QUI TRÌNH TỔNG HỢP PEPTIDE TRÊN PHA RẮN
3.2.4 Giai đoạn hình thành peptide
• Sau khi giải bảo vệ nhóm amino, cho ghép cặp với amino acid kế tiếp. Nhưng chúng cho hiệu suất không cao, thường xảy ra hiện tượng racemic hóa.
• Dùng phương pháp N,N'-dicyclohexylcarbodiimide cho kết quả khả quan. Phản ứng xảy ra với hiệu suất cao trong khoảng 30 phút ở nhiệt độ phòng.
• Sản phẩm carbobenzoxyaminoacyldicyclohexyl carbamate được hình thành với hiệu suất tốt và sản phẩm phụ không hòa tan dicyclohexyl carbamate có thể được tách dễ dàng thông qua việc rửa.
• Việc lựa chọn dung môi để ngưng tụ rất quan trọng. Dung môi được sử dụng tốt nhất là dimethylformamide, methylenechloride cũng cho hiệu suất tốt, tuy nhiên các dung môi như dioxane, benzene, ethanol, pyridine và nước cho hiệu suất kém và không được sử dụng.
• Ảnh hưởng của dung môi phụ thuộc vào khả năng trương phồng của chất mang và một số yếu tố khác
• Phản ứng ghép cặp trong qui trình nghiên cứu là giữa polymer glycylvalyl và dẫn xuất carbobenzoxy của leucine, leucine, isoleucine, valine, alanine, glycine, phenyl alanine, O-benzyltyrosine, proline, serine, threonine, methionine, S-benzylcysteine, im- benzylhistidine, nitro- arginine, γ-methyl glutamate và asparagines.
• Lysine và dẫn xuất của nó không được sử dụng.
• Vấn đề quan trọng là sau khi peptide hình thành phải không còn nhóm amine chưa phản ứng
• Sau khi phản ứng ghép cặp được hoàn thành, nhóm amine chưa phản ứng được acetyl hóa với lượng lớn acetic anhydride và triethylamine
• Liên kết acetamido được tạo thành một cách bền vững sau 18 giờ ở 25o. Do đó, nguy cơ nhóm amino phản ứng trong các giai đoạn tiếp theo bị loại bỏ.
• Các giai đoạn này theo một chu kỳ tuần hoàn và chuỗi peptide được nối dài. Chu kỳ này mô tả sự giải bảo vệ nhóm amino và sự ghép cặp với carbobenzoxyamino acid.
• Sau khi kết thúc quá trình giải nhóm bảo vệ carbobenzoxy, peptide được giải phóng khỏi polymer bằng phản ứng xà phòng hóa, trong trường hợp chất mang brom hóa thì xử lý với lượng lớn HBr.
• Peptide được tinh khiết bằng sắc ký trao đổi ion, sinh hàn hồi lưu hoặc các phương pháp thích hợp khác.
Ví dụ: Tổng hợp peptide đơn giản là tetrapeptide L-leucyl-L-alanylglycyl-L-valine
- Điều cần thiết là lập các điều kiện tối ưu và kiểm tra tính khả thi của phương pháp thực nghiệm.
- Carbobenzoxy-L-leucyl-L-alanylglycyl-L-valyl polymer phải được tiến hành từng bước:
+ Bước 1: Là phương pháp nitro phenyl ester + Bước 2: Là phản ứng diimide.