3.1. Định tính
+ Các chất thuộc nhóm leuco-anthocyanidin do không có nối đôi liên hiệp giữa vòng B với nhóm carbonyl nên không màu.
+ Các dẫn xuất anthocyanidin thì màu thay đổi tùy theo pH của môi trường.
Flavonoid là một nhóm hợp chất tự nhiên lớn thường gặp trong thực vật, phần lớn có màu vàng
27
Có thể dùng các thuốc thử sau:
+ Hơi amoniac : Vết flavonoid cho màu vàng. Có thể
quan sát ở ánh sáng thường hoặc dưới đèn tử ngoại (bước sóng 366nm) trước và sau khi hơ amoniac.
+ Thuốc thử Benedic : Hoà tan nóng 173g natri
citrat và 117g natri carbonat trong 700 ml nước, lọc nếu cần. Hoà tan 17,3g đồng II sulfat trong 100 ml nước. Trộn lẫn 2 dung dịch trên, khuấy đều. Để
nguội hỗn hợp rồi thêm nước vừa đủ 1000ml
Các flanon và flavonol sẽ cho vết màu vàng trên nền lơ nhạt với thuốc thử này
+ Sắt III clorid 3% trong ethanol : Tuỳ theo số lượng và vị trí của nhóm OH phenol mà cho màu lục , xanh hoặc nâu
+ Thuốc thử acid boric – acid oxalic : Gồm 15 ml dung dịch acid boric 10% và 5ml dung dịch acid oxalic 10%. Sau khi phun sấy bản mỏng ở 1200C trong 10 – 15
phút, các flavon và flavonol phát quang màu lục hay vàng lục
+ Thuốc thử Diazo : Các dẫn chất flavonoid có nhóm OH ở vị trí 7 có thể kết hợp với muối diazoni tạo thành chất màu azoic màu vàng cam đến đỏ
29
+ Thuốc thử nhôm clorid: tạo phức màu với flavonoid
Bản mỏng sau khi phun dung dịch AlCl3 1 % trong
methanol được sấy ở 1200C trong 5 phút , quan sát vết ở ánh sáng thường hay dưới đèn tử ngoại, bước sóng
366nm
+ Muối của kim loại khác: như dung dịch nước bão
hoà chì acetat cho màu vàng với flavon, màu cam với flavonol
+ Thuốc thử acid sulfuric 80%: có tác dụng khử nước
+ Thuốc thử NP/PEG : Phun dung dịch
Difenylboryloxyethylamin 1% trong methanol, sau đó phun tiếp dung dịch PEG 4000 5% trong cồn soi dưới đèn UV- 366 nm
31
3.2. Định lượng
Tuỳ vào từng loại Flavonoid mà ta có phương pháp định lượng cụ thể khác nhau
Phương pháp cân: ứng dụng khi nguyên liệu giàu có flavon hoặc flavonol và dịch chất ít tạp chất .
Đo màu: bằng phản ứng cyanidin, phản ứng kết hợp với muối diazoni, tạo phức màu với AlCl3 , muối titan, chrom …
Phương pháp đo phổ tử ngoại.
Ví dụ: