2.1. Quy trình thao tác cấy chuyền lan.
41
2.2.
Thuyết minh quy trình
- Chuẩn bị tủ cấy. Việc chuẩn bị tủ cấy đóng vai trò quan trọng trong việc đảm bảo đầy đủ dụng cụ cần thiết khi cấy mẫu.
- Mở đèn UV của tủ cấy 15 - 30 phút để tiệt trùng tủ, đây là thao tác chung cho tất cả các thao tác (cấy chuyền, vô mẫu, …).
- Dụng cụ (dao, kẹp), ống nghiệm, đĩa cấy, chai môi trường và chai mẫu cấy được xử lý sơ bằng cồn 70° rồi đưa vào trong tủ. Phân phối cồn 96° vào ống nghiệm và đèn cồn. Tiếp theo lấy dụng cụ ra, cho vào trong ống nghiệm có cồn 96°. Tiến hành đốt dụng cụ và đĩa cấy trên ngọn lửa đèn cồn để tiêu diệt vi sinh vật còn trên bề mặt. Việc khử trùng bề mặt là việc cũng rất quan trọng và đảm bảo rằng không tồn tại vi sinh vật trên bề mặt làm việc.
- Khử trùng cổ chai mẫu dưới ngọn lửa đèn cồn, dùng kẹp gắp mẫu ra đĩa cấy. Khử trùng cổ chai mẫu nhằm loại bỏ các vi sinh vật bám xung quanh cổ chai mẫu. Lưu ý khi gắp mẫu ra đĩa phải đảm bảo rằng mẫu phải nằm trong đĩa cấy, tránh mẫu bị rớt ra ngoài hoặc chạm vào mép đĩa tránh cho mẫu bị nhiễm.
- Trước khi cấy mẫu vào bình môi trường, chúng ta nên loại bỏ những phần hoại tử trên mẫu. Nếu không loại bỏ các phần hoại tử trên mẫu thì trong quá trình nuôi cấy chúng phát triển chậm, yếu hoặc không phát triển, ảnh hưởng tới kết quả nuôi cấy.
- Tách mẫu ra thành từng cụm chồi.
- Hơ khử trùng cổ chai môi trường cấy chuyền. Công việc này sẽ đảm bảo điều kiện vô trùng kỹ hơn khi cấy mẫu vào trong môi trường. Dùng kẹp gắp mẫu cắm vào chai môi trường, không cắm quá sâu ảnh hưởng tới sự phát triển của mẫu. - Sau khi cắm mẫu vào trong chai, hơ khử trùng cổ chai xung quanh lửa đèn cồn,
đậy nắp lại.
- Dùng bút ghi trên giấy tên mẫu cấy, môi trường cấy, ngày cấy chuyền, người cấy để tiện theo dõi kết quả và tránh sự nhầm lẫn. Sau đó dùng thun gắn giấy vào cổ chai mẫu vừa cấy.
43