hưởng cụa Kali trong các mođi trường đên sự hình thành choăi lan Dendrobiumlà khođng rõ reơt. Nhưng baĩt đaău từ tuaăn thứ 6 trở đi thì vai trò cụa kali theơ hieơn rõ. Đaịc bieơt là mođi trường K7 và mođi trường đôi chứng K6, sô choăi táo mới trong mođi trường này đát cao nhât ở giai đốn 6 tuaăn. Nhưng đên giai đoan sau 8 tuaăn thì haău hêt các nghieơm thức mođi trường đeău thâp hơn nghieơm thức đôi chứng. Đieău này cho thây mođi trường K6 (hàm lượng K=950mg/l) và mođi trường K7 (hàm lượng K=1120mg/l) có tác dúng thucù đaơy làm cho choăi lanDendrobium Sonia ra sớm và ra taơp trung, đieău này toàn có lợi cho quá trình táo ra hàng lốt cađy giông có đoơ đoăng đeău cao. Hieơn tượng này được theơ hieơn rõ tređn bieơu đoă 3.1, từ tuaăn thứ 2 đên tuaăn thứ 6 ngối trù 2 nghieơm thức K6 và K7 , các nghieơm thức còn lái sự hình thành sô choăi mới đeău thâp tương đương nhau.
Trong đó: 2 tuaăn: Cv = 14,6% LSD(0,05) = 1,4 4 tuaăn: Cv = 21,1% LSD(0,05) = 2,7 6 tuaăn: Cv = 36,3% LSD(0,05) = 2,0 8 tuaăn: Cv = 18,2% LSD(0,05) =3,5
Tuy nhieđn qua tuaăn thứ 8 các mođi trường K5, K7 và K8, sô choăi mới hình thành có taíng leđn nhưng sự khác bieơt giữa các nghieơm thức.
Sự ạnh hưởng cụa kali theơ hieơn rõ nhât tređn bạng 3.1 là sự taíng trưởng cụa choăi, gaăn như sự taíng trưởng cụa choăi lan tư leơ thuaơn với hàm lượng Kali trong mođi trường MS. Ơû mođi trường Ko (khođng có Kali) choăi có chieău cao thâp nhât, gaăn như khođng có sự taíng trưởng. Khi hàm lượng Kali taíng daăn từ 90mg/l; 260mg/l; và 610mg/l (tương ứng với các mođi trường K1; K2 và K3 thì sự phát trieơn cụa choăi tuy có taíng nhưng văn còn rât chaơm khođng đáng keơ. Khi hàm lượng Kali taíng từ 780mg/l đên 1290mg/l thì sự taíng trưởng cụa choăi theơ hieơn rât rõ gaăn như tư leơ thuaơn với hàm lựơng kali , đaịc bieơt ở mođi trường có hàm lượng Kali cao như K7 (1120mg/l) và K8 (1290mg/l) choăi phát trieơn rât mánh, choăi to, khoẹ, đoăng đeău, Đađy là chư tieđu quan trĩng cho vieơc sạn xuât cađy giông hàng lốt có chât lương cao ở giai đoan sau
Kali đóng vai trò quan trĩng trong quá trình phát trieơn cụa choăi cađy hoa lan
DendrobiumSonia, khi hàm lượng kali trong mođi trường nuođi cây taíng từ 780mg/l
trở leđn, đaịc bieơt hàm lượng kali trong mođi trường nuođi cây từ 1120 – 1290 mg/l choăi lan phát trieơn mánh nhât, hơn cạ mođi trường đôi chứng (mođi trường MS)
Hàm lượng Kali trong mođi trường nuođi cây từ 950mg/l (K6) đên 1120mg/l (K7) làm taíng khạ naíng táo choăi đôi giông lanDendrobiumSonia. Nêu hàm lượng Kali thâp hơn hoaịc vượt quá ngưỡng này thì vai trò cụa Kali đôi với sự hình thành choăi theơ hieơn khođng rõ reơt.
Kêt quạ bạng 3.2 cho thây sô reê hình thành tređn choăi và chieău dài reê cụa giông lanDendrobiumsonia gaăn như khođng có sự khác bieơt giữa các nghieơm thức mođi trường thí nghieơm. Sô reê tređn choăi phaăn lớn từ 1-2 reê và chieău dài reê tređn dưới 5mm. Đieău này chứng tỏ khi taíng hàm lượng Kali trong mođi trường nuođi cây từ từ 90-1290mg/l sẽ khođng làm ạnh hưởng đên sự hình thành và phát trieơn boơ reê cụa cađy lanDendrobium sonia
Bạng 3.2: Ạnh hưởng cụa Kali đên khạ naíng hình thành rễcụa choăi lan
DendrobiumSonia sau 8 tuaăn nuođi cây
Sô reê hình thành /choăi Chieău dài reê (mm) Ký hieơu mođi trường Hàm lượng K (mg/l) 6 tuaăn 8 tuaăn K0 0 0,2a 0,8a 3,4 b K1 90 0,6a 1,0a 5,8ab K2 260 0,6a 0,8a 6,7a K3 440 0,7a 1,0a 6,7a K4 610 0,5a 0,9a 3,9ab K5 780 0,8a 0,9a 5,6ab
K6(đc) 950 0,8a 0,9a 3,4 b
K7 1120 0,7a 0,7a 5,7ab
K8 1290 0,7a 1,3a 5,6ab
CV(%) 87,5 44,4 43,3
LSD(0,05) 0,7 0,5 2,9
Ghi chú: Những chữ giông nhau tređn cùng moơt coơt, giá trị khác bieơt khođng có ý nghĩa thông keđ với P = 0,05 trong Duncan’s test.
Sô choăi mău ban đaău là 6 choăi/bình
Bạng 3.3: Ạnh hưởng cụa Kali đên khạ naíng hình thành lá ởDendrobium
Sonia. STT Ký hieơu mođi trường Hàm lượng K (mg/l) Hàm lượng K (mg/l) 1 K0 2 K1 0 0 3 K2 90 90 4 K3 260 260 5 K4 440 440 6 K5 610 610 7 K6(đc) 780 780 8 K7 950 950 9 K8 1120 1120 Cv(%) 18,7 LSD(0,05) 0,7
Ghi chú: Những chữ giông nhau tređn cùng moơt coơt, giá trị khác bieơt khođng có ý nghĩa thông keđ với P = 0,05 trong Duncan’s test.
BIỂU ĐỒ 3.3: Sự hình thănh vă phât triển chồi lan Dendrobium sau 8 tuần 12.6 10 11.8 12.4 14.9 16 23.1 16.6 16.6 18 12 16.8 18.2 23.2 23.8 35 37.8 41.4 2.4 3.1 3 3 2.9 3.3 2.8 2.8 2.9 0.83.4 1 0.8 1 0.9 0.9 0.9 0.7 1.3 5.8 6.7 6.7 3.9 5.6 3.4 5.7 5.6 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 K0 K1 K2 K3 K4 K5 K6 = K(đc) K7 K8 Mơi trường số chồi chiều cao chồi số lâ số rễ chiều dăi rễ
Bạng 3.4: Aûnh hưởng cụa Kali đên đaịc đieơm hình thái cụa choăi lan
Dendrobium.
Mođi trường
Hàm lượng Kali trong mođi trường
MS (mg/l)
Nhaơn xét, đánh giá
K0 0
Choăi kém phát trieơn, 1 sô lá có hieơn tượng hóa vàng từ dưới leđn và các mép lá, tiêp theo là đưnh lá hóa nađu, lá chêt nhieău nhât.
K1 90 Choăi phát trieơn trung bình, tỷ leơ lá vàng ( chụ yêu là các lá ở dưới cùng) ít hơn, táo ít reê. K2 260 Choăi phát trieơn trung bình, tỷ leơ lá vàng ( chụ
yêu là các lá ở dưới cùng) ít hơn, táo ít reê. K3 440 Nạy choăi trung bình, láchêt ít.
K4 610 Choăi phát trieơn khá, reê trung bình, nạy choăi khá. K5 780 Choăi phát trieơn khá, nạy choăi khá, reê trung bình.
K6 950 Nạy choăi khá, hình thành PLB, choăi phát trieơn trung bình.
K7 1120 Choăi phát trieơn mánh, reê dài.
K8 1290 Choăi phát trieơn mánh, nạy choăi khá, reê dài, nhieău.
BIỂU ĐỒ 3.4: pH đo được trước vă sau khi khử trùng mơi trường
6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 5.3 5.2 5.3 5.2 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 4.4 4.6 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 K0 K1 K2 K3 K4 K5 K6 = K(đc) K7 K8 Mơi trường trước sau
Qua bieơu đoă 3.4 cho thây khi boơ sung hàm lượng Kali vào mođi trường từ 780- 1290mg/l sẽ làm giạm 0,3 giá trị pH sau khi hâp khử trùng so với mođi trường khođng boơ sung hoaịc boơ sung Kali với hàm lượng thâp dưới 780mg/l (K0, K1, K2, K3). Như vaơy caăn phại hieơu chưnh pH trước khi hâp khử trùng ở các nghieơm thức mođi trường K4, K5, K6, K7, K8 với giá trị >6 đeơ đạm bạo giá trị pH sau hâp thích hợp.
K0 K1 K2
K3 K4 K5
K6 K7 K8
Hình 3.1: Sô choăi hình thành sau 8 tuaăn nuođi cây tređn các mođi trường có hàm lượng Kali khác nhau.
3.2. THÍ NGHIEƠM 2: NGHIEĐN CỨU ẠNH HƯỞNG CỤA PHOSPHORE ĐÊNSỰ HÌNH THAØNH VAØ PHÁT TRIEƠN CHOĂI LANDENDROBIUM SONIA SỰ HÌNH THAØNH VAØ PHÁT TRIEƠN CHOĂI LANDENDROBIUM SONIA
Bạng 3.5.: Ạnh hưởng cụa Phosphore đên khạ naíng hình thành và phát trieơn choăi
lanDendrobiumSonia sau 8 tuaăn nuođi cây
Sô choăi lan hình thành qua các giai đốn TT Kí hieơu mođi trường Hàm lượng P
(mg/l) 2 tuần 4 tuần 6 tuần 8 tuần
Chieău cao choăi(1) (mm) 1 P(đc) 88 6,6a 8,6bc 9,2 bc 20,2a 16.8 b 2 P0 0 6,8a 6,8 c 7,4 c 17,0abc 12.2 c 3 P1 176 6,4a 7,2 c 7,8 c 18,4ab 18.8 b 4 P2 264 6,0a 7,6 c 8,4 c 14,0 bc 21.0 ab 5 P3 351 6,2a 7,8 bc 8,2 c 13,4 c 21.0 ab 6 P4 439 6,2a 6,4 c 7,0 c 13,6 c 24 a 7 P5 527 6,2a 8,4 bc 7,0 c 21,0 a 18.0 b 8 P6 615 6,0a 9,8 ab 11,2 ab 15,2 bc 19.0 b 9 P7 703 6,2a 11,4a 12,2a 13,8 bc 20.0 ab 10 P8 791 6,0a 11,8a 12,8a 14,4 bc 16.0 bc Cv(%) 9,4 17,7 18,5 20 18,3 LSD(0,05) 0,8 2,0 2,2 4,1 4,4
Ghi chú: Những chữ giông nhau tređn cùng moơt coơt, giá trị khác bieơt khođng có ý nghĩa thông keđ với P = 0,05 trong Duncan’s test.
(1)- chieău cao choăi đo lúc 8 tuaăn sau cây Sô choăi mău ban đaău là 6 choăi/bình
Kêt quạ bạng 3.5 cho thây sự hình thành choăi ở các nghieơm thức mođi trường tương ứng với cac giai đốn 2 tuaăn, 4 tuaăn, 6 tuaăn và 8 tuaăn là khođng giông nhua va khođng theo mođt qui luaơt nào. Đieău đáng lưu ý nhât ở đađy là khi ta taíng hàm lượng P trong mođi trường nuođi cây leđn cao từ 615-791 tương ứng với các mođi
hơn hẳn so với mođi trường đôi chứng. Chieău cao choăi các nghieơm thức này tương đương như đôi chứng (17-20mm). Đieău này rât quan trĩng cho giai đốn sạn xuât cađy lan giông có chât lượng cao. Trong khi đó các mođi trường khác sô choăi đát cao ở giai đốn 8 tuaăn sau cây, chứng tỏ sự hình thành choăi muoơn, choăi ra khođng tap trung, kéo dài thời gian nạy choăi đađy là sự bât lợi cho cođng tác sạn xuât cađy giông sau này. Sự hình thành choăi lan Dendrobium qua các giai đoan nuođi cây được theơ hieơn rât rõ tređn bieơu đoă 3.5
.
Xét ạnh hưởng cụa Phosphore đên sự hình thành reê cụa choăi lanDendrobium
Sonia sau 8 tuaăn nuođi cây tređn bạng 3.7 cho thây ở giai đốn 6 tuaăn sau cây, ạnh