4. Các phương pháp chiết suất và tổng hợp Flavonoid
4.1 Chiết suất
Nguyên liệu được chiết với methanol, bốc hơi
methanol trong chân không hay trên nồi cách thuỷ tới cạn. Hoà tan cặn trong nước rồi chiết lại bằng ethyl
acetat. Bốc hơi dịch chiết ethyl acetat trên cách thuỷ tới cạn. Hoà tan cặn trong methanol để chấm sắc ký hoặc có thể dùng dịch chiết methanol ban đầu làm dung dịch chấm sắc ký
35
VD: Với các chất anthocyanin thường kém bền vững nhất là các acyl anthocyanin được acyl hóa với các acid aliphatic do đó người ta thường chiết bằng methanol có mặt của các acid yếu như acid acetic, acid citric,…
Không có một phương pháp chung nào để chiết suất các flavonoid vì chúng rất khác nhau về độ tan trong nước và trong các dung môi hữu cơ.
- Các dẫn chất flavon, flavonol có nhóm -OH tự do ở vị trí thứ 7 tan được trong dung dịch kiềm loãng, dựa vào đó để chiết .
- Để chiết các dẫn chất ở dạng glycoside, người ta phải loại các chất thân dầu bằng ether dầu hỏa sau đó chiết bằng nước nóng hoặc methanol hoặc ethanol hay hỗn hợp cloruafom và ethanol
- Dịch chiết đem làm đậm đặc dưới chân không ở nhiệt độ thấp (40-70 độ C) .
37
- Để phân lập từng chất flavonoid, người ta dùng phương pháp sắc khí cột .
Chất hấp phụ thông dụng cho sắc ký các flavonoid là silicagel G, bột polyamid, thường hoạt hoá ở 1200C trong 1 hoặc 2 giờ. Ngoài ra còn có thể dùng các chất khác như bột cenllulose, silicagel, magnesol,…
Dung môi
Đối với lớp mỏng silicagel G
+ Tách các Aglycol : Toluen – ethyl formiat – acid
formic (5:4:1)
+ Tách flavon: Benzen – aceton (4:1), (9:1) ;
Benzen – ethyl acetat (3:1)
Ethyl acetat – Methanol (4:1) + Tách các flavonol:
Ethyl acetat – methanol (8:2)
39
+ Tách các flavonoid glycosid :
Ethyl acetat – acid formic – nước (8:1:1) ;
Butanol – ethyl acetat- dimethyl formamid – nước
(10:6:3:2)
Ethyl acetat – methanol – nước (10:2:1), (100:16:14)
Toluen – ethyl acetat – aceton – acid formic (15:2:2:1)
Cloroform – methanol (9:1)
Ethyl acetat – acid formic - acid acetic khan—
Đối với lớp mỏng bột polyamid
Methanol – nước (8:1); (4:1) Ethanol – nước (3:2), (4:1)
Ethyl acetat – methylethylceton – acid formic – nước (5:3:1:1)
41