1.
1.ChiếtChiết xuấtxuất vàvà tinhtinh chếchế glycosidglycosid::
Nguyên
Nguyên tắctắc chungchung::
TuỳTuỳ theotheo mụcmục đíchđích chiếcchiếc xuấtxuất màmà dượcdược liệuliệu cầncần hoặchoặc
không
không cầncần diệtdiệt enzymenzym. . NếuNếu muốnmuốn thuthu đượcđược cáccác genuingenuin
glycosid
glycosid thìthì cầncần ổnổn địnhđịnh dượcdược liệuliệu. . CóCó trườngtrường hơphơp ngườingười
ta
ta chocho enzymenzym táctác dụngdụng đểđể nângnâng caocao hiệuhiệu suấtsuất chiếtchiết mộtmột
số
số chấtchất mongmong muốnmuốn, ví, ví dụdụ chiếtchiết digitoxindigitoxin trongtrong lálá digitaldigital
hoặc
hoặc chiếtchiết diosgenindiosgenin trongtrong mộtmột sốsố loạiloại củcủ màimài, , trongtrong míamía
dò
dò..
TạpTạp chấtchất trongtrong dượcdược liệuliệu điđi kèmkèm vớivới glycosidglycosid cócó loạiloại
tan
tan trongtrong dầudầu vàvà loạiloại tantan trongtrong nướcnước. . LoạiLoại tantan trongtrong dầudầu
chủ
chủ yếuyếu làlà cáccác chấtchất béobéo ( (thườngthường gặpgặp trongtrong hạthạt), ), ChấtChất diệp
diệp lụclục ( (lálá), ), carotenoidcarotenoid ( (lálá, hoa, hoa). ). MuốnMuốn xửxử lýlý ngườingười tata
thường
thường loạiloại cáccác tạptạp chấtchất nàynày bằngbằng cáccác dungdung môimôi kémkém
phân
phân cựccực nhưnhư etherether dầudầu hoảhoả, , hexanhexan, , sausau đóđó chiếtchiết
glycosid
DịchDịch chiếtchiết cồncồn hoặchoặc nướcnước sausau khikhi làmlàm đậmđậm đặcđặc cầncần đượcđược loạiloại tiếptiếp các
các chấtchất tantan trongtrong dầudầu bằngbằng cáchcách lắclắc tiếptiếp vớivới dungdung môimôi hữuhữu cơcơ. .
TrongTrong sảnsản xuấtxuất muốnmuốn tránhtránh dùngdùng nhiềunhiều dungdung môimôi hữuhữu cơcơ thườngthường trong (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
trong giaigiai đoạnđoạn đầuđầu dượcdược liệuliệu đượcđược chiếtchiết bằngbằng nướcnước hoặchoặc cồncồn thấpthấp độ
độ, , nhưnhư vậyvậy cũngcũng hạnhạn chếchế cáccác tạptạp chấtchất tantan trongtrong dầudầu
TạpTạp chấtchất tantan trongtrong nướcnước thườngthường làlà cáccác chấtchất gômgôm, , chấtchất nhầynhầy, ,
peetin
peetin, , tanin…tanin… NếuNếu chiếtchiết bằngbằng nướcnước hoặchoặc cồncồn thấpthấp độđộ thìthì cáccác tạptạp chất
chất nàynày thườngthường tantan theotheo, , muốnmuốn loạiloại, , tata cócó thểthể dùngdùng chìchì acetatacetat, ,
sau
sau đóđó loạiloại chìchì axetataxetat thừathừa bằngbằng NatriNatri sulfatsulfat. . ChúChú ýý rằngrằng mộtmột sốsố glycosid
glycosid cócó thểthể bịbị tủatủa bởibởi chìchì acetatacetat ( (víví dụdụ flavonoidflavonoid glycosidglycosid ) )
trong
trong trườngtrường hợphợp nàynày ngườingười tata còncòn lợilợi dụngdụng tủatủa vớivới muốimuối chìchì đểđể tách
tách glycosidglycosid. .
MuốnMuốn hạnhạn chếchế bớtbớt cáccác tạptạp chấtchất còncòn cócó thểthể tiếntiến hànhhành nhưnhư sausau: : từtừ dịch
dịch chiếtchiết nướcnước hoặchoặc dịchdịch chiếtchiết cồncồn đãđã làmlàm đậmđậm đặcđặc vàvà thêmthêm nước
nước, , ngườingười tata lắclắc vớivới butanolbutanol hoặchoặc hỗnhỗn hợphợp choloroformcholoroform--ethanolethanol, ,
lấy
lấy lớplớp dungdung môimôi hữuhữu cơcơ rồirồi bốcbốc hơihơi. . ĐểĐể loạiloại tanintanin cócó thểthể chocho dịchdịch chiết
GiaiGiai đoạnđoạn tinhtinh chếchế thườngthường côngcông phuphu vàvà tuỳtuỳ theotheo mỗimỗi loạiloại
glycosid
glycosid màmà cócó phươngphương pháppháp tinhtinh chếchế kháckhác nhaunhau. .
VíVí dụdụ muốnmuốn tinhtinh chếchế saponinsaponin, , cócó thểthể tiếntiến hànhhành thẩmthẩm tíchtích
hoặc
hoặc lọclọc quaqua gelgel, , cáccác steroidsteroid glycosidglycosid thìthì dùngdùng phươngphương
pháp
pháp kếtkết hợphợp cholesterolcholesterol, , mộtmột sốsố glycosidglycosid cócó thểthể tinhtinh chếchế
bằng
bằng cáchcách hoàhoà tantan trongtrong mộtmột lượnglượng cồncồn vừavừa đủđủ rồirồi thêmthêm
một
một lượnglượng lớnlớn dungdung môimôi hữuhữu cơcơ nhưnhư eteete, , hexanhexan, , axetonaxeton, ,
glycosid (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
glycosid sẽsẽ kếtkết tủatủa. .
TrongTrong nghiênnghiên cứucứu muốnmuốn thuthu đượcđược chấtchất tinhtinh khiếtkhiết ngườingười
ta
ta thườngthường dùngdùng cáccác phươngphương pháppháp: : sắcsắc kýký cộtcột, , sắtsắt kýký chếchế
hoá
hoá. (. (SGKSGK hoặchoặc SS..KK..LL.M.M.) .) phươngphương pháppháp phânphân bốbố ngượcngược
dòng
dòng, thăng, thăng hoahoa chânchân khôngkhông ởở cáccác nhiệtnhiệt độđộ vàvà ápáp suấtsuất
khác
khác nhaunhau hoặchoặc kếtkết tinhtinh phânphân đoạnđoạn trongtrong cáccác dungdung môimôi
thích
thích hợphợp. . MuốnMuốn chiếtchiết phầnphần aglyconaglycon thìthì cầncần phảiphải thủythủy
phân
ĐểĐể táchtách cáccác glycosidglycosid thìthì dùngdùng etanoletanol hoặchoặc metanolmetanol vớivới
các
các độđộ cồncồn kháckhác nhaunhau, , còncòn táchtách aglyconaglycon, dùng, dùng cáccác dungdung
môi
môi hưuhưu cơcơ theotheo độđộ phânphân cựccực tăngtăng dầndần. . VíVí dụdụ CHClCHCl3, 3,
tăng
tăng dầndần lượnglượng cồncồn từtừ (1-5%), (1-5%), theotheo dõidõi cáccác phânphân đoạnđoạn
bằng
bằng đènđèn tửtử ngoạingoại..
CácCác SapogeninSapogenin dodo khôngkhông còncòn phầnphần đườngđường gắngắn vàovào
chúng
chúng, , nóinói chungchung làlà cáccác chấtchất phânphân cựccực yếuyếu nênnên rấtrất ítít tantan
trong
trong nướcnước, tan, tan nhiềunhiều trongtrong dungdung môimôi hữuhữu cơcơ nhưnhư
Hexan
Hexan, , HeptanHeptan, , EteEte dầudầu, , BenzenBenzen, , AxetonAxeton, , CồnCồn..
TùyTùy yêuyêu cầucầu củacủa nghiênnghiên cứucứu vàvà sảnsản xuấtxuất, cần, cần chiếtchiết (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
chúng
chúng dướidưới dạngdạng SaponinSaponin hoặchoặc SapogeninSapogenin màmà chọnchọn cáchcách
chiết
Chiết
Chiết lấylấy saponinsaponin::
Có
Có 2 2 cáchcách chiếtchiết : : chiếtchiết nướcnước hoặchoặc chiếtchiết cồncồn..
1.
1.ChiếtChiết nướcnước
DượcDược liệuliệu tươitươi ( (thânthân, , củcủ, , hoahoa, , lálá, , quảquả...) ...) xayxay bộtbột ngâmngâm
với
với nướcnước mộtmột thờithời giangian (6-12 (6-12 giờgiờ). ). ÉpÉp. . DùngDùng ítít nướcnước rửarửa
bả
bả. . DịchDịch épép thuthu đượcđược, , lắclắc vớivới benzenbenzen vàivài lầnlần đểđể loạiloại chấtchất
béo
béo. . DịchDịch nướcnước loạiloại chấtchất béobéo xongxong, , chiếtchiết SaponinSaponin bằngbằng
Butanol
Butanol bảobảo hòahòa nướcnước. . DịchDịch chiếtchiết ButanolButanol đemđem cấtcất thuthu
hồi
hồi dungdung môimôi. . CácCác thứthứ đượcđược hòahòa tantan trongtrong mộtmột thểthể tíchtích
nhỏ
nhỏ EtanolEtanol. . ChoCho vàovào dungdung dịchdịch nàynày mộtmột lượnglượng gấpgấp 3 3 –– 4 4
lần
lần thểthể tíchtích dungdung dịchdịch SaponinSaponin 1 1 hỗnhỗn hợphợp gồmgồm êteête ––
axeton
axeton (1:4) (1:4) SaponinSaponin kếtkết tủatủa. . ĐểĐể lắnglắng, , lọclọc, , thuthu lấylấy kếtkết
tủa
tủa. . DịchDịch lọclọc chocho thêmthêm mộtmột lượnglượng eteete--axetonaxeton kháckhác vàovào đểđể
kết
kết tủatủa hếthết SaponinSaponin.. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
SaponinSaponin thôthô thuthu đượcđược đemđem tinhtinh chếchế vàvà kếtkết tinhtinh trongtrong cồn
cồn + + AxetonAxeton. . NếuNếu làlà dượcdược liệuliệu thôthô thìthì làmlàm bộtbột thôthô, , chiếtchiết nước
nước nóngnóng. . DịchDịch chiếtchiết côcô đặcđặc rồirồi tiếntiến hànhhành chiếtchiết SaponinSaponin bằng
2.
2. ChiếtChiết cồncồn..
BộtBột dượcdược liệuliệu khôkhô chiếtchiết nóngnóng, , hoặchoặc ngâmngâm kiệtkiệt vớivới
Etanol
Etanol hoặchoặc MetanolMetanol 80%. 80%. DịchDịch chiếtchiết cấtcất thuthu hồihồi cồncồn còncòn
nước
nước. . LắcLắc dungdung dịchdịch SaponinSaponin đậmđậm đặcđặc nàynày vớivới benzenbenzen
để
để loạiloại chấtchất béobéo. . SauSau đóđó chiếtchiết SaponinSaponin bằngbằng ButanolButanol bãobão
hòa
hòa nướcnước. . CấtCất thuthu hồihồi butanolbutanol. . CặnCặn thuthu đượcđược hòahòa vàovào 1 1
ít
ít EtanolEtanol vàvà kếtkết tủatủa SaponinSaponin từtừ dungdung dịchdịch nàynày bằngbằng hỗnhỗn
hợp
hợp eteete-axeton-axeton nhưnhư trêntrên..
TrongTrong nghiênnghiên cứucứu, , cócó thểthể kếtkết tủatủa SaponinSaponin từtừ dungdung
dịch
dịch nướcnước bằngbằng CholesterolCholesterol hoặchoặc StearinStearin. . PhứcPhức hợphợp tủatủa
được
được lọclọc lấylấy riêngriêng ( (thườngthường ápáp dụngdụng đểđể địnhđịnh lượnglượng
Saponin
Saponin))
CácCác saponinsaponin axitaxit cócó thểthể kếtkết tủatủa dướidưới dạngdạng muốimuối amoniamoni
hoặc
hoặc NatriNatri. . CũngCũng cócó thểthể ápáp dụngdụng táchtách SaponinSaponin bằngbằng cộtcột
trao
trao đổiđổi ionion : : dịchdịch chiếtchiết SaponinSaponin chocho chảychảy quaqua cộtcột anionanion. . (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Sau
Sau đóđó đẩyđẩy SaponinSaponin rara khỏikhỏi cộtcột bằngbằng dungdung dịchdịch antonanton
(
(VíVí dụdụ : : dungdung dịchdịch axitaxit axeticaxetic hoặchoặc ClohydricClohydric). ). CuốiCuối cùng
Chiết
Chiết lấylấy sapogeninsapogenin : :
Cách
Cách chiếtchiết lấylấy thẳngthẳng SapoegeninSapoegenin thườngthường ápáp dụngdụng trongtrong
sản
sản xuấtxuất, , nhấtnhất làlà sảnsản xuấtxuất SapogeninSapogenin steroidsteroid..
ĐểĐể chiếtchiết lấylấy SapogeninSapogenin, , cầncần cócó giaigiai đoạnđoạn thủythủy phânphân Saponin
Saponin thànhthành SapogetinSapogetin trướctrước khikhi chiếtchiết..
DượcDược liệuliệu tươitươi xayxay nhỏnhỏ hoặchoặc bộtbột dượcdược liệuliệu khôkhô ngâmngâm
nước
nước ấmấm 37-40 37-40oCoC. . NếuNếu cầncần cócó thêmthêm mộtmột lượnglượng enzimenzim
thủy
thủy phânphân ( (thựcthực vậtvật hoặchoặc vivi sinhsinh). ). ThườngThường thườngthường, , menmen thủy
thủy phânphân cócó sẵnsẵn trongtrong dượcdược liệuliệu tươitươi cũngcũng đủđủ đểđể tựtự
thủy
thủy phânphân SaponinSaponin. . ThờiThời giangian thủythủy phânphân tùytùy thuộcthuộc vàovào
bản
bản chấtchất củacủa từngtừng loạiloại SaponinSaponin, thường, thường từtừ 48 48 –– 72 giờ 72 giờ..
NếuNếu thủythủy phânphân bằngbằng axitaxit thìthì dùngdùng HH22SOSO4 4 hoặchoặc HClHCl. .
Đối
Đối vớivới cáccác sapogeninsapogenin cócó dâydây nốinối đôiđôi trongtrong cấucấu trúctrúc ( (VíVí
dụ
BộtBột dượcdược liệuliệu chocho vàovào nướcnước, thêm, thêm axitaxit đếnđến pHpH 1 1 –– 2 2 (
(thườngthường từtừ 5 – 5 – 10%) 10%) đunđun sôisôi 3 – 3 – 6 6 giờgiờ tùytùy theotheo loạiloại
Saponin
Saponin. . ĐểĐể nguộinguội lọclọc cảcả cặncặn thuthu đượcđược bãbã dượcdược liệuliệu đemđem (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
sấy
sấy khôkhô. Sau. Sau đóđó chiếtchiết SapogeninSapogenin bằngbằng dungdung môimôi hữuhữu cơcơ
nóng
nóng ( (hồihồi lưulưu hoặchoặc SoxhletSoxhlet). ). DungDung môimôi cócó thểthể dùngdùng làlà
Hexan
Hexan, Ete, Ete dầudầu, Benzen, Benzen hoặchoặc cồncồn. . TrongTrong sảnsản xuấtxuất côngcông
nghiệp
nghiệp, , cócó thểthể dùngdùng loạiloại xăngxăng côngcông nghiệpnghiệp tinhtinh chếchế lạilại
bằng
bằng cáchcách cấtcất đểđể làmlàm dungdung môimôi chiếtchiết xuấtxuất..
CóCó thểthể phốiphối hợphợp cảcả 2 2 cáchcách trongtrong việcviệc thủythủy phânphân
Saponin
Saponin : : thủythủy phânphân bằngbằng enzimenzim trướctrước, , sausau đóđó thủythủy
phân
phân tiếptiếp bằngbằng axitaxit..
ThủyThủy phânphân SaponinSaponin ( (nóinói chungchung làlà glycozidglycozid) ) làlà khâukhâu
kỹ
kỹ thuậtthuật rấtrất quanquan trọngtrọng. . CầnCần nghiênnghiên cứucứu cáccác yếuyếu tốtố nhưnhư
nồng
nồng độđộ axitaxit, , nhiệtnhiệt độđộ vàvà thờithời giangian thủythủy phânphân saosao chocho
thích
thích hợphợp, , vừavừa thủythủy phânphân đượcđược triệttriệt đểđể đồngđồng thờithời bảobảo
tồn
tồn đượcđược SapogeninSapogenin khôngkhông bịbị pháphá hủyhủy hoặchoặc biếnbiến đổiđổi cấucấu
trúc
Tinh
Tinh chếchế saponinsaponin
Để
Để tinhtinh chếchế, , cócó thểthể thựcthực hiệnhiện vớivới cáccác phươngphương pháppháp sausau::
a (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});