- Môi trường: Môi trường ở giai đoạn này có thể chuẩn bị theo 2 cách như sau:
2. Phương pháp lên men bán liên tục:
3.3.3.2. Phát triển nấm men để lên men dịch rỉ đường:
1. Môi trường: Môi trường dùng để phát triển nấm men sử dụng cho phương pháp lên men một nồng độ hay hai nồng độđều phải đạt những yêu cầu sau đây:
- Nồng độ dịch rỉđường: 12-12,5%
- Rỉ đường có chất lượng tốt ít bị nhiễm khuẩn.
- Bổ sung đầy đủ các chất dinh dưỡng, lượng chất dinh dưỡng tính theo % như sau: + H3PO4 0,06
+ (NH4)2SO4 0,1-0,3 + Urê 0,1-0,15
Ở các giai đoạn phát triển từ 0,5-20 lít, còn có thể bổ sung thêm dịch đường hóa bằng ngũ cốc (ngô, gạo, đường maltose).
Rỉđường nguyên (80-90 Bx) Pha loãng sơ bộ (45-50 Bx)
Acid hóa bằng HCl
Sát trùng bằng Na2SiF6 (12-13 kg/1tấn rỉ đường)
Bổ sung các chất dinh dưỡng ((NH4)2SO4, (NH2)2CO: lượng nitơ cần thiết là 50g/1tấn rỉđường; H3PO4 70% 12-13,5 kg/10000 lít rượu)
34
Tất cả các chất dinh dưỡng đều phải cho vào trước khi sát trùng môi trường đểđảm bảo vô trùng môi trường nuôi cấỵ
2. Tiến hành nuôi cấy:
Các điều kiện kỹ thuật phát triển nấm men nguyên chủng từống thạch nghiêng (môi trường cố thể) mở rộng ra ống dịch thể 10 ml, 0,5 lít, 3 lít, 20 lít, 1.000 lít và 5.000 lít, tỷ
lệ nấm men gieo cấy từ giai đoạn 20 lít trởđi cần bảo đảm 15-20% so với môi trường. Quá trình nuôi cấy cần đảm bảo theo các yêu cầu sau:
Giai đoạn nuôi cấy Thời gian nuôi cấy (h)
Nồng độ % chất khô
Độ acid (độ) Nhiệt độ nuôi cấy (oC) Ống nghiệm dịch thể 24 10-12 0,5-0,6 30 Bình cầu 0,5 lít 24 13-14 0,5-0,6 30 Bình cầu 3 lít 24 14-15 0,5-0,6 30 Bình 20 lít 24 15-16 0,7-0,8 30 Thùng 1.000 lít 44 16-17 0,9-1,1 30 Thùng 5.000 lít 18 17-18 0,8-0,9 30
Lượng không khí tiêu hao khi nuôi cấy nấm men ở giai đoạn phát triển thùng nhỏ là 1-2m3/m3.h, ở thùng lớn là 3-5m3/m3.h.