ĐỐI TƯỢNG NỘI DUNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.4. Xây dựng quy trình thu bromelain từ chồi ngọn dứa
3.2.4.1. Tách enzyme bằng phương pháp kết tủa nhờ cồn
Dịch của các phần của quảchồi ngọn dứa thu được theo sơ đồ hình 3.4 được thêm cồn 96o sao cho đạt các nồng độ: 50%, 60%, 70%, 80%, 90% thể tích..… Dịch thu được và cồn đều phải làm lạnh trước ở 4oC. Thời gian kết tủa là 2 giờ ở 4oC. Ly tâm ở nhiệt độ 4oC trong 20 phút với vận tốc 13.500 vòng/phút, thu phần kết tủa.
Dịch trong (dịch enzyme) Tủa bằng cồn ở nồng độ khác nhau
Ly tâm (ly tâm lạnh 4oC, 13.500v/ph/ 20 phút)
─────────────────── Dịch trong Kết tủa
Chế phẩm kỹ thuật
Hình 3.2. Sơ đồ thu kết tủa
Hoà tan phần kết tủa bằng nước cất, lên thể tích bằng thể tích dịch enzyme thô ban đầu. Xác định họat hoạt lực protease bằng phương pháp Anson cải tiến, xác định nồng độ protein bằng phương pháp Lowry, tính hiệu suất thu hồi enzyme và hoạt độ riêng của dịch hoà tan kết tủa, từ kết quả đó xác định được nồng độ cồn thích hợp nhất cho thu hồi enzyme bromelain.
Hiệu suất thu hồi được tính theo công thức:
HSTH (%) = H/Ho.*100
Trong đó: + H là hoạt độ của dịch hoà tan kết tủa (U/ml) + Ho là hoạt độ của dịch enzyme thô (U/ml) Hoạt lực riêng được xác định theo công thức:
Hr (U/mg protein) = H/P
Trong đó: + H là hoạt độ của dịch hoà tan kết tủa (U/ml)
Nồng độ cồn thích hợp cho thu protease là nồng độ tại đó hiệu suất thu hồi enzyme và hoạt lực riêng đạt cực đạigiá trị lớn.
3.2.4.2. Đông khô kết tủa
Đông khô kết tủa thu được ở phần 3.2.4.1 đến độ ẩm 10% để tạo chế phẩm dạng bột.
3.2.4.3. Xây dựng quy trình thu bromelain từ chồi ngọn dứa
Kết quả thu được từ nghiên cứu tách enzyme bằng cồn và đông khô kết
tủa cho phép xây dựng quy trình tách và tạo chế phẩm bromelain dạng bột khô từ chồi ngọn dứa.